WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 17 |

Исследованияаутоантител к ферментамантиоксидантной системы ипуринового метаболизма убольныхревматоиднымартритом

-- [ Страница 1 ] --

На правахрукописи

АЛЕКСАНДРОВ

АндрейВячеславович

КЛИНИКО-ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯАУТОАНТИТЕЛ К ФЕРМЕНТАМАНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ИПУРИНОВОГО МЕТАБОЛИЗМА УБОЛЬНЫХ
РЕВМАТОИДНЫМАРТРИТОМ

14.00.39 – ревматология

А в т о р е ф е р а т

диссертации насоискание ученой степени

докторамедицинских наук

Волгоград – 2009


Работа выполнена в НИИклинической и экспериментальной ревматологии РАМН и ГОУВПО «Волгоградский государственный медицинскийуниверситет» Росздрава

Научныйконсультант:

доктор медицинских наук,профессор

ЗБОРОВСКАЯ ИринаАлександровна

Официальныеоппоненты:

доктор медицинскихнаук, профессор

Мач ЭвелинаСеменовна

доктор медицинскихнаук, профессор

Коршунов НиколайИванович

доктор медицинскихнаук

ЦыбулинаЕкатерина Васильевна

Ведущаяорганизация:

ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет» Росздрава

Защита состоится «__»_________ 2009 г. в ___ часов на заседании
Диссертационного совета Д 208.008.02 приГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинскийуниверситет» Росздрава по адресу: 400131, г.Волгоград, пл. Павших борцов, 1.

С диссертацией можноознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО«Волгоградский государственныймедицинский университет»Росздрава.

Авторефератразослан «___» __________ 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационногосовета Д 208.008.02

доктор медицинскихнаук, профессор А.Р. Бабаева

ВВЕДЕНИЕ

Ревматическиезаболевания (РЗ) занимают важное место вструктуре заболеваемости населения и имеют огромноесоциально-экономическое значение. Средимногочисленной группы РЗ одно из ведущихмест по распространенности и частотеинвалидизациилиц, причем, молодого, наиболеетрудоспособного возраста отводится ревматоидномуартриту (РА), регистрируемость которого столь велика, чтопривлекает к себе внимание ведущих ученыхмира и врачей различныхспециальностей [Андрианова И.А., 2007; Зборовский А.Б., 2007; Насонов Е.Л.,2007].

Хроническоепрогрессирующее, нередко инвалидизирующеетечение РА ставит перед врачамизадачу возможно более ранней егодиагностики. Однако распознавание РА на раннейстадии представляет значительныетрудности. По настоящее время не найдено строгоспецифичного для РА лабораторного теста.Только сочетание многих клинических и лабораторныхпризнаков может оказать помощь вдиагностике этого заболевания. Поэтому и сейчаспродолжается поиск методов, позволяющихдифференцировать ревматоидный артрит средимножества воспалительных идегенеративных болезней опорно-двигательногоаппарата.

По современнымпредставлениям, поражение соединительной тканипри РА является следствием развивающихсяиммунопатологических нарушений. Обаутоиммуннойприроде РА свидетельствует ряд признаков:выявление ревматоидного фактора,циркулирующих иммунных комплексов,сенсибилизированных к компонентамсоединительной ткани лимфоцитов, а такжеширокого спектра аутоантител (Ат). Иммуннаясистемаобладает определенной автономностью враспознавании и удалении чужеродных клеток,антигенов и других веществ, но, наряду сэтим, она находится под строгим гомеостатическимконтролем, участие в котором принимает имножество биохимических реакций [Мартемьянов В.Ф., 2006].Существующая биохимическаягетерогенность РА, очевидно, обусловлена наличиемконституциональной биохимическойиндивидуальности человека и зависит от нарушенийименно надмолекулярного порядка,затрагивающих клеточные, тканевые, системныеуровни.

Активно обсуждаетсявопрос об участии в патогенезеаутоиммунных заболеваний различныхнарушений, связанных с метаболическимипроцессами, происходящими на клеточном илисубклеточном уровнях, медиаторами которыхявляются ферменты. Биохимические реакции,составляя материальную основу всехфункциональных процессов организма, несутадаптационную, гомеостатическую миссию.

