WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Функционально-морфологическая характеристика моделей экспериментального амилоидоза почек. влияние галавита

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Беликова Алина Таймуразовна

ФУНКЦИОНАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОДЕЛЕЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО АМИЛОИДОЗА ПОЧЕК. ВЛИЯНИЕ ГАЛАВИТА

14.03.03 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Владикавказ 2013

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

БРИН Вадим Борисович, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный работник высшей школы Российской Федерации, заслуженный деятель науки РСО-Алания

Научный консультант:

КОЗЫРЕВ Константин Мурадиевич, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РСО-Алания

Официальные оппоненты:

ДЗУГКОЕВА Фира Соломоновна, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РСО-Алания, заместитель директора Института биомедицинских исследований Владикавказского научного центра РАН и Правительства РСО-Алания

ОВСЯННИКОВ Виктор Григорьевич, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный работник высшей школы Российской Федерации, заведующий кафедрой патологической физиологии государственного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Ведущая организация: государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится 25 июня 2013 года в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 208.095.01 при ГБОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации (362019, г. Владикавказ, ул. Пушкинская, 40)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГБОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Автореферат разослан «24» мая 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор И.Г. Джиоев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Несмотря на успехи в изучении амилоидоза, эта проблема по-прежнему заслуживает определения, данного ей на I международном симпозиуме, посвященном амилоидозу (Гронинген, Нидерланды, 1967 г.). Тогда проблему амилоидоза сравнили со «сфинксом, о котором известно давно, но его сущность неизвестна человеку» (В.В. Рамеев и др., 2009 г.). Амилоидоз указывается в качестве одной из основных проблем здравоохранения западных стран (Fatma Briki, 2011), что обусловлено тяжестью клинических проявлений и склонностью к развитию почечной недостаточности (R. Rysava, 2007). Исходя из этого, создание новых моделей экспериментального амилоидоза у животных является перспективным, поскольку в настоящее время, несмотря на прогресс в изучении амилоидоза, нет эффективных средств, профилактики и лечения. В связи с этим поиск новых средств, обладающих высокой эффективностью и минимальным количеством побочных действий, является достаточно актуальным.

Механизм терапевтического действия галавита (МНН-аминодигидрофталазина дион натрия), модулятора функции макрофагов, обусловлен способностью препарата уменьшать синтез и секрецию провоспалительных цитокинов (TNF-фактора, ИЛ-1 и др.) гиперактивированными макрофагами, что достигается путем ингибирования в макрофагах синтеза РНК, ДНК и предотвращает развитие патологического процесса. Галавит ингибирует в легкой обратимой форме гиперактивность макрофагов лишь на время его применения (М.Т. Абидов и др., 1996). Учитывая концепцию патогенеза приобретенного амилоидоза, заключающуюся в том, что постоянно повышенное образование провоспалительных цитокинов (IL-1, IL-6 и фактора некроза опухоли TNF-) вызывает значительное увеличение синтеза острофазного белка-предшественника, сывороточного А-амилоида (SAA), концентрация которого может повышаться в 100-1000 раз (H.J. Lachmann, H.J. Goodman, J.A. Gilbertson, J.R. Gallimore, C.A. Sabin, J.D. Gillmore, et al., 2007, T. Nakamura et al., 2006), обоснованным является выбор для профилактики развития амилоидоза препарата галавит. Как уже отмечалось, его основные фармакологические эффекты обусловлены способностью оказывать влияние на функционально-метаболическую активность макрофагов. Отечественными исследователями также подтверждено основное действие препарата – обратимое ингибирование на 4—6 ч избыточного синтеза гиперактивными макрофагами фактора некроза опухоли, интерлейкина (ИЛ) -1, других провоспалительных цитокинов и активных форм кислорода (В.Н. Петров, А.Ф. Цыб, М.А. Каплан и соавт., 2001, А.А. Подколзин, В.И. Донцов, О.М. Бабижаева, 2001, M.V. Nelyubov, 2002). Эти данные позволяют предположить, что галавит может оказывать тормозящее действие на процессы синтеза и отложения амилоида.



Таким образом, учитывая вышеизложенное, можно считать целесообразным изучение возможности применения галавита как перспективного средства для профилактики и коррекции нарушений при нефропатическом типе системного экспериментального амилоидоза.

Целью настоящего исследования было создание моделей экспериментального системного амилоидоза нефропатического типа, изучение функциональных, морфологических характеристик их патогенеза и анализ возможности корригирующего влияния галавита.

