WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 6 |

Сравнительный анализ поведенческих эффектов синтетических и растительных селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов при циклических колебаниях и дефиците эстрогенов

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

КАЗАКОВА СВЕТЛАНА БОРИСОВНА

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ СИНТЕТИЧЕСКИХ И РАСТИТЕЛЬНЫХ СЕЛЕКТИВНЫХ МОДУЛЯТОРОВ ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ ПРИ ЦИКЛИЧЕСКИХ КОЛЕБАНИЯХ И ДЕФИЦИТЕ ЭСТРОГЕНОВ

14.00.25 – фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2009 г.

Работа выполнена в отделе нейрофармакологии им. С.В. Аничкова Научно-исследовательского института экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН (НИИЭМ СЗО РАМН).

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ,

член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук,

профессор

Сапронов Николай Сергеевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Клименко Виктор Матвеевич

доктор медицинских наук, профессор

Шабанов Петр Дмитриевич

Ведущая организация: Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. Академика И.П. Павлова

Защита состоится «….» ……………………2010 года в ….часов на заседании совета Д 001.022.03 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора и кандидата наук при Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика И. П. Павлова, 12

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке НИИЭМ СЗО РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Академика Павлова, д.12

Автореферат разослан «….»…………..2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

Доктор биологических наук, профессор Л.В. Пучкова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Не вызывает сомнений, что эстрогены оказывают модулирующее влияние на когнитивный и психо-эмоциональный статус. Вынужденная или естественная гипоэстрогения часто сопровождается комплексом расстройств, включая подавленное настроение, тревогу, плаксивость, депрессию. Наиболее часто прослеживается корреляция между гормональным фоном и развитием аффективных расстройств в пубертатный период, при использовании пероральной контрацепции, во время предменструального синдрома, при беременности, в послеродовом климактерическом периоде. В основе патогенеза развития аффективного статуса лежит тесная взаимосвязь между гипоталамо-гипофизарно-овариальной системой и нейромедиаторными системами головного мозга. Эстрогены оказывают модулирующее действие на холинергическую, дофаминергическую, серотонинергическую системы, способствуя развитию антиамнестического, антидепрессивного, анксиолитического эффектов. Кроме того, Bruse McEwen (1999, 2002) в условиях доклинических исследований продемонстрировал зависимость между синаптогенезом в нейронах гиппокампа и колебанием уровня эстрадиола в крови в течение эстрального цикла у крыс, что свидетельствует о нейропротективном действии эстрогенов. В настоящее время для купирования менопаузальных симптомов, для лечения пациенток после гистерэктомии, а также в качестве пероральной контрацепции широко используется заместительная гормональная терапия (ЗГТ). Однако применение ЗГТ связано с риском развития масталгии (болезненность молочных желез), пролиферации тканей молочной железы и эндометрия, что провоцирует развитие опухолей, маточного кровотечения, а длительное использование гормональной терапии может привести к венозной тромбоэмболии и патологическим изменениям в сердечно-сосудистой и гепатобилиарной системах (Сапронов, Федотова, 2009). Поэтому возникает необходимость поиска новых лекарственных препаратов для коррекции психоэмоционального статуса в условиях естественного или вынужденного дисбаланса эстрогенов. Альтернативой ЗГТ выступает класс фармакологически активных веществ – селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов (СЭРМ), – проявляющие избирательную активность в эстроген-чувствительных тканях, в том числе в ЦНС. СЭРМ это соединения, которые, в отличие от «чистых» агонистов и антагонистов эстрогенов, способны проявлять селективную избирательность к эстрогеновым рецепторам. Пока остается неясным, по какому механизму СЭРМы реализуют агонист/антагонистические эффекты в эстроген – чувствительных тканях. Однако наиболее вероятны 3 механизма действия: различной экспрессией рецептора эстрогена в ткани-мишени; разной конформацией эстрогенового рецептора и чувствительного к нему лиганда; различной экспрессией и образованием корегуляторных белков на рецепторе эстрогенов. Существуют противоречивые сведения и об эффектах СЭРМ на поведенческие процессы, аффективный статус. Очень мало исследований анализируют роль СЭРМов в формировании гормонального статуса при их длительном применении. Таким образом, особую актуальность представляет вопрос о взаимодействии гипоталамо-гипофизарно-овариальной системы и нейромедиаторных систем головного мозга, участвующих в формировании эмоционального поведения и когнитивного статуса, на фоне хронического введения СЭРМ синтетического и растительного происхождения при циклических колебаниях половых гормонов и при дефиците эстрогенов.

Целью настоящей работы являлся сравнительный анализ эффектов агонистов\антагонистов эстрогеновых рецепторов, введенных изолированно или в комбинации с 17-Э2 и с 17-Э2, на депрессивноподобное и тревожное поведение у самок крыс, а также определение их гормонального статуса при естественном колебании эстрогенов в крови и в условиях экспериментального дефицита эстрогенов.