В последние годыпристальное внимание уделяют участиюактивных форм кислорода и антиоксидантной системы(АОС) вфизиологических и патологических процессах, в том числе и приРЗ. Теоретическим обоснованием участиясвободных радикалов в патогенезе аутоиммунных РЗявляется способность повреждать белки,липиды, ДНК,придавая им свойства аутоантигенов ипровоцируя выработку аутоантител [Foltyn V.N., 2001; Bombardier C., 2005].Недостаточность антиоксидантной защитыпри РА, выражающаяся в накоплении вторичныхпродуктов свободнорадикальных реакций может бытьсвязана с образованием антител кферментам-антиоксидантам.

Такжевозрос интерес к изучению метаболизмапуриновых соединений в норме и при патологии.Это связано не только со значением данногоцикла в обмене нуклеиновых кислот, но и стой важной биологической ролью, которуювыполняют его отдельные, составные части: ферменты ипромежуточные субстраты. Сактивностью аденозиндезаминазы, являющейся ключевымферментом пуринового метаболизма (ПМ), тесно связаны иммунологическиепроцессы в организме. От активностиданного фермента зависит внутриклеточнаяконцентрация аденозина и дезоксиаденозина– пуриновых метаболитов,играющих важную роль в процессахкооперативных взаимодействий клеток иммуннойсистемы. Снижение активности аденозиндезаминазыи следующиеза этим многочисленные изменения,являющиеся результатом накопления вклеткетоксических концентраций аденозина,дезоксиаденозина и соответствующихнуклеотидов,а также блокады рибонуклеотидредуктазы,приводят, вконечном счете, к остановке биосинтеза РНК, ДНК и гибеликлеток.



С активностью ряда ферментов гуаниновой ветвиобмена пуриновых производных связаныпроцессы созревания Т-клеток и развитиеТ-клеточного иммунитета в организме, процессыдеградации пуринового нуклеозида – гуанозина,обладающего выраженными регуляторной ифизиологической активностями.

Связующим звеном междудвумя ферментными системами (АОС и ПМ)выступаетксантиноксидаза – эндогенный фактор,способствующий интенсификациисвободнорадикального окисления и процессовперекисного окисления липидов (ПОЛ).Ксантиноксидаза действует назаключительном этапе пуриновогометаболизма, окисляя ксантин и гипоксантиндо мочевой кислоты. Своеобразие действияэтого фермента заключается в том, что он представляетсобой как бы комплекс, функционирующий двояко:фермент может работать как оксидаза, и какдегидрогеназа. По соотношениюактивностиксантиноксидазы и ксантиндегидрогеназыможно судить о напряженности оксидантных иантиоксидантных процессов.

Согласно данным рядаавторов [Заводовский Б.В., 2004; Гонтарь И.П.,2006] у больныхРА наблюдаются существенные измененияактивности ряда ферментовАОС и пуринового метаболизма всыворотке крови, которые вряде случаев коррелируют сактивностьюпатологического процесса. Учитываяхарактерные иммунологические нарушения приаутоиммунных заболеваниях, можнопредположить, что изменение энзиматическойактивности ряда ферментов пуриновогометаболизма может быть связано с гиперпродукциейаутоантител кним.

Имеющиеся влитературе сведения поизучению Ат кэнзимам АОС и ПМ при некоторых РЗ [LeeJ.Y., 2002; Негметзянова Е.С., 2006; КотельниковаО.В., 2007]разрознены,как правило, противоречивы и, главное, несистематизированы. При этом следует отметить, чтопатологическое действие подобных антителдо конца не определено. В связи с этимпредставляется перспективным комплексноеисследование у больныхРА антител к основным ферментам АОС–супероксиддисмутазе(СОД), глутатионредуктазе (ГР), каталазе (КАТ),церулоплазмину (ЦП) и основнымферментам ПМ– аденозиндезаминазе(АДА), 5'-нуклеотидазе(5'-НТ),пуриннуклеозидфосфорилазе(ПНФ),гуаниндезаминазе(ГДА), ксантиноксидазе (КО), что позволит выяснить некоторыедеталипатогенеза данного заболевания, будетспособствовать более точнойоценки активности патологического процессаи выработкеусовершенствованных способов диагностики РА и дифференциальной диагностикивоспалительных и дегенеративно-дистрофическихзаболеваний суставов.Результаты исследования могут датьдополнительные критерии эффективностипроводимой терапии, что, в конечном итоге, поможетоблегчить состояние больных РА и уменьшитьзатраты, связанные с этим страданием.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящегоисследования является повышение качествадиагностики, дифференциальнойдиагностики, уточнение отдельных звеньевпатогенеза, объективизация контроля эффективностипроводимой терапии при ревматоидном артрите путемизучения процессоваутоантителообразования к ферментамантиоксидантной системы и пуринового метаболизма.

