WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Содержание и синтез цитокинов при псориазе

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

БЕЛЬТЮКОВА
Анна Станиславовна

СОДЕРЖАНИЕ И СИНТЕЗ ЦИТОКИНОВ
ПРИ ПСОРИАЗЕ

14.00.36 аллергология и иммунология

14.00.11 кожные и венерические болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург

2009

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет имени академика И.П. Павлова» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ.

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор Тотолян Арег Артемович

Доктор медицинских наук, профессор Монахов Константин Николаевич

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Сельков Сергей Алексеевич

Доктор медицинских наук, профессор Горланов Игорь Александрович

Ведущее учреждение:

ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России

Защита состоится «______» ________________2009 года в _____ часов

на заседании диссертационного совета ДМ 001. 022. 01 при Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН (197376, Санкт-Петербург, Каменноостровский пр., д. 69/71).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИЭМ СЗО РАМН,
по адресу: 197376, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, 12.

Автореферат разослан «______» ________________________2009 года

Ученый секретарь

Диссертационного совета,

доктор медицинских наук Бурова Л.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Псориаз – хронический дерматоз мультифакториальной природы с доминирующим значением в развитии генетических факторов, характеризующийся гиперпролиферацией эпидермальных клеток, нарушением кератинизации, воспалением в дерме (Соколовский Е.В. и соавт., 1999).

Эпидемиологические исследования последних лет показали, что псориаз встречается практически во всех климатогеографических зонах земного шара, однако отмечаются расовые отличия в частоте заболевания. Распространенность псориаза варьирует в разных странах, и, по данным различных авторов, составляет от 0,1% до 2% (Lomholt G., 1963; Brandrup F., Green A., 1981; Christophers E., 2001). В Европейских странах псориаз поражает 1,5-2% популяции, в Канаде заболевание встречается с частотой до 4,7%, в Азиатских странах встречается реже (0,4% в Китае). У 14–47% больных псориазом наблюдается артрит и/или спондилит (Gladman D.D., 1998). В настоящее время число больных псориазом в России составляет приблизительно 3 млн. человек; отмечается тенденция к росту заболеваемости среди лиц трудоспособного возраста, увеличению числа тяжелых, непрерывно рецидивирующих форм заболевания (Беляев Г.М. и соавт., 2005). К настоящему времени доля больных псориазом среди всех больных дерматозами составляет 12-15% (Соколовский Е.В. и соавт., 1999). Установлено, что у 60-70% больных псориаз предшествует артриту, у 10-20% – псориаз развивается одновременно с артритом и примерно у 20% кожные проявления псориаза могут развиться после возникновения поражения суставов (Логинова Е.Ю. и соавт., 2008). Артрит предшествует развитию псориаза чаще у детей, имеющих отягощенный семейный анамнез по псориазу (Насонов Е.Л., 2008). В формировании и реализации клинических проявлений псориаза участвуют многочисленные факторы. Многие зарубежные и отечественные исследователи отмечают ведущую роль иммунных механизмов в патогенезе псориаза (Шегай М.М., и соавт., 1998; Gottlieb A.B., 2003; Pietrzak A.T., 2008).

В связи с распространенностью данного заболевания и не выясненным первичным патогенетическим механизмом, представляется актуальным исследование хемокинов, хемокиновых рецепторов, основных цитокинов, участвующих в патогенезе псориаза, и транскрипционного маркера Т-регуляторных клеток – FOXP3. Данное исследование позволит уточнить патогенез заболевания, охарактеризовать длительность и течение хронического повреждения в коже.

Цель работы. Оценить закономерности системной продукции и местного синтеза цитокинов при псориазе с целью изучения иммунопатогенеза и поиска новых биомаркеров заболевания.

