WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |

Исследование изменений иммунного статуса у лиц, проживающих в условиях химического загрязнения

-- [ Страница 2 ] --

Группу контроля составили 318 лиц, не имеющих профессионального и экологического контакта с токсичными соединениями.

В качестве методологической основы работы использована трехэтапная схема иммуноэпидемиологического мониторинга (Петров Р.В. и соавт., 1987, 1992; Орадовская И.В., 1991; Смирнов В.С. и соавт., 1991, 1992, 1999; Петленко С.В. и соавт., 1995, 1999; Хаитов Р.М. и соавт.,1995; Филиппов В.Л. и соавт., 2004). Существенным моментом выбранной схемы являлось использование на этапе скрининга анкеты-опросника для выявления из всей массы обследованных лиц, составляющих группу риска развития иммунологической недостаточности (Орадовская И.В., 1991; Смирнов В.С. и соавт., 1991, 1992, 1999), модифицированной С.В.Петленко (2007).

Для оценки уровня и структуры анамнестической и накопленной заболеваемости изучена и проанализирована отчетная документация медицинских учреждений ПГТ Красный Бор за период с 1990 по 2009 гг. и амбулаторные карты лиц, длительное время проживающих в условиях напряженной экологической ситуации, обусловленной загрязнением среды обитания промышленными токсичными отходами. В последующем у данной категории лиц выполнены скрининговые и углубленные лабораторные исследования состояния иммунной системы, для выявления нарушений, индуцированных неблагоприятными воздействиями факторов химической природы.

Лабораторные исследования выполнены в подразделениях НИЛ военной терапии, клинической и токсикологической лабораторий кафедры военно-полевой терапии (ВПТ) Военно-медицинской академии, медицинских учреждений (клинико-диагностических центров (КДЦ) Министерства здравоохранения и лабораторного отделения «Иммунобиосервис».

Гематологические исследования выполнены с использованием автоматических гематологических анализаторов «BECMAN-COULTER AcT-diff» (ФРГ), «ABACUS» (Англия), «ARCUS» (Австрия) и включали количественное определение клеток, их морфологические характеристики, оценку среднепараметрических данных. Аппаратное клиническое исследование крови дополнялось мануальными методиками с определением СОЭ (по методу Вестергрена), цветового показателя и оценки (подсчета) относительного и абсолютного содержания ретикулоцитов.

Выделение лимфоцитов проводили из гепаринизированной крови путем центрифугирования в градиенте плотности FICOLL-PAQUE p=1,077 (Pharmacia, Швеция) по микро-методике в модификации О.Д. Долгого (1988).

Количественные параметры состояния клеточного иммунитета оценивали по содержанию различных субпопуляций иммунокомпетентных клеток (ИКК) путем иммунофенотипирования с моноклональными антителами при помощи микролимфоцитотоксического теста.

Идентификацию субпопуляций лимфоцитов проводили путем применения двух люминесцентных зондов (Janossy G. et al., 1986), имеющих максимум флуоресценции в разных зонах видимого спектра. В качестве витального красителя использован карбоксифлуоресцеин диацетат (CFDA) (Serva, ФРГ), тропный к мембранным структурам живых клеток и имеющий свечение в зеленой зоне спектра (длина волны 530-560 нм). Для выявления лизированных клеток, использовали интерколятор – пропидиум йодид (PI) (SIGMA, США). Этот зонд способен селективно окрашивать ДНК погибших клеток с максимумом свечения в пределах красной зоны (650-710 нм) видимого спектра. Для гашения спонтанной люминесценции PI, добавляемого в заведомо избыточном количестве, применяли фирменный гаситель (FALCON, США) или смесь индийских чернил с добавлением человеческого гемоглобина.

Процентное содержание различных субпопуляций лимфоцитов оценивалось по соотношению живых и погибших клеток. В качестве положительного и отрицательного контролей применяли антилимфоцитарный глобулин (FREZENIUS, ФРГ).