Задачи исследования. Для того чтобы достичь указанной цели, в работе решались следующие задачи:

  1. Создание модели экспериментального системного нефропатического амилоидоза у хомяков методом длительного введения нативной человеческой плазмы.
  2. Создание модели экспериментального системного нефропатического амилоидоза у хомяков методом однократного введения равнодолевой смеси нативной человеческой плазмы и адъюванта Фрейнда.
  3. Проведение функционального и морфологического сопоставления 2-х моделей амилоидоза.
  4. Изучение характера функционально-морфологических изменений у хомяков, получавших в процессе моделирования амилоидоза галавит.

Новизна научной работы. Впервые разработаны методы моделирования амилоидоза путем длительного (60 дней) подкожного введения хомякам нативной человеческой плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела и однократного подкожного введения хомякам равнодолевой смеси нативной человеческой плазмы в сочетании с адъювантом Фрейнда (из расчета по 0,1 мл в пять точек инъекций). Модели сопровождались развитием системного экспериментального амилоидоза с преимущественным поражением почек, а также печени и селезенки. Определены особенности развития амилоидной нефропатии, сопровождающейся оксидативным стрессом, протеинурией, снижением основных функциональных показателей почек: водо- и электролитовыделительной функций.

Установлено, что применение галавита значительно ослабляет степень протеинурии, изменений основных функциональных показателей почек (водо- и электролитовыделительной функции), а также выраженности оксидативного стресса, развившегося в ходе моделирования экспериментального амилоидоза. Уменьшается выраженность отложения фибриллярных белков амилоида в стромально-сосудистых структурах, преимущественно в почках, а также в селезенке и печени.

Новизна работы подтверждена тремя патентами (патент №2446482, №2473133, №2473134).

Научно-практическая значимость работы. Данное исследование носит экспериментальный характер. Результаты относятся к области фундаментальных знаний, поскольку дают возможность раскрыть патогенетические механизмы развития наиболее часто встречающейся формы амилоидоза (вторичного АА-амилоидоза) и вести поиск новых эффективных фармакологических средств, обладающих профилактическим и лечебным действием. Полученные результаты исследования свидетельствуют о положительном предупреждающем влиянии галавита на формирование экспериментального нефропатического амилоидоза, что расширяет представления о возможностях моделирования амилоидоза и способствует более глубокому изучению и пониманию этиологии и патогенеза.

Таким образом, полученные результаты могут стать основополагающими для разработки способов профилактики и лечения амилоидоза не только в эксперименте, но и у человека путем последующих исследований. Полученные результаты могут быть использованы при преподавании патофизиологических и гистоструктурных основ стромально-сосудистых диспротеинозов на кафедрах патологии и нефрологии медицинских вузов.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Длительное (60 дней) подкожное введение хомякам нативной человеческой плазмы в дозе 0,025 мл/г массы тела животного через день сопровождается развитием системного амилоидоза с преимущественным поражением почек, а также селезенки и печени.
  2. Однократное введение хомякам равнодолевой смеси нативной человеческой плазмы в сочетании с адъювантом Фрейнда также сопровождается развитием системного амилоидоза с преимущественным поражением почек, а также селезенки и печени. Развитие экспериментального системного амилоидоза приводит к оксидативному стрессу, протеинурии, нарушению водо- и электролитовыделительной функций почек.
  3. Использование галавита одновременно с длительным введением нативной человеческой плазмы, а также однократным равнодолевой смеси нативной человеческой плазмы и адъюванта Фрейнда способствует уменьшению выраженности гистоструктурных признаков поражения почек, селезенки и печени.
  4. Применение галавита способствует частичному восстановлению основных функциональных показателей почек (водо- и электролитовыделительной функций), уменьшению степени протеинурии, а также снижению интенсивности процесса ПОЛ. Эффективность применения галавита при обеих моделях экспериментального амилоидоза примерно одинакова.

Личный вклад автора. Автором самостоятельно выполнена работа по получению экспериментальных данных, изложенных в диссертации. Проведена математическая и статистическая обработка результатов исследования. Проанализированы и обобщены полученные результаты.





Публикации и апробация диссертационной работы. По материалам диссертационной работы опубликовано 5 научных работ, из которых 4 в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования России.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на II международной конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (Владикавказ, 2011), X Конференции молодых ученых ГОУ ВПО «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ (Владикавказ, 2011).