Задачи работы

  1. Определить нормальные значения уровня цитокинов в сыворотке крови и в моче, а также экспрессию мРНК СС- и СXC-хемокинов в биоптатах кожи практически здоровых лиц.
  2. Определить в сыворотке крови больных псориазом содержание следующих цитокинов:
  • провоспалительных цитокинов (IL-1, IL-1, IL-9, IL-12 (p40), IL-12(p70), IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, TNF-, TRAIL, MIF, LIF; IL-2R, IFN-2);
  • противовоспалительных цитокинов (IL-10, IL-1RA);
  • Th1-цитокинов (IFN-, TNF-, IL-2,);
  • Th2-цитокинов (IL-4, IL-5, IL-6);
  • факторов иммуногемопоэза, ростовых факторов и адгезионных молекул (FGFbasic, SCF, SCGF, PDGF-BB, -NGF, VEGF, HGF, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-3, IL-7, ICAM-1, VCAM-1);
  • хемокинов (CCL27/CTACK, CXCL1/GRO, CXCL9/MIG, CXCL12/SDF-1, CCL5/RANTES, CXCL8/IL-8, CCL11/eotaxin, CXCL10/IP-10, CCL2/MCP-1, CCL3/MIP-1 и CCL4/MIP-1).
  1. Оценить содержание цитокинов (IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-, GM-CSF, TNF-) в сыворотке крови и моче у больных псориазом и у больных атопическим дерматитом и склеродермией, и в зависимости от клинической активности процесса.
  2. Исследовать экспрессию мРНК FOXP3 в визуально здоровой и пораженной коже при псориазе.

5. Определить экспрессию мРНК некоторых СС- и СXC-хемокинов и их рецепторов в визуально здоровой и в пораженной коже больных псориазом по сравнению с атопическим дерматитом и склеродермией.



Научная новизна

Впервые определена экспрессия хемокинов и хемокиновых рецепторов в коже практически здоровых лиц. Выявлено, что в коже практически здоровых лиц экспрессируются гены хемокинов (CCL4/MIP-1, CCL5/RANTES, CXCL8/IL-8) и гены рецепторов для СС-хемокинов (ССR1, CCR3 и ССR5), однако отсутствует экспрессия СС-хемокинов (CCL3/MIP-1, CCL11/eotaxin, CCL24/eotaxin-2) и рецепторов для семейства СXС-хемокинов. Показано, что у больных псориазом с индексом PASI менее 10 и с индексом PASI более 20 значительно повышено содержание в сыворотке крови: CCL4/MIP-1, CCL7/MCP-3, CCL11/eotaxin, CCL27/CTACK, CXCL1/GRO, CXCL9/MIG, CXCL12/SDF-1 по сравнению с практически здоровыми лицами, а также повышено содержание CXCL10/IP-10 в сыворотке крови у пациентов с индексом PASI < 10. Установлены особенности экспрессии генов хемокинов и их рецепторов в коже больных псориазом по сравнению с атопическим дерматитом и склеродермией. Установлена зависимость экспрессии генов хемокинов и их рецепторов в коже от распространенности и тяжести течения псориаза и псориатического артрита, а также определена их корреляция с индексами прогрессии данной патологии, индексами VAS и PASI.

Впервые определены лабораторные маркеры активности псориаза в моче: выявлена прямая корреляционная зависимость между индексом PASI и концентрациями IL-6 и IL-8 в моче при псориазе и взаимосвязь между уровнем IL-6 и содержанием белка в моче, что может указывать на диагностическую значимость этого цитокина как маркера «активности поражения почек» при псориазе. Установлена повышенная экспрессия гена FOXP3 в коже больных псориазом по сравнению с практически здоровыми лицами. Изучен уровень экспрессии гена FOXP3 в визуально здоровой и пораженной коже у больных псориазом, также установлены закономерности экспрессии этого гена по мере прогрессирования заболевания. Выявлена прямая корреляционная зависимость между уровнем экспрессии гена FOXP3 в визуально здоровой коже больных псориазом и индексом тяжести и распространенности заболевания (PASI).