Регистрацию результатов производили с помощью люминесцентного микроскопа ЛЮМАМ Р-8 (светофильтры с полосой пропускания 400-590 нм и 650-750 нм), в котором в качестве источника возбуждения люминесценции использована ртутная (200 Вт) лампа высокого давления. Учет результатов реакции проводили путем подсчета 100 клеток в одном поле зрения. Процентное содержание различных субпопуляций лимфоцитов получали расчетным способом по соотношению живых и лизированных клеток.

Оценка функциональной активности клеточных механизмов иммунного ответа включала определение пролиферативной способности (реакция бластной трансформации) и цитокинообразующей (миграционная активность) составляющей.

Из методов оценки функциональной активности иммунокомпетентных клеток (ИКК) реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) является наиболее простой и легко воспроизводимой, в связи с чем данный метод предложено использовать для скрининговой оценки состояния ИС людей, работающих и проживающих в условиях химической опасности.

РТМЛ проводили по стандартной методике в присутствии митогенов (конкавалин А, фитогемагглютинин Р). В ходе выполнения исследования также использована модифицированная методика РТМЛ, где в качестве индукторов выступают вещества, с которыми у обследованных контингентов возможен пролонгированный экологический контакт (Петленко С.В., 2007). В нашем исследовании для оценки индивидуальной чувствительности (сенсибилизации) иммунной системы использованы химические вещества из группы так называемых «маркерных» или «приоритетных» загрязнителей ГУПП «Полигон «Красный Бор» (таблица 2). При постановке методики концентрации химических веществ подбирались таким образом, чтобы исключить возможность прямого токсического (повреждающего) воздействия на клетки. Раститровкой ксенобиотиков (1:1000 – 1:12000) добивались нормального уровня реагирования (до величины индекса миграции (ИМ) 80-120%) у лиц контрольной группы, не имеющих контакта с токсичными веществами. Кроме этого, используемые для постановки РТМЛ вещества тестировали на отсутствие цитотоксичности по оценке жизнеспособности лимфоцитов в течение 36 часов.

Таблица 2

Приоритетные токсиканты, использованные для оценки реакции иммунной системы населения п. Красный Бор при проведения иммуноэпидемиологического мониторинга

Группа приоритетных токсикантов Класс опасности Вещества (или их группы), использованные при постановке РТМЛ
Полигалогенированные углеводороды II-III Перхлорэтилен+трихлорэтилен
Полицикличенские ароматические углеводороды I-II Бенз(а)пирен, дибензантрацен
Альдегиды II Формалин
Циклоалканы II – III Ортоксилол+циклогексан+толуол
Ароматические углеводороды IV Фенол
Тяжелые металлы и их соединения II-III Кобальт+цинк+никель (в виде сернокислых солей)
I Хром (CrO3), Кадмий
II Ртуть, Свинец


Оценка гуморального звена иммунной системы включала исследования количественных и функциональных параметров. Для этого применяли комплекс методик, включавший определение содержания в крови зрелых форм В-лимфоцитов (CD20+) и концентрацию в сыворотке иммуноглобулинов классов M, G и A.

Количественное определение IgM, IgG, IgA проводили по методу радиальной иммунодиффузии (РИД) или при помощи иммуноферментного анализа (ИФА).

Учет результатов РИД проводили на аппарате «ИМАТЕСТ 01» производства НИИ аналитического приборостроения (Россия), предназначенного для автоматического учета колец преципитации в агарозном геле. Расчет концентрации иммуноглобулинов выполняли с использованием компьютерной программы «IMMUN» (Долгий О.Д. и соавт., 1988).

Методы оценки факторов неспецифичекой защиты включали определение относительного и абсолютного содержания моноцитов и различных классов гранулоцитов, естественных киллеров (NK) – клеток с фенотипом CD56, а так же показателей функциональной активности полиморфноядерных нейтрофильных гранулоцитов (ПМН).

