WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Т и с о в а элина рафаэловна клинико-диагностическое значение определения антител к эластину и эластазе у больных системной склеродермией с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

А В Е Т И С О В А Элина Рафаэловна

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ЭЛАСТИНУ И ЭЛАСТАЗЕ
У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ СКЛЕРОДЕРМИЕЙ
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММОБИЛИЗИРОВАННОЙ ФОРМЫ МАГНИТОУПРАВЛЯЕМОГО СОРБЕНТА

14.01.22 Ревматология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Волгоград 2013

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Российской академии медицинских наук «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии» Российской академии медицинских наук и Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Гонтарь Илья Петрович

Официальные оппоненты: Ребров Андрей Петрович

доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского»

Министерства здравоохранения Российской Федерации, зав. кафедрой госпитальной терапии

Чижов Петр Александрович

доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Ярославская медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, зав. кафедрой факультетской терапии

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И.Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «___»______________2013 г. в ___ часов на заседании диссертационного совета Д 208.008.08 при ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (400131, Россия, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Автореферат разослан «___» апреля 2013 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Магницкая Ольга Валерьевна

Актуальность проблемы

Генерализованный прогрессирующий фиброз, являющийся нозологической особенностью системной склеродермии (ССД), определяет неблагоприятный прогноз, а преимущественное поражение лиц трудоспособного возраста обусловливает серьезные экономические потери вследствие заболевания. Ранняя диагностика ССД позволяет не только повысить эффективность лечения и сократить его сроки, но и реализовать принцип комплексности и дифференциации, наиболее актуальные в начальной стадии заболевания [Гусева Н.Г., 2007]. Совершенствование методов ранней диагностики и дифференциальной диагностики ревмати­ческих заболеваний является сегодня приоритетным направлением ревматологической науки. В качестве основополагающих критериев подобных разработок позиционируются не только клиническая, но и экономическая эффективность и целесообразность [Насонова В.А., 2001].

Этим требованиям в полной мере соответствуют модификации имму­ноферментного метода анализа (ИФА) с использованием иммобилизированных гранулированных препаратов (ИГАП) с магнитными свойствами. Наряду с технической доступностью метод отличает высокая чувствительность и экономичность, что достигается повышенной стабильностью иммоби-лизированного биополимера и возможностью регенерации сорбента [Гонтарь И.П., 2006, Зборовский А.Б., 2001].

Актуальность изучения эластина в качестве антигена определяется большой распространенностью его в органах и тканях. Эластазы, в свою очередь, представляют интерес не только в качестве основных участников катаболизма эластина, но и как медиаторы воспалительных процессов [Hayakawa T. al., 1995]. Равновесие в системе «эластин – эластаза» определяет физиологическое функционирование органов и тканей, содержащих эластические волокна. Нарушение обмена эластина, появление измененных растворимых изоформ с последующим запуском механизмов аутоиммунитета может обусловливать причастность изучаемого биополимера к патогенезу полиорганной патологии при системном склерозе.

Антителообразование к эластину и эластазе при ССД представляет собой не вполне изученную проблему. Проведенные в этом направлении исследования единичны и не содержат анализа изучаемых аутоантител в зависимости от характера течения, активности и клинических форм заболевания [Gminski J. et al., 1990, 1996, Zhao M.H. et al., 1998., Lyons R. et al., 2005]. Исследование диагностически-прогностического значения уровня антител к эластину и эластазе и возможных корреляционных связей между этими показателями у больных ССД представляет собой перспективное направление, способное повысить качество диагностики ревматических заболеваний и пролить свет на отдельные механизмы их патогенеза.



Цель исследования

Целью настоящего исследования являлось усовершенствование иммунологической диагностики системной склеродермии с помощью иммобилизированных форм эластина и эластазы.

Основные задачи исследования

  1. Применяя иммобилизированные формы эластина и эластазы, изучить распространенность и концентрацию антител к эластину и эластазе в сыворотках крови здоровых лиц, больных системной склеродермией, а также контрольной группы, состоящей из пациентов с синдромом Рейно, системными васкулитами, ревматоидным артритом и системной красной волчанкой.
  2. Выполнить поиск статистических взаимосвязей между клиническими особен­ностями системной склеродермии и содержанием антител к эластину и эластазе.
  3. Изучить статистическую взаимосвязь между концентрацией антител к эластину и концентрацией антител к эластазе у больных системной склеродермией и пациентов контрольной группы.
  4. Оценить эффективность использования антител к эластину и эластазе для дифференцирования системной склеродермии от других аутоиммунных ревматических заболеваний.