Для достижениянамеченной цели были поставлены следующиезадачи:

  1. Получить иммобилизированные формыСОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДАи КО, изучить ихфизико-химические свойства.
  2. Отработать условия и техникупостановки иммунофлуоресцентного и иммуноферментного анализа с использованиемиммобилизированных антигенных препаратов на основе энзимов АОС иПМ для определенияспецифических аутоантител;провестивыбор предпочтительной методики.
  3. Изучить иммунобиохимическиесвойства иммобилизированных ферментов АОС и ПМ вусловиях invitro.
  4. Изучить содержания аутоантител кСОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ,ПНФ,ГДА и КО в сыворотке кровиздоровых людей и определить границы нормы этихпоказателей взависимостиот пола и возраста.
  5. На основе разработанных методикиммуноанализа изучитьсодержание антител кСОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, ГДА, 5'-НТ, ПНФ и КО всыворотке крови больных ОАв зависимости от клинико-иммунологическихособенностей заболевания.
  6. На основе разработанных методикиммуноанализа изучить содержаниеаутоантител кСОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО всыворотке крови больных РА в зависимости от активности,характера течения, наличиясистемных проявлений и другихклинико-иммунологическихособенностей заболевания.
  7. Исследовать взаимосвязь процессоваутоантителогенеза к ферментам АОС и ПМ с изменением активности ферментовв сывороткекрови больных РА.
  8. Провести оценку качества жизни,связанного со здоровьем, у больных РА иОА.
  9. Исследовать динамику содержания антиферментныхантител у больных РА на стационарном этапенаблюдения и оценитьвозможность использования предлагаемых тестов вкачестве показателей эффективностипроводимой терапии.
  10. Определить диагностическоезначение антител к СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ,ПНФ, ГДА и КО в сыворотке крови придифференциальной диагностикевоспалительных идегенеративно-дистрофическихзаболеваниях суставов.
  11. Разработать и реализовать программно-информационныйкомплекс поддержки диагностики РЗ ипроверить эффективность разработанныхметодов и алгоритмов в ходе опытной эксплуатациидиагностического комплекса.

НАУЧНАЯ НОВИЗНАРАБОТЫ

Впервые дана комплексная оценка процессовантителогенеза к ферментам антиоксидантнойсистемы и пуринового метаболизма у больныхРА. Дляиммунодиагностики воспалительных идегенеративно-дистрофических заболеванийсуставов разработаны и применены в методахлабораторного анализаиммобилизированные формы основных энзимовантиоксидантной системы и пуриновогометаболизма;подобраныоптимальные концентрации антигенов иопределены соответствующие условияиммобилизации ферментов, позволяющиесохранять их биологические функции.





В сыворотке кровибольных РА обнаружены антитела к СОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА,5'-НТ, ПНФ, ГДА и КО. Показано, что их уровеньдостоверно отличается от содержания данныхантител в сыворотке крови здоровыхлиц и больныхс другимиРЗ, протекающими с выраженнымсуставным синдромом.

Впервые проведенокомплексное сравнительное исследованиесодержания аутоантител к ферментамантиоксидантной системы и пуриновогометаболизма в сыворотке крови больныхРА. Проанализированазависимость указанных показателей отактивностии характера течения патологического процесса, наличия системных проявленийзаболевания. Выявлено, что концентрация антител кСОД, ГР, КАТ, ЦП, АДА, 5'-НТ,ПНФ, ГДА иКО у больных РА коррелируетс активностью патологического процесса, а наличие системныхпроявлений сопровождается максимальнымизначениями исследуемых аутоантител.Динамика содержания аутоантител кферментам антиоксидантной системы ипуринового метаболизма позволяетпрогнозировать клиническое течение РА и судить обэффективности проводимой терапии.

Впервые призаболеваниях суставов изученыкорреляционные связи между ферментативнойактивностью и содержанием аутоантител квключенным в исследование энзимам;прослежена связь с наиболее важнымиклиническими симптомами заболеваний.Данаоценкавозможностииспользования разработанныхиммунологических тестов дляпрогнозирования течения РА идифференциальной диагностики воспалительных и дегенеративно-дистрофических заболеванийсуставов.

