WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 10 |

Аналитические подходы к лабораторной диагностике социально значимых вирусных заболеваний

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

СИДОРОВА ИРИНА ФЛУРОВНА

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ

К ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ

СОЦИАЛЬНО ЗНАЧИМЫХ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

14.03.10 – клиническая лабораторная диагностика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

САРАТОВ – 2010

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации»

Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор

Гильмиярова Фрида Насыровна;

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Коршунов Геннадий Васильевич;

доктор медицинских наук, профессор

Высокогорский Валерий Евгеньевич;

доктор медицинских наук, профессор

Девдариани Зураб Леванович

Ведущая организация – Российский государственный медицинский университет имени Н.И.Пирогова.

Защита состоится «__ » ___________2010 г. в ___ часов на заседании диссертационного совета Д 208.094.04 при ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И.Разумовского Росздрава» по адресу: 410012, г.Саратов, ул. Большая Казачья, д.112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И.Разумовского Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации».

Автореферат разослан «____» ______________2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор В.Б.Бородулин


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время в связи с ростом заболеваемости гепатитами В, С и ВИЧ актуальным является поиск способов повышения эффективности выявления инфицирования возбудителями этих социально значимых инфекций. По данным ВОЗ, ежегодно в мире вирусом гепатита В заражается более 50 млн. человек, вирусоносителей насчитывается около 400 млн., из которых у 60 млн. высока вероятность развития гепатоциллюлярной карциномы, а у 45 млн. - цирроза печени (Онищенко Г.Г, 2003; Chisari F.V., 2000; Kirk G.D., Astemborski J., Mehta S.H. et al., 2009). Вирусом гепатита С инфицировано около 3 % населения Земли, в том числе в России - 6 млн. человек. По данным различных авторов инфицированность гепатитом С среди пациентов с иммунодефицитом колеблется от 33 до 59%. (Николаева Л.И., 2008; Boctor F.N., 2003; Kamal S.M., 2004, Deuffic-Burban S. et al., 2007, S.L. George, B.R. Bacon, E.M. Brunt, 2009, E.C. Thomson, E. Nastouli, J. Main, 2009, Barbosa Ade J., Baggio-Zappia G.L., Dobo C. et al., 2009). Острый гепатит С в 80% случаев переходит в хронический с исходом в цирроз печени и гепатоцеллюлярную карциному. (Di Bisceglie A.M. 2000; Alberti A.L. 2002; Idrees M. et al., 2009; Cao W. et al., 2009). В последние годы отмечается снижение заболеваемости острыми формами на фоне роста и широкого распространения хронических, латентных форм и носительства вирусов (Государственный доклад «О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2009 году»). Современное состояние проблемы их выявления требует изменения подходов к их диагностике, в том числе перехода на более эффективные технологии скрининга, доступные для учреждений практического здравоохранения.

Чрезвычайно активная циркуляция вирусов гепатитов В и С обусловлена их высокой вирулентностью, устойчивостью (Патрушева Н.Б. с соавт., 2001; Суздальцев А.А. с соавт., 2003; Аммосов А.Д., 2004; Воробьев П.А., c соавт., 2006). Установлено, что парентеральные вирусные гепатиты характеризуются выраженной инфекционностью, заражение возникает при инокуляции 10-6-10-7 мл вируссодержащей крови. Популяция вирусов гепатитов В и С генетически неоднородна, в частности, идентифицировано 6 генотипов и более 100 субтипов вируса гепатита С (Hu X.B. et al., 2009; Drexler J.F. et al. 2009). Устойчивость вируса гепатита С обусловлена его способностью реплицироваться с высоким уровнем мутаций, в результате чего возникает несколько иммунологически различающихся вариантов, позволяющих вирусу избегать иммунного ответа организма (Frodshan A., Hill A., 2004, Ivanov Y.D. et all, 2007).

Существующая нормативная база по лабораторной диагностике вирусных гепатитов и ВИЧ, представленная в основном Приказами Минздрава России 90-х и начала 2000-х годов, не учитывает современные достижения биомедицинских технологий в области изучения генетической изменчивости их возбудителей и создания новых, более эффективных методов детекции вирусных маркеров, не определяет порядок их использования при решении различных задач, в том числе для скрининга доноров. В связи с возрастающей потребностью в донорской крови и ее компонентах в службе крови все актуальнее становится вопрос повышения вирусной безопасности гемотрансфузий (Покровский В.В. с соавт., 2000; Дегтярева И.Н. с соавт., 2000; Кудрявцева Е.Н. с соавт., 2000; Панов В.Н., 2003, Чечеткин А.В. с соавт., 2004, Гаврилов А.О. с соавт., 2005; Куандыкова Р.Ж. с соавт., 2005; Воробьев П.А., 2006; Арчаков А.И. с соавт., 2010, Blatti F.A., 2007). Существующие в нашей стране алгоритмы лабораторного исследования донорской крови не исключают остаточный риск посттрансфузионных инфекций. НВsАg является единственным маркером вируса гепатита В, по которому серопозитивные лица отстраняются от донорства в Российской Федерации (Балаян С.А., Михайлов М.И., 1999; Шевченко Ю.Л., Жибурт Е.Б., 2002; Манзенюк О.Ю. с соавт., 2005; Кюрегян К.К. с соавт., 2005, Тарасенко О.А., 2009). Наличие среди доноров крови носителей вируса гепатита В, у которых концентрация HBsAg может быть ниже уровня, детектируемого с помощью существующих лабораторных тестов, требует повышения чувствительности диагностикумов для выявления этого маркёра, для чего необходимы сравнительные исследования аналитической эффективности современных диагностических тестов для выявления этого маркёра.