Структура диссертации работы. Диссертация изложена на 123 страницах, иллюстрирована 41 рисунками и 12 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, двух глав, содержащих результаты собственных исследований, заключения, общих выводов, списка использованной литературы и приложения. Библиографический указатель включает 202 источников, из них 166 - зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал и методы исследования. Опыты проводились на 130 сирийских хомяках-самцах массой 100-150 г. Для проведения эксперимента использовались самцы для исключения возможных гормональных циклов, которые могут отмечаться у самок. Экспериментальные животные на период исследований содержались в условиях свободного доступа к пище и воде на стандартном рационе, световой режим был естественный.

Эксперименты проводились в 6 сериях опытов. Одна из моделей амилоидоза создавалась путем введения нативной человеческой плазмы инъекциями под кожу из расчета 0,025 мл/г массы тела животного через день на протяжении 60 дней. Вторая модель создавалась однократным подкожным введением равнодолевой смеси нативной человеческой плазмы и адъюванта Фрейнда в дозе по 0,1 мл в пять точек инъекций (подмышечные и паховые области слева и справа, и внутрибрюшинно). Галавит вводился подкожно в дозе 0,28 мг/кг через день в течение 60 дней. С целью контроля использовались интактная группа экспериментальных животных, а также группа с изолированным введением одного галавита в той же дозе.

Исследования основных показателей во всех опытах в группах животных проводилось через один и два месяца эксперимента. Функция почек изучалась в условиях спонтанного диуреза, когда животные помещались в обменные клетки, где у них собиралась моча в течение 6 часов. Затем проводилось исследование мочи на концентрацию натрия, калия, кальция, креатинина и общего белка.

По окончании срока эксперимента животные забивались под наркозом (тиопенталовым). Проводилось исследование крови и тканей. В крови определялись концентрация показателей оксидантной и антиоксидантной систем, в плазме крови - содержание Na, К, Са, креатинина.

При проведении экспериментальной работы руководствовались 11 Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации (1964), «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985), правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.).

Для гистологического исследования материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, заливали в парафин с дальнейшим приготовлением срезов толщиной 7-8 микрон. Затем срезы подвергались окрашиванию конго красным и изучались в проходящем свете с помощью микроскопа «Микмед – 1» под увеличением х200, х400, х600.

Определение концентрации натрия и калия в моче и плазме крови (по истечении 2-х месяцев эксперимента) проводилось методом пламенной фотометрии (автоматическим пламенным фотометром ФПА-2), кальция - спектрофотометрически (СФ-26) набором «Кальций» ООО «Агат-Мед» (г. Москва, Россия). Анализ концентрации креатинина в моче и плазме крови (по истечении 2-х месяцев эксперимента) проводился спектрофотометрически набором «Креатинин» ООО «Ольвекс Диагностикум» (г. Санкт-Петербург, Россия). Определение скорости клубочковой фильтрации проводилось по клиренсу эндогенного креатинина, рассчитывалась канальцевая реабсорбция воды. Содержание белка определяли спектрофотометрически (UNICO 2800) с использованием реактива Фоллина (Рябов С.И., Наточин Ю.В., Бондаренко Б.Б., 1979). Определение скорости клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции воды, показателя почечной обработки катионов проводилось по общепринятым формулам (Ю.В. Наточин, 1974).

Определение нижеизложенных показателей проводилось спектрофотометрически (UNICO 2800): концентрации перекисей липидов в крови - методом Гаврилова В.Б., Гавриловой А.Р., Мажуль Л.М. (под ред. Даниловой Л.А., 2003); содержания малонового диальдегида в эритроцитах - методом образования окрашенного комплекса с ТБК (Камышников В.С., 2003); активности каталазы в эритроцитах - методом E. Beutler (под ред. Даниловой Л.А., 2003).

Математическую обработку результатов исследований во всех сериях опытов проводили на ПЭВМ Pentium-4 методом вариационного анализа по «t» критерию Стьюдента с использованием программы «GraphPad Prism 4.0».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Моделирование амилоидоза с помощью длительного введения амилоидогена. Эффекты галавита. Изучение основных процессов мочеобразования показало, что у животных при моделировании амилоидоза длительным введением нативной человеческой плазмы через 1 месяц эксперимента отмечалось повышение диуреза относительно интактного фона, что было обусловлено снижением канальцевой реабсорбции воды на фоне увеличения скорости клубочковой фильтрации (СКФ). По истечении 2-х месяцев эксперимента наблюдалось достоверное снижение диуреза (р<0,001), обусловленное понижением СКФ (р<0,001) ниже значений интактной группы животных, несмотря на достоверное уменьшение канальцевой реабсорбции воды (р<0,001) (рис. 1).



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.