Научная новизна

Впервые для диагностики ССД созданы и применены в варианте иммуноферментного метода анализа иммобилизированные препараты эластина и эластазы, подобраны оптимальные концентрации антигенов и определены условия проведения ИФА с использованием ИГАП.

Показано, что уровень антител к эластину и эластазе достоверно отличается от содержания данных антител в сыворотках крови здоровых лиц и лиц контрольной группы. Выявлена корреляция между уровнем антител к эластину и эластазе и степенью активности и характером течения ССД. Установлено, что максимальные значения исследуемых антител наблюдаются при поражении суставов, легких и сердечно-сосудистой системы.

Практическая ценность

Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня антител к эластину и эластазе на основе иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами. Показано, что выявление антител к эластину и эластазе в предложенной методике ИФА может быть использовано в качестве дополнительного теста для диагностики и дифференциальной диагностики системной склеродермии, оценки активности и прогнозирования клинического варианта заболевания.

Основные положения, выносимые на защиту

На защиту выносится положение о возможности определения антител к эластину и эластазе с помощью методов иммуноферментного анализа на основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами у больных ССД. Исследование антител к эластину и эластазе может быть использовано в качестве дополнительного теста для диагностики и дифференциальной диагностики системной склеродермии, оценки активности и прогнозирования клинического варианта заболевания.

Публикации

Основные положения диссертации изложены в 11 печатных работах, из которых 6 – в местной печати и 5 – в центральной, в том числе 4 – в изданиях, рецензируемых ВАК. Материалы диссертации были представлены на ежегодной научной конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и Клинической медицины» ВолГМУ (2009–2011гг.); конференции «Актуальные проблемы современной кардиологии и терапии» – Киров, 2009 г.

Первичная экспертиза диссертации была проведена на совместном заседании Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии» Российской академии медицинских наук и кафедры госпитальной терапии ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ.

Внедрение в практику

Методы определения антител к эластину и эластазе с использованием иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами внедрены в практику работы ГУЗ ГКБ №25 г. Волгограда.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, содержащих обзор литературы, клиническую характеристику исследуемых групп, методы исследования, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы и практические рекомендации. Диссертация иллюстрирована 27 таблицами и 10 рисунками, приведено 2 выписки из историй болезни. Указатель литературы содержит 239 источников, в том числе 111 – отечественных и 128 – зарубежных.

Методы исследования

Исследование проводили в соответствии с принципами Хельсинкской декларации Международной медицинской ассоциации, принятой в 1996 году, и рекомендациями по этике биомедицинских исследований. Соблюдение требований биоэтики подтверждено результатами экспертизы Регионального этического комитета.

Для выполнения поставленных задач были сформированы группа больных с верифицированным диагнозом ССД, а также контрольная группа. В состав последней были включены пациенты с ревматическими заболеваниями, наиболее часто вызывающими затруднения при дифференциальной диагностике с ССД.





Для установления нормальных характеристик изучаемых лабораторных показателей использовали референтную группу, состоящую из 30 практически здоровых лиц – доноров Волгоградской областной станции переливания крови (19 женщин и 11 мужчин в возрасте от 22 до 50 лет), прошедших тщательное медицинское обследование.

В качестве антигенов были использованы коммерческие препараты компании «SIGMA-ALDRICH» (США): препарат эластазы панкреатической из панкреатической железы свиньи (Elastase pancreatic from porcine pancreas, Сat. № Е1250) и препарат эластина из легкого человека (Elastin from human lung, Cat. № Е7152).

Антитела к эластину и эластазе определялись твердофазным иммуноферментным методом с использованием иммобилизированных гранулированных препаратов (ИГАП). Иммобилизацию производили методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с включением магнитного материала в структуру полиакриламидного геля [Зборовский А.Б., Гонтарь И.П., 2001]. Результаты учитывали на ИФА-ридере Multiskan EX (Thermo Electron Corporation, Шанхай, КНР) при длине волны 450 нм. Полученные значения выражали в условных единицах оптической плотности (е.о.п.), которые вычисляли как разность между средним значением оптических плотностей исследуемого образца и средним значением фона.

В ходе измерения использовали найденные нами оптимальные уровни концентрации иммобилизированных эластина (1,5 мкг/мл), эластазы (2,5 мкг/мл) и рабочего разведения сыворотки (1:200).

