WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Морфологические особенности целиакии детского возраста

-- [ Страница 1 ] --

УДК 611.341-091-053.2(574) На правах рукописи

МАХНЕВА АННА ФРИДРИХОВНА

Морфологические особенности целиакии детского возраста

14.00.15 – патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Республика Казахстан

Алматы, 2010

Работа выполнена в Научном центре педиатрии и детской хирургии Министерства здравоохранения Республики Казахстан

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Федотовских Галина Васильевна кандидат медицинских наук Шарипова Майра Набимуратовна
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Манекенова Кенжегуль Боранбаевна кандидат медицинских наук, доцент Есергепова Софья Ричардовна
Ведущая организация Западно-Казахстанский медицинский Университет имени М.Оспанова

Защита диссертации состоится «17» ноября 2010 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 09.01.03 при Казахском Национальном медицинском университете им. С.Д. Асфендиярова по адресу: 050012, Алматы, ул.Толе би, 94, актовый зал ректората.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казахского Национального медицинского Университета им. С.Д. Асфендиярова (050012, город Алматы, улица Богенбай батыра, 153).

Автореферат разослан « » 20 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук,

профессор Нурмухамбетова Б.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Целиакия – хроническое генетически детерминированное заболевание, обусловленное непереносимостью глютена и характеризующееся многообразием клинических форм, не поддающееся на сегодняшний день радикальному излечению (Бельмер С.В. и др., 2003).

Как известно течение целиакии имеет региональные особенности, так в Европе болезнь чаще всего протекает в виде средней, а в Африке – в виде тяжёлой формы (Валенкевич Л.Н. и др., 2001). По результатам последних исследований распространенность целиакии у детей в г.Алматы составляет 1:262 детской популяции с преобладанием атипичных форм, с клинической картиной низкорослости, торпидной анемии, остеопороза, психоневрологических нарушений и аллергических состояний (Шарипова М.Н. и др., 2007).

Общепринятым «золотым стандартом» диагностики целиакии признано гистологическое исследование слизистой оболочки тонкой кишки, при котором основным проявлением данного заболевания считается развитие гиперрегенераторной атрофии разной степени (Rubin W. 1960). В литературе имеется крайне малое количество работ, характеризующих гистологическое строение слизистой оболочки тонкой кишки при различных клинических формах целиакии, а приводящиеся в них данные противоречивы (Успенская И.Д. и др., 1993; Сабельникова Е.А. и др., 2003; Чиковани И.В., 2006). Практически не изучены структурные изменения слизистой оболочки тонкой кишки при клинически атипичной и типичной формах целиакии в рамках существующей международной морфологической классификации целиакии Corazza GR., Villanacci V. (2005).

Единодушной является оценка значимости морфометрических исследований, которые повышают достоверность диагностики. Однако данные морфометрического анализа слизистой оболочки тонкой кишки при целиакии значительно разнятся между собой и требуют уточнения (Лайл Хоман., 2000; Калинина Е.Ю., 2005; Чиковани И.В., 2006; Лысиков Ю.А., 2007; Марега Л.А. и др., 2007).

Ультраструктурной характеристике слизистой оболочки тонкой кишки при целиакии посвящено весьма малое количество работ (Rubin W. еt al, 1966; Жукова С.Г., 1999; Аруин Л.И. и др., 1998). Имеются лишь единичные работы по ультраструктуре слизистой оболочки тонкой кишки у детей, больных целиакией (McNicholl B. et al. 1976; Мухина Ю.Г. 1993; Лысиков Ю.А. 1995). При этом проведённые исследования касались исключительно типичной формы заболевания, что подчёркивает необходимость более глубокого изучения ультраструктуры слизистой оболочки тонкой кишки при различных формах целиакии.

В последние годы в мировой литературе и в отечественных источниках появились работы, посвящённые иммунологической диагностике целиакии (Боровик Т.Э. и др., 1993; Парфёнов А.И. и др., 1999; Камилова А.Т. и др., 2000; Эмануэль В.Л., и др., 2000). В связи с тем, что патологические изменения структуры слизистой оболочки тонкой кишки при стёртых и атипичных формах данного заболевания не всегда позволяют с уверенностью говорить о наличии целиакии, данные авторы начальным этапом диагностики предлагают сделать серологические методы исследования. Данные литературы свидетельствуют о взаимосвязи уровня антиглиадиновх антител с морфологическими изменениями слизистой оболочки тонкой кишки у детей с типичными формами целиакии (Ревнова М.О., 2005). В связи с этим существует необходимость выявления возможной взаимосвязи результатов серологических методов диагностики с морфологическими изменениями слизистой оболочки тонкой кишки при атипичной форме целиакии у детей.



Цель исследования:

Изучить морфологические особенности слизистой оболочки тонкой кишки при типичной и атипичной формах целиакии детского возраста.

Задачи исследования:

1. Изучить гистологические особенности слизистой оболочки тонкой кишки при клинически атипичной и типичной форме целиакии.