Оценка функциональной активности кислородзависимого метаболизма системы полиморфноядерных нейтрофилов проводилась по способности клеток данной популяции к восстановлению тетра-нитросинего тетразоля в диформазан (цитохимический вариант НСТ-теста). НСТ-активность системы ПМН проводилась в присутствии физиологического раствора (базальная активность) и стандартного стимулятора (зимозан – опсонизированный пулированной человеческой сывороткой). Расчет резервной метаболической емкости проводили путем вычисления отношения стимулированной активности клеток к базальной. Кислороднезависимую микробицидность клеток оценивали по активности катионных белков (лизосомально-катионный тест – ЛКТ) в результате поглощения клетками специального красителя (Fast-green, Sigma, США).

Фагоцитарную активность ПМН и МФ у обследованных лиц оценивали по способности клеток к поглощению и перевариванию стандартной культуры Staphil. Aureus (штамм № 209). Заключение о состоянии фагоцитарной активности проводили по относительному содержанию фагоцитирующих клеток (фагоцитарный индекс - ФИ), среднему числу микроорганизмов поглощенных одним фагоцитом (фагоцитарное число - ФЧ) и величине дезинтеграции микроорганизмов (показатель завершенности фагоцитоза - (ПЗФ).

Хроматографическое исследование крови на наличие алкоголя и его дериватов, а также летучих органических соединений проводили стандартным методом газохроматографического анализа равновесной паровой фазы на газо-жидкостном хроматографе «Кристалл 2000» (Россия). Фенол в накопительных средах определяли флюорометрическим методом на приборе «Флюорат-02» фирмы «Люмэкс». Наличие бенз(а)пирена выявляли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Тяжелые металлы определяли методом инверсионной вольтамперометрии на анализаторе вольтамперометрическом «АКВ-07МК». Бензол в средах определяли методом газовой хроматографии на газовом хроматографе «Кристалл-2000М».

Статистическую обработку полученных данных выполняли с использованием стандартного пакета статистических программ «STATISTICA 6.0». Массивы данных, имеющие параметрический характер распределения выборки, подвергали статистической обработке с расчетом средних показателей, средней стандартной ошибки и сигмальных отклонений. Достоверность показателей средних величин оценивали по показателю t-критерия Стьюдента. Математическую значимость различий между группами сравнения выявляли с помощью критерия Колмогорова-Смирнова и критерия X2. Критический уровень достижения нулевой статистической гипотезы (р) принимали равным 95% (p 0,05) или 99% (p 0,01).





Для анализа данных, имеющих непараметрический характер распределения в выборке, использовали корреляционной метод с определением дисперсии и расчетом коэффициентов корреляции по Спирмену и Кендаллу для 95% и 99% уровней значимости. При выявлении устойчивых корреляционных связей для определения характера математической зависимости между отдельными компартментами применяли регрессионный анализ.

результаты исследования и их обсуждение

Токсико-гигиеническая характеристика п. Красный Бор

Для оценки ксенобиотического воздействия на иммунную систему лиц, проживающих в условиях напряженной экологической ситуации проведены исследования химического загрязнения территории п. Красный Бор компонентами промышленных токсичных отходов. Полученные результаты подтвердили данные селективных исследований, выполненных другими организациями (Ласкина Б.М. и соавт., 1995; Гольцова Н.И. и соавт., 1996; Гордиенко С.Г. и соавт., 1998). О высоком уровне загрязненности территории поселка веществами из группы «приоритетных токсикантов», содержащихся в выбросах предприятия по захоронению и уничтожению промышленных токсичных отходов ГУПП «Полигон «Красный Бор». Так в 1990 году атмосферный воздух в радиусе 2-х километров от полигона содержал толуол, ксилол, фенол, формальдегид, диоксид азота, сернистый ангидрид и хлористый водород в концентрациях, превышающих ПДК в 60; 6,8; 17; 8,5; 1,7; 7,2 и 1,3 раза соответственно. При исследовании проб атмосферного воздуха (2001-2002гг.) в пределах трехкилометровой санитарной защитной зоны было идентифицировано 16 органических соединений, которые было предложено обозначать как маркерные вредные вещества выбросов полигона. Результаты собственных исследований в трехкилометровой санитарно-защитной зоне и за ее пределами показали, что толуол, ксилол, фенол, трикрезол, этилацетат и бутилацетат обнаруживались с превышением ПДК от 1,6 (трикрезол) до 37 (ксилол) раз. Сопоставление территориальных особенностей распространения и элиминации маркерных загрязнителей воздушного бассейна п. Красный Бор выявило наличие сильных корреляционных связей с приоритетными токсикантами предприятия по захоронению и уничтожению промышленных токсичных отходов, что с высокой степенью вероятности свидетельствовало о едином источнике их происхождения.