Созданпрограммно-информационный комплексподдержки диагностики РЗ,которыйпоказал свою эффективность в опытнойэксплуатации.

ПРАКТИЧЕСКАЯЦЕННОСТЬ

Разработана доступнаядля применения в клинических лабораторияхметодикаиммуноферментного определения уровняантител к ферментам АОС и ПМ. Проведенные исследования показали достоверныеразличия всодержании антител к энзимам АОС и ПМ убольных с воспалительными идегенеративно-дистрофи­ческимизаболеваниями суставов, что позволяетиспользовать данные тесты вместе с другимиклинико-лабораторными показателями длядифференциальной диагностики этихзаболеваний.Определение антител кэнзимам АОС и ПМ в динамике дает возможностьсудить об эффективности и адекватностипроводимой на стационарном этапе терапии;положительная динамика уровней антител к изучаемым энзимам коррелирует с клиническим улучшением при РА.

Опытная эксплуатацияразработанногопрограммно-информационного комплекса поддержкидиагностики ревматических заболеванийпоказала эффективность его применения вклинической практике; использованиекомплекса позволилоуменьшить количество исследований,проводящихся при диагностике РА, сократитьвремя диагностики и затраты на ее проведение.

ОСНОВНЫЕПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НАЗАЩИТУ

  1. Содержание антител к ферментам АОСи ПМ в сыворотке кровизависит от активности и тяжести воспалительныхревматических заболеваний.
  2. Определение уровняантиэнзимных антител можетиспользоваться для диагностики активности патологическогопроцесса при РА, дифференциальной диагностики и дляконтроляэффективности проводимой терапии.
  3. Одной из причин снижения ферментативной активностибольшинства энзимовАОС и ПМ при РА является усилениеантителогенеза к даннымферментам.
  4. Наиболее ценным сдиагностической точки зрения при разграничении РА от других ревматическихзаболеваний, протекающих с суставнымсиндромом, является определениеиммуноферментным методом с помощьюиммобилизированных антигенных препаратов всыворотке крови антител к 5'-НТ и ПНФ.

ПУБЛИКАЦИИ ИАПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

По теме диссертацииопубликовано 73 печатные работы, из которых 47 – в центральной, 18– в местной,8 – в зарубежнойпечати, в том числе 14работ в изданиях, рекомендованных ВАК дляопубликования основных результатовдиссертаций на соискание ученой степени доктора медицинскихнаук.

Материалы диссертациибыли представлены на ежегодных научно-практическихконференцияхВолгоградского государственногомедицинского университета (2000-2008 гг.),научныхконференциях НИИ КиЭР РАМН (1998-2009 гг.),симпозиумах EULAR (Стокгольм, Швеция, 2002; Берлин,Германия, 2004; Вена, Австрия, 2005; Амстердам,Нидерланды, 2006; Париж, Франция, 2008), Съездеревматологов России (Рязань, 2001; Казань, 2005; Москва,2009), Российском национальном конгрессе«Человек и лекарство» (Москва, 1996, 1998, 2000, 2001, 2003,2005, 2007, 2008), Национальном конгрессе терапевтов(Москва, 2006, 2007, 2008), научно-практическойконференции «Актуальные проблемы внутреннейпатологии» (Челябинск, 2001), Всероссийскойконференции«Проблемы медицинской энзимологии»(Москва, 2002), Всероссийской научно-практическойконференции «Новые технологии в лечении иреабилитации больных с патологиейсуставов» (Курган, 2004), Международнойконференции «Клинические исследованиялекарственных средств» (Москва, 2004, 2005),Всероссийском научном форуме«Инновационные технологии медицины XXI века» (Москва, 2006),Международной Пироговской научноймедицинской конференции (Москва, 2007, 2008), Всероссийскойнаучно-практической конференции«Актуальные вопросы клиники, диагностики илечениябольных в многопрофильном лечебном учреждении»(Санкт-Петербург, 2007, 2008, 2009), международнойконференции «Гемореология и микроциркуляция»(Ярославль, 2007), V национальной научно-практическойконференции с международным участием«Активные формы кислорода, оксид азота,антиоксиданты и здоровье человека»(Смоленск, 2007),юбилейной ХVМеждународной конференции «Ломоносов» (Москва, 2008),VII Съездеаллергологов и иммунологов СНГ(Санкт-Петербург, 2009), XIII Всероссийском форуме«Дни иммунологии в Санкт-Петербурге»(Санкт-Петербург, 2009).



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 17 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.