WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Изучение фармакокинетики нового отечественного препарата содержащего клопидогрел

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

РУВИНОВ Юлий Вячеславович

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОКИНЕТИКИ НОВОГО ОТЕЧЕСТВЕННОГО

ПРЕПАРАТА СОДЕРЖАЩЕГО КЛОПИДОГРЕЛ

14.03.06– фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Старая Купавна – 2011

Работа выполнена в ГОУ ВПО Первый Московский Государственный Медицинский Университет им. И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России

Научный руководитель:

академик РАМН, доктор медицинских наук,

профессор Кукес Владимир Григорьевич

доктор фармацевтических наук,

профессор Бунятян Наталья Дмитриевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Яворский Александр Николаевич

заслуженный деятель науки,

член-корр. РАМН, профессор Гуськова Татьяна Анатольевна

Ведущая организация: Московский государственный медико-стоматологический университет Минздравсоцразвития России

Защита состоится «____»_________2011г. в____часов на заседании Диссертационного Совета Д 217.004.01 при Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ по адресу 142450, Московская область, п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ.

Автореферат разослан «____» ___________2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук Яснецов В.В.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АДФ аденозиндифосфат

ЖКТ желудочно-кишечный тракт

ИАТ индуцированная агрегация тромбоцитов

ИБС ишемическая болезнь сердца

ИМ инфаркт миокарда

КБС коронарная болезнь сердца

КЛ клопидогрел

ЛПВП липопротеиды высокой плотности

ЛПНП липопротеиды низкой плотности

ЛПНОП липопротеиды очень низкой плотности

ЛС лекарственное средство

НЛР нежелательные лекарственные реакции

НС нестабильная стенокардия

ОКС острый коронарный синдром

ТГ триглицериды

Хс общий холестерин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Профилактика и лечение тромбозов является одной из важнейших задач повседневной кардиологической и неврологической практики. Актуальность этой проблемы обусловлена высокой частотой и тяжелыми последствиями тромбозов и тромбоэболий[Парфенов В.А., 2002; Руксин В.В., 1998.]. Клопидогрел (КЛ) является препаратом, ингибирующим агрегацию тромбоцитов, вызванную аденозин дифосфатом (АДФ). Селективно и необратимо блокирует связывание АДФ с рецепторами тромбоцитов, подавляет их активацию, уменьшает количество функционирующих АДФ-рецепторов (без повреждения), препятствует сорбции фибриногена и ингибирует агрегацию тромбоцитов. С непрерывным применением терапевтических доз клопидогрела (75 мг/мл), с первого дня терапии, проявляется значительная ингибиция тромбоцитной агрегации, потом антиагрегационный эффект постепенно усиливается и достигает максимума на 3-й и 7-й день терапии. После непрерывного применения терапевтических доз, средний уровень ингибирования между 40 и 60%. После прекращения терапии, эффект клопидогрела на тромбоцитарную агрегацию и время кровотечения теряется на 5-й день [Herbert J.M., 1999.].

Наряду с тиклопедином (другой препарат с аналогичным механизмом действия) клопидогрел широко применяется для профилактики тромбов, однако по сравнению с тиклопедином клопидогрел более безопасен. Оба эти препарата по крайней мере столь же эффективны для профилактики тромбоза, как и аспирин или превосходят последний по способности снижать степень комбинированного риска инфаркта миокарда, сосудистой смерти и инсульта среди пациентов с постинфарктным кардиосклерозом, инсультом и периферическим кардиосклерозом [Diener H.C., 2005; Mach F., 2005.]. При этом клопидогрел оказался экономически выгоднее аспирина у пациентов, недавно перенесших ишемический инсульт, инфаркт миокарда и больных эссенциальной артериальной гипертензией [Delea T.E., 2003].

Повышение эффективности и безопасности лекарственной терапии возможно благодаря подробному изучению фармакокинетических и фармакодинамических показателей. Проблемы фармакокинетики: анализ скорости и интенсивности процессов всасывания, распределения по органам и тканям, направленности и количественной оценки процессов биотрансформации, путей и скорости выведения – в последние годы приобретают решающее значение при создании, испытании и разработке оптимального режима фармакотерапии лекарственными препаратами.

По литературным данным основное внимание уделено фармакокинетике и стереохимии клопидогрела, нет данных по сопоставлению фармакокинетики различных препаратов клопидогрела. Очень мало данных по определению метаболита клопидогрела. Нет данных по относительной биодоступности различных препаратов клопидогрела в плазме крови.

Создание новых генерических препаратов предусматривает проведение исследований по биоэквивалентности, что предусматривает разработку методики количественного определения изучаемого соединения в плазме крови. Используемые в настоящее время методики определения клопидогрела требуют больших затрат времени и поэтому неудобны для проведения рутинных анализов.