Детекция маркеров гепатита С является одним из слабых мест лабораторной идентификации актуальных в службе крови вирусов. Результаты тестирования на антитела к вирусу гепатита С методом иммуноферментного анализа (ИФА) остаются основой выбраковки потенциально опасной по данной инфекции донорской крови. Имеются основания утверждать, что выявление антител к вирусу гепатита С обладает рядом недостатков, в частности, обусловленных ложноположительной детекцией вследствие кросс-реактивности антител, низкой чувствительностью в период острой фазы гепатита. Это обуславливает необходимость более детального изучения преаналитического и аналитического этапов лабораторного исследования и разработки более чувствительных методов детекции вирусной инфекции (Жибурт Е.Б., 2005; Литвиненко М.О., 2006, Гураль А.Л., Сергеева Т.А., 2007; Арчаков А.И. с соавт., 2010, Девдариани З.Л. с соавт., 2010, Weber Bernar, 2006, Knowles Sue, 2007, Zoulim F. et all., 2007).

В условиях широкого распространения парентеральных вирусных инфекций назрела практическая необходимость использования альтернативного биологического материала, который можно получить быстрым и неинвазивным путем для диагностики и мониторинга инфекционных и других заболеваний. Одной из таких биологических сред является ротовая жидкость. Учитывая, что работы, содержащие сведения о составе и свойствах ротовой жидкости в норме и соматической патологии, малочисленны (Гильмиярова Ф.Н., 1999; Dodds M.W. et al., 2000), а работы, изучающие возможности использования ротовой жидкости при вирусных инфекциях, единичны и результаты этих исследований неоднозначны (Воробьев О.В., 2000; Чернецова О.В. и соавт., 2003; Roy K.M. et al., 1998; Wesolowski L.G. et al., 2009), существует необходимость поиска новых аналитических подходов для расширения диагностических возможностей, индивидуализации диагностики и повышения ее качества (Коршунов Г.В., Гладилин Г.П., 2007).

При взаимодействии возбудителя вирусной инфекции с организмом – мишенью его действия, значимым является не только вирулентность, устойчивость, массивность инфекции, но и особенности состояния макроорганизма (Высокогорский В.Е. с соавт. 2006). На наш взгляд, информативным показателем предрасположенности или устойчивости к развитию заболевания могут быть особенности метаболизма, иммунного статуса, ассоциированные с определенной группой крови человека. (Донсков С.И., 2001; Гильмиярова Ф.Н. с соавт., 2007). Сведения о клинико-лабораторных особенностях парентеральных вирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции у пациентов с разной группой крови и при разной степени виремии единичны (Дашкова Н.Г. с соавт., 2005, Фрейдин М.Б. с соавт., 2006).

Таким образом, совершенствование лабораторной диагностики социально значимых вирусных инфекций, разработка комплекса интегрированных аналитических подходов к эффективному выявлению их маркеров является в настоящее время актуальной медицинской и социальной проблемой.

Настоящее исследование выполнено в рамках Федеральных программ: «Взаимодействии биологически активных веществ растительного и животного происхождения с системами жизнеобеспечения организма с учетом биологической вариабельности метаболизма, ассоциированной с групповой принадлежностью крови (№ гос.регистрации 0120.0 809698).

«Изучение свойств, состава, биологических эффектов, регуляторного потенциала экопротекторов нового поколения и разработка мер защиты здоровья населения и профилактики заболеваний» (№ гос.регистрации 1.20.03 08339).

Цель работы - разработать аналитические подходы для выработки алгоритма совершенствования лабораторной диагностики социально значимых вирусных инфекций.