Теоретическая значимость работы

В данной работе освещены три аспекта иммунопатогенеза псориаза: участие цитокинов, Т-регуляторных клеток, а также хемокинов и их рецепторов в формировании и поддержании псориатического воспаления. С помощью мультиплексного анализа цитокинов показано вовлечение в патогенез псориаза «цитокинового каскада», включающего активацию провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, Th1- и Th2-цитокинов, хемокинов, а также факторов иммуногемопоэза, ростовых факторов и адгезионных молекул. На уровне регуляторных Т-клеток было выявлено нарастающее повышение экспрессии гена FOXP3 по мере прогрессирования заболевания. Выявлена прямая корреляционная зависимость между индексом тяжести и распространенности псориаза и концентрациями IL-6 и IL-8 в моче.

Третий аспект относится к определению закономерностей повышенного местного синтеза СС- и СХС-хемокинов и хемокиновых рецепторов в кожных биоптатах больных псориазом, участвующих в формировании и поддержании воспаления в коже. Высказана гипотеза о наличии в визуально непораженной коже больных псориазом повышенного содержания мРНК хемокинов (CCL3/MIP-1, CCL4/MIP-1, CCL11/eotaxin, CCL24/eotaxin-2) и двух рецепторов для CXCL8/IL-8 (СXCR1 и СXCR2) как потенциальных биомаркеров заболевания, что наиболее значимо в дебюте псориаза, особенно при суставных его проявлениях.

Практическая значимость работы

Определение показателей повышенной экспрессии мРНК хемокинов (CCL3/MIP-1, CCL4/MIP-1, CCL11/eotaxin, CCL24/eotaxin-2) и рецепторов (СXCR1 и СXCR2) в сочетании с повышенной экспрессией мРНК FOXP3 в коже предполагается рекомендовать к использованию в клинической практике для дифференциальной диагностики псориаза, что наиболее значимо в дебюте заболевания, особенно при суставных его проявлениях. Для определения активности заболевания рекомендуется определять IL-6 и IL-8 в моче, предлагаемые «маркеры» активности псориаза, которые определяются с помощью неинвазивных методов и доступны для клинического применения. Для уточнения поражения почек при псориазе возможно определение IL-6, который коррелирует с содержанием белка в моче.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. В сыворотке крови больных псориазом значительно увеличено по сравнению с практически здоровыми лицами содержание провоспалительных цитокинов (IL-1, IL-6, IL-9, IL-12 (p40), IL-13, IL-16, IL-18, TNF-, IL-2R, IFN-2 и LIF), Th1-цитокинов (IFN-); Th2-цитокинов (IL-5), хемокинов (CCL11/eotaxin, CCL4/MIP-1, CCL7/MCP-3, CCL27/CTACK, CXCL1/GRO-, CXCL9/MIG, CXCL12/SDF-1), а также факторов иммуногемопоэза, ростовых факторов и адгезионных молекул (GM-CSF, G-CSF, M-CSF, IL-3, SCGF, -NGF, HGF и ICAM-1).





2. У пациентов с псориазом по сравнению с больными атопическим дерматитом и склеродермией повышенная экспрессия мРНК хемокинов (CCL3/MIP-1, CCL4/MIP-1, CCL11/eotaxin, CCL24/eotaxin-2), хемокиновых рецепторов (СXCR1 и СXCR2) и FOXP3 в визуально здоровой и пораженной коже сочетается с повышенным содержанием IL-6, GM-CSF, IFN- и TNF- в сыворотке крови и повышенным содержанием IL-4, IL-10, GM-CSF, IFN- и TNF- в моче.

3. Рост клинической активности псориаза сопровождается повышенным содержанием IL-2, IL-6, IL-10, GM-CSF, IFN- и TNF- в периферической крови и повышенным содержанием IL-8, IL-10, GM-CSF, IFN- в моче в сочетании с повышенной экспрессией мРНК FOXP3, хемокинов (CCL11/ eotaxin, CCL24/eotaxin-2, CCL3/MIP-1 и CCL4/MIP-1) и рецепторов для CXCL8/IL-8 (CXCR1, CXCR2) в биоптатах визуально здоровой и пораженной кожи.