В задачи исследования входило:

1. Выяснить участие - и -эстрогеновых рецепторов (ЭР) в механизмах развития депрессии и тревожных расстройств при экспериментальном дефиците эстрогенов;

2. Изучить возможность применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов для коррекции аффективных состояний при вынужденном или естественном дефиците эстрогенов;

3. В эксперименте на животных оценить перспективность сочетанного применения СЭРМ в комбинации с высокочувствительным лигандом к -ЭР - 17-Э2, или в комбинации с лигандом к -ЭР - 17-Э2 в терапии депрессивных и тревожных состояний в условиях овариоэктомии;

4. Провести сравнительный анализ поведенческих эффектов 17- и 17-Э2, а также синтетических (тамоксифен) и растительных (экстракт цимицифуги, генистейн) модуляторов ЭР при дисбалансе половых гормонов.

Научная новизна. Впервые показано влияние ряда СЭРМ (тамоксифен, генистейн, климадинон) на аффективное поведение и гормональный статус при естественных колебаниях эстрогенов, а также в условиях экспериментального дефицита у самок крыс. Продемонстрированы разнонаправленные эффекты исследуемых препаратов и заместительной терапии 17- и 17-Э2 на депрессивное поведение и уровень тревожности у интактных и ОЭ самок крыс. Показано, что тамоксифен, генистейн и климадинон изолированно и в сочетании с 17- и 17-Э2 способны модулировать аффективный статус и баланс половых гормонов у животных. Установлено, что эффекты изолированного и сочетанного применения селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов различаются у ОЭ крыс и интактных самок.

Научно-практическое значение работы. Полученные результаты расширяют представления об участии половых гормонов в патогенезе депрессии и тревожных расстройств. Кроме того, показана корреляция между степенью вовлечения - и -ЭР, их физиологической активностью, а также уровнем циркулирующих в крови экзогенных и эндогенных лигандов к этим рецепторам и тревожно-депрессивным состоянием у грызунов. Результаты работы могут быть использованы для разработки схем лечения аффективного состояния при дисбалансе и дефиците половых гормонов у пациенток. Показана перспективность применения СЭРМ в комбинации с эстрогенами для лечения психоэмоциональных расстройств на фоне различных патологий репродуктивной системы.

Основные положения, выносимые на защиту: Естественные колебания эстрогенов на протяжении эстрального цикла у крыс сопровождаются изменением уровня тревожности и депрессивноподобного состояния. Как высокое содержание эстрогенов, так и низкое приводит к развитию тревожно-депрессивного состояния у грызунов. Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов вовлекаются в формирование психо-эмоционального статуса. Экспериментальная овариоэктомия у крыс сопровождается нарушением аффективного статуса, что выражается изменениями в различных поведенческих тестах. Депрессивные и тревожные нарушения у ОЭ животных лишь частично снижаются на фоне заместительной терапии 17-Э2. Применение 17-Э2 и/или 17-Э2 в комплексе с тамоксифеном, генистейном или климадиноном повышает эффективность антидепрессантной и анксиолитической терапии при дефиците эстрогенов. Важную роль при этом играет формирование гормонального статуса на фоне указанных комбинаций препаратов.

Личный вклад соискателя. Соискателем написан обзор литературы, спланированы и выполнены эксперименты, статистическая обработка и анализ полученных результатов, а также подготовлены основные публикации по теме работы.

Апробация работы. Результаты были доложены и обсуждались на 2-ой Российско-китайской научной конференции «Фундаментальная фармакология и фармация в клинической практике» (Пермь, 2006), 1-й конференции Российской ассоциации психонейроэндокринологии (2008), на научных заседаниях отдела нейрофармакологии (2008, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 3 статьи в рецензируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах, иллюстрирована 22 рисунками и 18 таблицами, включает введение, обзор литературы, описание методов исследования, изложение результатов их обсуждение, а также заключение, выводы, список цитированной литературы, из которых 36 отечественных и 95 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 740 самках крыс линии Вистар, массой 180-200 г (возраст 4-5 месяцев), полученных из питомника РАМН “Рапполово”. Животных содержали в стандартных условиях освещения и пищевого режима. Операцию тотальной овариоэктомии, взятие влагалищных мазков и поведенческие тесты проводили не ранее, чем через 7 дней после поступления из питомника.

Овариоэктомию осуществляли с соблюдением правил асептики. Методические особенности и детали операции подробно изложены у Я. Д. Киршенблата (1969). Отсутствие эстрального цикла у самок подтверждали анализом влагалищных мазков в течение 4-х дней до начала эксперимента.

Цитологический метод определения стадии полового цикла у самок. Для анализа влияния разного уровня эндогенных эстрогенов определяли 4 фазы полового цикла: диэструс, проэструс, эструс и метэструс. Определение стадии полового цикла у интактных крыс проводили с использованием характерных морфологических признаков по мазкам согласно описанию у Я. Д. Киршенблата (1969).