Цель и задачи исследования. Основной целью исследования явилось изучение фармакокинетики клопидогрела и его метаболита (клопидогрел кислоты), проведение сравнительной фармакокинетической характеристики и относительной биодоступности двух препаратов клопидогрела.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

  1. Разработать методику количественного определения клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором.
  2. Определить динамику концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови добровольцев после однократного перорального приема препарата Клорель.
  3. Рассчитать фармакокинетические параметры модельно-независимым методом статистических моментов.
  4. Изучить относительную биодоступность и биоэквивалентность препаратов Клорель и Плавикс.
  5. Провести статистическую обработку полученных результатов.

Научная новизна.

Впервые изучена относительная биодоступность нового отечественного препарата содержащего клопидогрел.

Определена динамика концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови после перорального однократного приема препарата, содержащего клопидогрел.

Разработана доступная методика определения метаболита клопидогрела в плазме крови.

Практическая значимость.

Разработаны методики, позволяющие определять с высокой точностью концентрации клопидогрела и клопидогрел кислоты в биологических жидкостях, обеспечивающие повышение контроля качества лекарственных средств.

Определены значения основных фармакокинетических параметров после однократного приема таблеток Клорель и Плавикс.

Заключение о биоэквивалентности таблеток Клорель, производитель ЗАО «ФП Оболенское» (Россия) и Плавикс, производитель «Санофи-Винтроп» (Франция) позволило выпустить на отечественный фармацевтический рынок новый российский препарат, соответствующий мировым стандартам лечения и обладающий более низкой стоимостью, что делает его доступным для широкого использования населением.

Внедрение в практику.

Результаты исследования используются в аналитической и клинической практике в Филиале «Клиническая фармакология» НЦ Биомедицинских технологий РАМН и Институте клинической фармакологии ФГБУ НЦЭСМП Минздравсоцразвития России.

На основании исследований по биоэквивалентности препарат Клорель был рекомендован к медицинскому применению ФГБУ НЦЭСМП Минздравсоцразвития России.

Апробация работы.

Диссертационная работа апробирована на совместной научно-практической конференции кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней ПМГМУ им. И.М. Сеченова и Института клинической фармакологии Федерального государственного учреждения «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Росздравнадзора (Москва, 2010 г.).

Публикации по работе. По результатам выполненных исследований опубликовано 5 работ, в том числе 3 статьи в журналах, рецензируемых ВАК РФ.

Основные положения выносимые на защиту:

  1. Условия количественного определения клопидогрела и его метаболита в плазме крови методом ВЭЖХ с LC/MS.
  2. Динамика концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты после однократного перорального приема препарата Клорель.
  3. Фармакокинетические параметры и результаты оценки относительной биодоступности таблеток Клорель и Плавикс.
  4. Оценка клинической эффективности Зилта и Аториса у больных острым коронарным синдромом.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения и выводов. Работа содержит 34 таблицы и 12 рисунков. Библиографический указатель включает 24 отечественную и 135 иностранных публикаций.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

  1. Объекты, материалы и методы исследования.

В работе использованы:

- препарат испытуемый (Т) – КЛОРЕЛЬ, таблетки покрытые оболочкой, по 75 мг ЗАО «ФП Оболенское», Россия. Серия препарата 010903;

- препарат сравнения (R) – ПЛАВИКС, таблетки, покрытые оболочкой, по 75 мг производства компании «Санофи-Винтроп», Франция.

Препараты : Зилт (клопидогрел) и Аторис (аторвастатин) фирмы KRKA, Словения.

В работе использовано следующее оборудование: жидкостные хроматографы Shimadzu с флуориметрическим детектором и Agilent 1200 с масс-спектрометрическим детектором, рН-метр MetroHm 744, водяная баня, магнитная мешалка, лабораторная центрифуга, вибровстряхиватель, роторный испаритель с вакуумным насосом.

Все реактивы, используемые в анализе, были марок «ЧДА» и «для ВЭЖХ».

Тактика исследования.

В исследование было включено 42 здоровых добровольца (средний возраст 21±лет, средний рост 181±см, средний вес кг).

Все волонтеры в период за 1-14 дней до исследования проходили углубленное врачебное исследование (сбор анамнеза, врачебный осмотр, биохимическое исследование крови, общий анализ крови и мочи).

Добровольцы были проинформированы о том, что во время всего исследования они должны соблюдать стандартный режим: не подвергаться физической и психической нагрузке, не употреблять спиртные напитки, кофе и чай, а также не принимать никакие другие лекарственные препараты. В обязанности добровольцев также входило сообщение о любых изменениях режима и самочувствия во время, и после проведения фармакокинетического исследования.





После получения полной информации о ходе проведения исследования, при наличии письменного согласия волонтера, наличии у него всех критериев включения, отсутствии критериев исключения проводилось страхование добровольца в соответствии с требованиями клинических испытаний, и затем доброволец госпитализировался в ГКБ № 23 им Медсантруд.

В день начала исследования, врач, руководящий исследованием проводил клиническое исследование добровольца и делал запись в индивидуальной карточке добровольца. Затем устанавливал разовый кубитальный катетер, через который проводился забор крови.