В пробах накопительных сред (почва, снег), взятых на территории п. Красный Бор, было выявлено повышенное содержание цинка, кадмия и серебра (превышение ПДК в 4,1; 7,2; 5,2 раза). Во всех точках отбора материала присутствовали шестивалентный хром и алюминий на уровне превышения ПДК 2,3-35,1 и 1,67-13,3 раза. Содержание солей этих металлов в талой воде, по сравнению с поверхностными водоемами, было выше в среднем на порядок. Исследование загрязнения снега является ценным в том плане, что в отличие от других объектов окружающей среды (почва, растения, грунтовые воды), снег накапливает только примеси, связанные с антропогенным загрязнением атмосферы в результате выбросов в окружающую среду вредных веществ, в частности – тяжелых металлов и биологически активных элементов, выпадающих далее на подстилающую поверхность в составе мокрых (снег, дождь) и сухих выпадений.

Критерием оценки уровней загрязнения снеговой воды металлами являются ПДК для воды водоемов; кроме того, принимались во внимание литературные данные о фоновом содержании определяемых элементов в снеговом покрове и уровнях их содержания в поверхностных водах незагрязненных рек. В накопительных средах п. Красный Бор отмечено суммарное повышение содержания ПАУ. Загрязнение окружающей среды вблизи полигона «Красный Бор» в зимний период осуществляется в основном за счет рассеивания дымовых газов установок термообезвреживания промышленных отходов. В процессе высокотемпературного сжигания (700-9000С) органического сырья – нефти, нефтепродуктов (мазута), различных органических веществ в составе отходов химических предприятий – наряду с основными продуктами горения (оксидами углерода, серы, азота) в числе побочных продуктов образуется и поступает в окружающую среду сложный комплекс полициклических ароматических углеводородов, насчитывающий десятки веществ, присутствующих в дымовых газах в нанограммовых концентрациях. Наличие среди них канцерогенов, токсичных веществ, высокая стабильность многих из них в окружающей среде и возможность многолетнего накопления в почве, донных отложениях – создают опасность для состояния среды и здоровья человека.

Данные математического моделирования указывают на то, что выбросы ГУПП «Полигон «Красный Бор» являются основным источником поступления в окружающую среду одноименного населенного пункта фенантрена, флуорантена и хризена (Ласкина Б.М. и соавт., 1995; Гольцова Н.И. и соавт., 1996; Гордиенко С.Г. и соавт., 1998).

Исследование состава грунтовых вод и питьевой воды из колодцев выявило высокую загрязненность этих объектов окружающей среды мышьяком (1-2 ПДК), хромом (1,9-2,5), магнием (1,6-2,8), селеном (1,5-2,1). В анализах питьевой воды установлено наличие следовых концентраций органических соединений, характерных для выбросов полигона. На уровне долей ПДК были обнаружены толуол, ксилол и бутилбензол (Гольцова Н.И. и соавт., 1996; Гордиенко С.Г. и соавт., 1998; Нагорный С.В. и соавт., 2001; Крупнов О.Р. и соавт., 2003).



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.