Личный вклад автора

Автором лично выполнено проведение punch-биопсий у больных псориазом, групп сравнения и практически здоровых лиц. Автором проводилась оценка тяжести заболевания, подсчет интегральных индексов – PASI и VAS, проведение ПЦР диагностики (выделение мРНК из биоптатов кожи, проведение обратной транскрипции, амплификация, проведение электрофореза и детекция продуктов амплификации). Вклад соавторов состоял в помощи при отборе, клиническом обследовании больных псориазом и псориатическим артритом и групп сравнения (Ильина Т.Н., Шемеровская Т.Г., Хобейш М.М.), а также в освоении и постановке новых методов исследования (Сысоев К.А.). Доля участия автора в накоплении, обобщении, анализе материала составляет 100%.

Апробация работы

Основные положения диссертационного исследования были доложены на конференциях: Общества Молодых Ученых СПбГМУ имени акад. И.П. Павлова «Санкт-Петербургские научные чтения - 2007» (Санкт-Петербург, 2007), II Международный молодежный медицинский конгресс (Санкт-Петербург, 2007), на конференции 8-th JOHN HUMPHREY (Москва, 2007), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов» (Санкт-Петербург, 2008), Объединенный иммунологический форум – 2008 (Санкт-Петербург, 2008), XIII Всероссийском научном форуме с международным участием имени акад. В.И.Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2009). Работа поддержана грантами Правительства Санкт-Петербурга № 4/04-05/19 в 2008 и № 4/30.04/021 в 2009 году.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста, включает список сокращений, введение, обзор литературы, описание материалов и методов, содержит три главы собственных наблюдений, обсуждение результатов исследования, заключение, выводы, практические рекомендации, приложение, содержит список литературы, включающий 243 источника (20 отечественных и 223 зарубежных). Работа содержит 20 таблиц и 17 рисунков.

Публикации

По теме диссертационного исследования опубликовано 6 печатных работ, в том числе 1 публикация в научном журнале рекомендованном ВАК.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Всего обследовано 108 человек, из них 70 человек принадлежали к основной группе (пациенты с псориазом и псориатическим артритом, средний возраст 46,6±9,5 года), 20 человек составили группу сравнения (атопический дерматит, средний возраст 30,8±5,9 лет и склеродермия, средний возраст 46,1±11,8 лет) и 18 группу контроля (практически здоровые лица, средний возраст 30,9±15,3 лет). У всех больных псориазом были собраны анамнестические данные о течении заболевания. Постановка диагноза осуществлялась на основании клинической картины, рентгенологического исследования суставов, анамнестических данных и выявления в большинстве случаев антигенов HLA B27, а также на основании новых диагностических критериев, разработанных в 2006 году международной группой исследователей CASPAR (Classification Criteria for Psoriatic Arthritis).

Для определения тяжести заболевания, наряду с оценкой клинической активности, были использованы индексы оценки кожных и суставных псориатических поражений - индексы PASI (Psoriasis Area and Severity Index) и VAS (Visual Analog Scale). Оценка PASI проводилась из расчетных данных: легкая степень до 10 баллов PASI включительно, средняя степень – от 10 до 20 баллов, тяжелая – 20 баллов и более. В группе пациентов с псориазом было 20 человек с индексом PASI менее 10 (средний возраст 45,1±10,3 лет), 30 пациентов с индексом PASI от 10 до 20 (средний возраст 42,2±7,5 лет) и 20 пациентов с псориазом с индексом PASI более 20 (средний возраст 47,1±11,8 лет).

Иммунологическое исследование биоптатов и образцов сыворотки крови и мочи больных проводилось в лабораториях Научно-методического центра по молекулярной медицине на базе СПбГМУ.



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.