Депрессивноподобное поведение изучали в тесте Порсолта. Животное помещали в стеклянный цилиндр (23/50 см), заполненный на две трети водой с температурой 25° на 15 минут, затем извлекали из цилиндра и обсушивали в течение 1 часа. Через 24 часа животное повторно опускали в воду. Депрессивноподобное состояние оценивали по длительности иммобильности в течение 5 минут. Под иммобильностью понимали полное отсутствие плавательных движений при пассивном удержании животного на воде (Porsolt et al., 1978). Уровень тревожности оценивали в «приподнятом крестообразном лабиринте», состоящем из двух «открытых» и двух «закрытых» рукавов. Животное помещали в центр лабинринта и регистрировали общее время пребывания и число заходов в открытые и закрытые рукава в течение 5 минут (File,1996; Калуев, 1998; Себенцова и др., 2005). Эмоциональную реактивность, двигательную и исследовательскую активность животных изучали в тесте «открытое поле» в течение 3 минут (Петров и др., 1982; Калуев, 2002). Тестирование проводили в 9.00 – 12.00 часов). Концентрацию ЛГ, ФСГ, Э2 и П в сыворотке крови крыс определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью наборов для ИФА. Оптическую плотность измеряли при 450 нм с помощью анализатора иммуноферментных реакций АИФР-01 (ПИКОН, Россия). Перед началом исследования проводили раститровку наборов с подбором оптимального разведения сыворотки крови, концентрацию антигена в исследуемых образцах рассчитывали на основании калибровочного графика.

В работе использовали СЭРМы синтетического и растительного происхождения: тамоксифен – синтетического происхождения, (Орион, Финляндия) вводили в дозе 10 мг/кг, внутрибрюшинно; генистейн («Sigma», Германия) – препарат растительного происхождения, относится к классу изофлавоноидов, получен из соевых бобов, вводили в дозе 1 мг/кг, внутрибрюшинно; климадинон (Bionorica, Германия) – лекарственный препарат, представляющий собой экстракт цимицифуги, вводили в дозе 20 мг/кг, внутрибрюшинно. Фармакологические вещества вводили в объеме 0,1 мл на животное ежедневно в течение 14 дней, через 2 недели после овариоэктомии. Необходимо отметить, что СЭРМы были использованы в поведенческих дозах, соответствующих данным литературы (Dhandapani, 2002; Diez-Perez, 2006). 17- и 17-эстрадиол растворяли в стерильном персиковом масле и вводили внутримышечно в дозе 0,5 мкг на каждое животное. В данном исследовании были использованы низкие дозы эстрадиолов (Wise, 2000). Контрольные животные получали физиологический раствор.

Все интактные и ОЭ животные были разделены на следующие группы по 18-20 особей в каждой: 1-я – интактные крысы, получавшие физиологический раствор на протяжении всего эксперимента (контроль 1); 2-я – интактные крысы, которым вводили 17-Э2; 3-я – интактные самки, получавшие 17-Э2; 4-я группа – интактные крысы, которым вводили тамоксифен; 5-я – интактные крысы, которым вводили генистейн; 6-я – интактные самки, получавшие климадинон; 7-я – ОЭ самки, получавшие масляный растворитель в эквивалентном объеме внутримышечно (контроль 2); 8-я группа – ОЭ самки, получавшие 17-Э2; 9-я группа – ОЭ самки, получавшие 17-Э2; 10-я группа – ОЭ крысы, которым вводили тамоксифен; 11-я группа – ОЭ самки, получавшие тамоксифен и 17-Э2; 12-я группа – ОЭ самки, которым вводили тамоксифен и 17-Э2; 13-я группа – ОЭ самки, получавшие генистейн; 14-я группа – ОЭ крысы, получавшие в комбинации генистейн и 17-Э2; 15-я группа – ОЭ самки, которым вводили генистейн и 17-Э2; 16-я группа – ОЭ животные, получавшие климадинон; 17-я группа – ОЭ крысы, которым вводили климадинон и 17-Э2; 18-я группа – ОЭ самки, получавшие климадинон и 17-Э2. Все интактные самки перед началом эксперимента внутри каждой группы были разделены по фазам цикла таким образом, что в каждой стадии эстрального цикла находилось 4 – 5 животных. Поведенческие тесты проводили через 1 час после последнего введения указанных препаратов. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакетов прикладных программ ‹‹SPSS 12.0 for Windows›› и ‹‹STATISTICA 6.0›› с использованием однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA; post-hoc: Fisher’s LSD test) и U-критерия Манна-Уитни (Mann-Whitney U) (Беленький, 1959; Платонов, 2000). Различия между значениями считали статистически значимыми при p < 0,05. Все значения были представлены в виде M ± S.E.M., где M – среднее арифметическое, S.E.M. – стандартная ошибка среднего арифметического (Standart Error Means).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Влияние эстрального цикла и гормональной терапии 17- или 17-эстрадиолом на аффективное поведение интактных самок крыс



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 6 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.