Результаты статистической обработки представляли в форме: «среднее арифметическое ± среднее квадратическое отклонение» (М±) либо среднее арифметическое (95% доверительный интервал) (М (95% Ди)).

Количественную оценку эффективности диагностического теста производили путем анализа четырехпольной таблицы и вычисления общепринятых операционных характеристик – чувствительности, специфич­ности, отношения правдоподобия положительного и отрицательного результатов [Гринхальх Т., 2006, Флетчер Р., 1998]. Перечисленные показатели были представлены в виде значений.

Поиск оптимальных точек разделения между исследуемыми группами осуществляли с помощью непараметрического варианта ROC-анализа с помощью программы SPSS 12.0 for Windows. При нахождении границы между положительными и отрицательными результатами измерения концентрации антител к эластину и эластазе принимали во внимание необходимость преимущественного исключения ошибок I типа. Напротив, при установлении точки разделения между больными ССД и контрольной группой руководствовались необходимостью минимизации ошибок как I, так и II типа. Эффективность дифференцирования ССД от контрольной группы проверяли раздельно для положительных и отрицательных результатов с помощью отношений правдоподобия положительного (LRP) и отрицательного результата (LRN), учитывая зависимость этих показателей от значения точки разделения.

Общую точность отдельного диагностического теста оценивали с помощью площади под непараметрической характеристической кривой (AUC). Достоверность отличия данного показателя от 50% (абсолютной неинформативности) и от 100% (референтного стандарта) определяли с помощью 95% доверительного интервала. Различие между точностями двух диагностических исследований тестировали посредством сравнения их AUC с помощью z-статистики [N.A. Obuchowski,2005].

В случае превышения точки разделения 0,104 е.о.п. для антител к эластину и 0,113 е.о.п. для антител к эластазе значения оптической плотности считали отражающими концентрацию изучаемых антител, в противном случае результат считали отрицательным.

Клиническая характеристика исследуемых групп

Под наблюдением находились 42 больных ССД (11 мужчин и 31 жен­щина в возрасте от 22 до 72 лет) и 40 больных другими ревматическими заболеваниями: системной красной волчанкой (10), ревматоидным артритом (22), синдромом Рейно (3), системными васкулитами (10).

Среди больных ССД инвалидность по основному заболеванию имели 24 человека (57,1%), из них III группу инвалидности - 15 человек (35,7% от общего числа больных), II группу – 9 человек (21,4%). Причем, преобладали лица наиболее социально-активного возраста (58,3% в возрасте до 55 лет).

Диффузная форма ССД была диагностирована у 18 пациентов (42,9%), лимитированная – у 24 (57,1%).

Минимальная активность заболевания выявлена у 16 человек (38,1%), умеренная – у 22 (52,4 %), высокая – у 4 (9,5%) пациентов.

При оценке течения ССД по классификации Н.Г Гусевой были получе-ны следующие результаты: у 2 пациентов (4,8%) имело место острое (быстро прогрессирующее) течение ССД, у 15 (35,7%) – подострое (умеренно про-гресссирующее) и у 25 (59,5%) – хроническое (медленно прогрессирующее) течение.

Медиана продолжительности болезни в наблюдаемой группе составила 9,2±7,4 лет (диапазон от 2 до 27 лет). 7 пациентов (16,7%) имели стаж заболевания менее 5 лет, 10 (23,8%) – 6 - 10 лет, 12 (28,6%) – 11 - 15 лет, 8 (19,1%) – 16 - 20 лет, 5 (11,9%) более 20 лет.

Оценка этапа и динамики болезни проводилась с выделением стадии ССД по Гусевой Н.Г. (2007 г.). В результате у 5 пациентов (11,9%) была диагностирована начальная стадия (I) с преимущественным поражением опорно-двигательного аппарата и синдромом Рейно, у 29 (69,1%) – стадия генерализации (II) с характерным комплексом периферических и вис­церальных проявлений и у 8 (19,1%) – поздняя (терминальная) стадия с явлениями полиорганной недостаточности и далеко зашедшими фиброзно-склеротическими, дистрофическими и сосудисто-некротическими изменениями.

Выделение клинического варианта ССД включало детальную характе­ристику кожного синдрома, сосудистых проявлений, поражения опорно-двигательного аппарата. Анализ висцеральной патологии проводился отдельно для каждой системы на основании критериев Medsger Т. (1999г.) в модификации Гусевой Н.Г., Невской Т.А. (2006г.).



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.