Исследования проводились в рамках испытаний по биоэквивалентности лекарственных средств в соответствии с методологическими указаниями МЗ РФ по испытаниям биоэквивалентности и были одобрены комитетом по этике.

Прием препаратов осуществлялся per os в часов утра. Забор проб крови осуществлялся из кубитальной вены в количестве 5 мл в гепаринизированные стеклянные пробирки до приема и спустя после приема препаратов. Пробы центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин, отбирали 1,5 мл плазмы и хранили до анализа в морозилке при -35оС.

Концентрацию клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови добровольцев определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.

Изучение фармакодинамики и клинической эффективности препаратов Зилт и Аторис проводилось у 60 больных с острым коронарным синдромом.

Полученные экспериментальные данные были подвержены статистической обработке с помощью пакета Microsoft Office Exel 2007 для персонального компьютера. Рассчитывались следующие статистические параметры: среднее значение(Mean), стандартное отклонение среднего результата (S.D), стандартная ошибка (S.E.) и коэффициент вариации (C.V.). Достоверность различий полученных параметров оценивали с помощью дисперсионного анализа (ANOVA). Для оценки параметров биоэквивалентности были рассчитаны также доверительные результаты.

  1. Количественное определение клопидогрела и его метаболита

в плазме крови.

Известно, что после орального применения клопидогрела в плазме крови фиксируется как действующее вещество – клопидогрел, так и его неактивный метаболит – клопидогрел кислота. Для определения концентрации клопидогрела необходима высокочувствительная методика, поскольку его концентрация в плазме очень мала.

Так как (по литературным данным) концентрация клопидогрела в плазме мала, поэтому исследуемые пробы анализировали на жидкостном хроматографе “Agilent 1100” (США) с масс-спектрометрическим детектором (электроспрей + ионизация). Разделение проводилось на колонке Zorbax SB C18 (4,650мм; 1,8 мкм). Температура разделения 40оС. Подвижная фаза состояла из смеси ацетонитрила и деионизированной воды с 0,1% муравьиной кислоты (15:85, v/v). Скорость потока 0.3 мл/мин. Объем вводимой пробы – 30 мкл. Детектирование проводилось по протонированному молекулярному иону клопидогрел с m/z 322,2, фрагментатор 110В, температура азота 400оС, расход газа 5,0 л/мин, давление небулайзера 60 psig.

Детектирование с использованием масс-спектрометрического детектора позволяет достичь необходимого предела обнаружения (100 пг/мл) клопидогрела с хорошей воспроизводимостью результатов.

При анализе клопидогрел кислоты подвижная фаза состояла из смеси ацетонитрила и деионизированной воды с 0,1% муравьиной кислоты (25:75, v/v). Скорость потока 0.3 мл/мин. Объем вводимой пробы – 30 мкл. Детектирование проводилось по протонированному молекулярному иону клопидогрел с m/z 308. фрагментатор 50В, температура азота 400оС, расход газа 10,0 л/мин, давление небулайзера 35 psig.

При разработке аналитической методики важная роль отводится процессу пробоподготовки. Для подготовки образцов плазмы крови более оптимальным является способ с применением жидкостной экстракции с последующим концентрированием пробы. Детальное изучение экстракции клопидогрела провели несколькими органическими растворителями. Наилучшая степень экстракции была достигнута смесью гексан/диэтиловый эфир (80:20 v/v) в нейтральной среде, коэффициент экстракции составил 90%.

Таким образом, для извлечения клопидогрела из плазмы крови, экстракцию проводили следующим образом: к образцу плазмы крови (объемом 0,5 мл) добавляли 3 мл смеси (н-гексан/диэтиловый эфир, 80:20v/v), смесь подвергалась встряхиванию на шейкере в течение 10 минут, затем центрифугированию в течение 10 мин при 4500 об/мин. Потом органический слой переносили в колбы и экстракт упаривали на роторном испарителе при 37оС. Сухой остаток растворяли в 100 мкл подвижной фазы и 30 мкл полученного раствора анализировали на ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором.

Для извлечения клопидогрел кислоты (метаболит клопидогрела) из плазмы крови, экстракцию проводили следующим образом: к 0,25 мл плазмы крови добавляли 3 мл хлороформа, интенсивно встряхивали на шейкере в течение 10 минут и центрифугировали при 4500 об/мин 10 минут. Затем органический слой переносили в колбы для упаривания и упаривали на роторном испарителе при 37оС. Сухой остаток растворяли в 200 мкл смеси метанол/вода (50/50) переносили в виалы и далее анализировали на Agilent.

Количественное определение проводили методом абсолютной калибровки. Растворы готовили в метаноле и хранили в холодильнике при -18оС (растворы стабильны 1 месяц). Калибровочный график строили по результатам хроматографического анализа на основе измерений высот хроматографических пиков с использованием программы Chem Station LC 3D.



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.