Задачи:

  1. Провести анализ современных методов обеспечения инфекционной безопасности донорской крови и повышения эффективности выявления инфицированности ВИЧ и вирусными гепатитами В и С при проведении иммуноферментного анализа. Оценить диагностический потенциал современных тест-систем для выявления НBsAg с разным уровнем чувствительности, обосновать целесообразность применения в службе крови тестов с повышенной чувствительностью.
  2. Разработать алгоритм выбора наиболее диагностически эффективного и наименее затратного комплекса скрининговых методов исследования доноров. Провести расчет экономических затрат на проведение ИФА с высокой чувствительностью и полимеразной цепной реакции (ПЦР) для обоснования выбора диагностического метода.
  3. Оценить диагностическую эффективность определения субтипов и мутантных форм НBsAg (ayw2, ayw3 Var.A, ayw3 Var.B, adrq+, ayw3 T134P, ayw3 S143L, adw3 G145R) разрешенными к применению в практике здравоохранения иммуноферментными тест-системами.
  4. Изучить влияние преаналитических и аналитических факторов, связанных с проведением дезинфекционных мероприятий, на результаты лигандных иммунохимических и молекулярно-генетических исследований.
  5. Обосновать использование саливодиагностики для расширения возможностей массового скрининга вирусного гепатита С.
  6. Оценить биологическую вариабельность иммунологического статуса инфицированных ВИЧ, гепатитами В и С, ассоциированную с групповой принадлежностью крови, для разработки концепции предрасположенности к инфицированию вирусными инфекциями.

Научная новизна. На большом массиве обследованных с использованием различных методических подходов получены новые сведения, характеризующие потенциальные и реальные возможности иммуноферментного анализа, обоснованы ограничения диагностической эффективности ИФА. Установлено, что получение отрицательного результата на наличие серологических маркеров с помощью ИФА и после проведения подтверждающего теста не является полной гарантией безопасности крови и ее компонентов, поскольку в 2 – 10% случаев встречаются ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Аргументировано, что низкие концентрации и мутантные штаммы НВsAg вируса гепатита В могут не выявиться современными иммуноферментными тестами.





Экспериментально обоснована возможность сокращения периода «серонегативного окна». Этот результат достигается путем улучшения аналитических характеристик диагностических тестов, применяемых в лабораторной диагностике, повышения чувствительности выявления HBsAg. Подтверждено, что использование полимеразной цепной реакции для оценки возможного инфицирования донорской крови вирусами ВИЧ и гепатита С является методом выбора в диагностической практике, так как позволяет выявить доноров в период серонегативного окна, а также имеющих низкие концентрации серологических маркеров.

Получены новые сведения, объективно иллюстрирующие высокую диагностическую информативность иммуноферментной тест-системы нового поколения с большей специфичностью и чувствительностью выявления и подтверждения НBsAg 0,01 МЕ/мл, что сводит к минимуму получение ложноотрицательных и ложноположительных результатов и таким образом снижает риск инфицирования при гемотрансфузии.

Нами показано, что применение этих тест-систем эффективно при скрининговом исследовании донорской крови. Проведенные расчеты экономических затрат выявили, что использование тест-системы нового поколения, позволяющее выявить образцы, содержащие одну инфицирующую дозу вируса гепатита В, при наличии высокой диагностической информативности существенно экономичнее, чем внедрение ПЦР для массового скрининга донорской крови.

Получен блок новых данных, свидетельствующих о том, что отечественные тест-системы различных производителей, разрешенные к применению в лабораторной диагностике, не способны выявлять некоторые субтипы и мутации HBsAg, в частности, ayw3, ayw3 S143L, adw3 G145R. Такие «ускользающие» HBsAg мутанты способны уходить из иммунологического, диагностического и вакцинального контроля.

Результаты проведенных исследований позволили получить новые данные, которые позволят минимизировать ошибки при проведении иммуноферментного анализа на пре- и аналитическом этапе. Установлено, что из девяти разрешенных к применению в практике здравоохранения дезинфицирующих средств разных классов пероксид водорода, хлорсодержащие препараты даже в следовых количествах многократно искажали результаты исследования.

Анализируя распространенность социально значимых вирусных инфекций среди обследованных, составивших группу из 34634 человек, нами установлена неоднородность распределения ВИЧ, гепатитов В и С среди обладателей различных групп крови. Показано, что 40,3% выявленных ВИЧ инфицированных относятся к О(I) группе крови, 40,4% носителей вируса гепатита В и 36,0% носителей вируса гепатита С к А(II) группе, сочетанное носительство ВИЧ инфекции и гепатита С обнаружено у лиц с О(I) группой крови в 36,9%, с В(III) группой - в 31,3% случаев.

В связи с массовостью проведения скрининговых исследований для выявления маркеров вирусных инфекций и значимостью парентерального пути их передачи, нами изучены аналитические перспективы применения ротовой жидкости в лабораторной диагностике вирусного гепатита С. Оценка серологических, биохимических показателей в ротовой жидкости и крови больных гепатитом С выявила корреляционные зависимости между рядом параметров в этих биологических жидкостях. В фазе репликации РНК вируса гепатита С в ротовой жидкости была выявлена у 14% пациентов, Анти-HCV IgM – у 50% и Анти-HCV IgG – у 67%. Таким образом, новыми являются сведения о том, что высокая виремия при вирусном гепатите С сопровождается повышенным уровнем вирусной нагрузки ротовой жидкости, достаточным для детекции маркеров инфекции современными лабораторными методами исследования. Наличие корреляционных связей между показателями метаболизма в ротовой жидкости и сыворотке крови, их корреляция с выявленными иммунологическими маркерами подтверждает перспективность саливодиагностики инфекционных заболеваний.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 10 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.