2. Определить морфометрические параметры слизистой оболочки тонкой кишки и степень клеточной инфильтрации при типичной форме целиакии.

3. Дать ультраструктурную характеристику слизистой оболочки тонкой кишки при типичной и атипичной формах целиакии у детей.

4. Провести сравнительный анализ морфологических изменений слизистой оболочки тонкой кишки и уровня антиглиадиновых антител классов А и G в сыворотке крови при типичной и атипичной формах целиакии у детей.

Научная новизна:

Получены новые данные о гистологических изменениях слизистой оболочки тонкой кишки при клинически типичной и атипичной формах целиакии у детей. Установлено, что гистологические изменения при типичной форме целиакии соответствуют стадиям В1 и В2, а при атипичной – А и В1 стадиям морфологических изменений по классификации Corazza GR., Villanacci V. (2005).

На основании гистометрических измерений толщины слизистой оболочки тонкой кишки и глубины крипт при типичной форме целиакии обнаружено значительное превышение общепринятых диагностических стандартов, свидетельствующее о высокой степени поражения слизистой оболочки тонкой кишки у изученной группы детей.

Выявлено увеличение доли межэпителиальных лимфоцитов в покровном эпителии и стабильно высокое содержание межэпителиальных лимфоцитов в эпителии крипт слизистой оболочки тонкой кишки по мере утяжеления стадий типичной и атипичной целиакии.

Дана ультраструктурная картина слизистой оболочки тонкой кишки при всех стадиях атипичной и типичной форм целиакии. Обнаружены микродефекты плазматической мембраны и микроворсинок покровного эпителия, а так же признаки развивающейся желудочной метаплазии цилиндрического эпителия при атипичной форме целиакии. На светооптическом уровне (полутонкие срезы) и в электроннограммах выделены светлые и тёмные недифференцированные и обнаружены низкодифференцированные бокаловидные и панетовские клетки.

Установлено, что уровень содержания антиглиадиновых антител в сыворотке крови больных несущественно отражает степень нарастания морфологических изменений слизистой оболочки тонкой кишки при атипичной форме целиакии. Не определено характерного снижения IgА в сыворотке крови больных атипичной формой целиакии.

Основные положения, выносимые на защиту

  1. Гистологические изменения слизистой оболочки тонкой кишки у детей с типичной формой целиакии относятся к стадиям В1 и В2, а при атипичной форме – к стадиям А и В1 по классификации Corazza GR и Villanacci V (2005)
  2. Гистометрические данные толщины слизистой оболочки тонкой кишки и глубины крипт при типичной форме целиакии значительно превышают диагностические стандарты, отражая высокую степень её поражения.
  3. Атипичная форма целиакии характеризуется ультраструктурными дефектами плазматической мембраны покровного эпителия и начинающимися признаками желудочной метаплазии цилиндрического эпителия.
  4. Уровень содержания в сыворотке венозной крови антиглиадиновых антител классов А и G не является показателем поражения слизистой оболочки тонкой кишки при атипичной форме целиакии.

Практическая ценность работы

    1. На основе гистологических и морфометрических данных у больных с типичной и атипичной формами целиакии установлена высокая степень поражения слизистой оболочки тонкой кишки, характерная для целиакии детей исследованной группы.
    2. Обоснована неэффективность использования определения антиглиадиновых антител классов А и G для прогнозирования тяжести поражения слизистой оболочки тонкой кишки при атипичной форме целиакии.

Внедрение результатов исследования

По итогам проведённых исследований разработаны методические рекомендации, утверждённые Минздравом РК «Диагностика и лечение целиакии у детей». – Алматы, 2008; издана монография «Целиакия у детей» (ISBN 9965-9549-8-4). – Алматы, 2008. Получен инновационный патент №21992 «Способ диагностики целиакии у детей». Результаты исследования внедрены в работу и применяются в лекционном курсе гастроэнтерологии на цикле усовершенствования врачей Научного центра педиатрии и хирургии.

Апробация диссертационной работы

Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на:

- XIV конгрессе детских гастроэнтерологов России (Москва, 2007),

- международной конференции «Современные методы и алгоритмы лабораторной диагностики» (Алматы, 2007),

- научно-практической конференции «Целиакия у детей. Современный взгляд на проблему» (Алматы, 2008),

- Х Юбилейном международном Славяно-Балтийском научном форуме гастроэнтерологов (Санкт-Петербург, 2008).

Структура и объём диссертации

Диссертация изложена на 102-х страницах машинописного текста и состоит из введения, основной части, заключения, практических рекомендаций, списка использованных источников. Работа иллюстрирована 11-ю таблицами и 53-мя рисунками и 2-мя гистограммами. Библиографический указатель включает 144 литературных источника.





Связь с планами научно-исследовательских работ

Работа выполнялась в рамках НТП: «Разработка научно-обоснованных предложений по ранней диагностике целиакии – врождённой патологии всасывания у детей на уровне ПМСП и повышения качества оказания ВСМП в условиях клиники» (номер гос.регистрации 0106РК01409, шифр О.0375).

ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

Материал и методы исследования

Материалом исследования являлись 556 биоптатов слизистой оболочки тонкой кишки (СОТК) детей в возрасте от 1 года до 16 лет, из них для дальнейшего исследования было отобрано 109 биоптатов, в которых морфологическая картина СОТК соответствовала целиакии (Ц). Обследуемые дети проживали в Алматинской, Атырауской, Восточно-Казахстанской, Жамбылской, Западно-Казахстанской, Карагандинской, Костанайской областях Казахстана. По клиническим данным больные распределились на две группы – с типичной и атипичной формами. В группу с типичной формой Ц вошли 67 детей - 25 мальчиков (37,3%) и 42 девочки (62,7%). Среди 42-х больных, составивших вторую группу, с атипичной формой Ц, мальчиков было 24 (57,1%), а девочек – 18 (42,9%). В контрольную группу вошли 11 детей, прооперированных по поводу пороков развития тонкого кишечника.

Важным условием диагностики Ц была правильная ориентировка биопсийного материала, так как тангенциальные срезы могли создавать ошибочное представление об атрофии ворсинок, поэтому материал фиксировали в 10% нейтральном формалине и, перед заливкой в парафин по общепринятой методике, ориентировали под лупой.

При светооптической микроскопии учитывалось: высота покровного эпителия и ворсинок, наличие ворсинок необычной формы, межэпителиальной лимфоцитарной инфильтрации и крупных уплощенных участков вместо ворсинок, а так же глубина крипт. Лейкоцитарная инфильтрация собственной пластинки слизистой оболочки оценивалась полуколичественно при помощи визуально-аналоговой шкалы. Выделялась слабая, умеренная и выраженная инфильтрация (Аруин Л.И., 1998).

Гистометрические исследования проводились на 67 биоптатах с типичной формой Ц и 11 гистологических препаратах стенки тонкой кишки из контрольной группы. Всего было проведено 1940 линейных измерений с последующим вычислением средних величин по 6-ти показателям. Для определения метрических характеристик исследуемого материала нами использовалась стандартная микроскопическая окулярная шкала в окуляре х7, объектив х10.

При гистометрических измерениях определялись (в мкм):

а) толщина слизистой оболочки (от собственной мышечной пластинки слизистой оболочки до верхнего края клеток всасывательного эпителия верхушек ворсинок);

б) длина ворсинки (от ее основания до верхнего края),

в) максимальная толщина ворсинки (по верхним краям эпителиоцитов боковых поверхностей ворсинки);

г) глубина крипты (от наружного края устья, до ее дна – по базальной мембране);

д) ширина крипты (по верхним краям эпителиоцитов);

е) высота эпителия (от апикального края до базальной мембраны).

Каждое из указанных измерений производилось в пяти местах с последующим вычислением средних величин.

Во всех биоптатах при помощи морфометрического квадрата в окуляре х7 (объектив х90), проводился количественный и качественный анализ клеточного инфильтрата. При помощи лабораторного счётчика подсчитывалось количество межэпителиальных лимфоцитов (МЭЛ) на 100 эпителиоцитов в покровном эпителии и эпителии крипт, общее количество клеточных элементов и процентное соотношение различных типов клеток.

Было проведено светооптическое исследование полутонких срезов толщиной 1-3 мкм, которые готовили на ультрамикротоме «Tesla» и окрашивали метиленовым синим, азуром II и основным фуксином по методу С.Humphrey, F.Pittman (1974). При этом эпителиальная ткань окрашивалась в синий, гликогеновые включения в малиновый, а жировые капли в оливкого-зелёный цвет.

Проводилось электронномикроскопическое исследование 10 биоптатов (3 с типичной и 7 с атипичной формой целиакии). Заливку в смолу эпон проводили по общепринятой методике, ультратонкие срезы готовили на ультрамикротомах «ЛКБ» и «Райхерт». Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца по E.S.Reynolds, наблюдение и съёмку ультратонких срезов ткани проводили на электронном микроскопе ЭВМ – 100Л.

Всем больным проводилось иммуноферментное исследование антиглиадиновых антител (AGA) классов А и G на ИФА-анализаторе фирмы «Bio-Rad» (США) при помощи реактивов ORGENTEC Diagnostika GmbH. Считывали оптическую плотность при 405 нм с помощью программного обеспечения «Zemfira» на ИФА-анализаторе открытого типа «Bio-Rad» (США).

При математической обработке данных для результатов всех серий находили средние арифметические величины и их средние квадратические ошибки, проверяли нормальность распределения результатов. Для сравнения средних величин в процессе статистической обработки использовали вычисление Т-критерия достоверности Крамера-Уэлча. Значения признавали достоверно значимыми при Т>1.997. Так же использовали корреляционный и регрессионный анализ. Различия признавали статистически значимыми при р<0,05. Для статистической обработки полученных результатов использовали программы Microsoft Office Excel и Biostat.

Результаты исследования и их обсуждение



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.