WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |

Иммунобиологические свойства хламидий, разработка и усовершенствование средств лабораторной диагностики и специфической профилактики хламидиозов сельскохозяйственных животных

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

ХУСАИНОВ ФИДАИЛЬ МИННИГАЛЕЕВИЧ

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ХЛАМИДИЙ, РАЗРАБОТКА И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СРЕДСТВ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ХЛАМИДИОЗОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

03.00.07.-микробиология

16.00.03.-ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

Казань-2007

Работа выполнена в лаборатории контроля и индикации возбудителей вирусных и хламидийных инфекций в объектах ветеринарного надзора ФГУ "Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных", на кафедре патологической анатомии имени К.Г.Боля Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана.

Научные консультанты: -доктор ветеринарных наук, профессор, Х.З.Гаффаров -доктор ветеринарных наук, профессор, Ф.З.Авзалов
Официальные оппоненты: Ведущее учреждение: -доктор ветеринарных наук, профессор К.М. Салмаков -доктор ветеринарных наук, профессор М.В. Харитонов -доктор ветеринарных наук, профессор П.М. Митрофанов -Пермская государственная сельскохозяйственная академия

Защита состоится " 25 " сентября 2007 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГУ "Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных" (ФГУ "ФЦТРБ–ВНИВИ") (420075, г. Казань, Научный городок–2).

С диссертацией можно ознакомиться библиотеке ФГУ "ФЦТРБ–ВНИВИ"

(г. Казань).

Автореферат разослан "____"_____________2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета к.в.н., с.н.с. Степанов В.И.

3

1.Общая характеристика работы

Актуальность темы. Хламидиозы с.-х. животных относятся к группе заболеваний зооантропонозов и представляют потенциальную угрозу здоровью человека из-за возможности заболевания людей в результате контакта с животными и птицами, пораженными ими (Шаткин А.А., 1989).

Паразитируя в организме, хламидии вызывают обширный спектр проявлений болезней: аборты, пневмонии, энтериты, артриты, конъюнктивиты, энцефалиты и др. У животных они способствуют бесплодию, снижению продуктивности, племенной ценности, нередко и гибели. В 70–80 годы прошлого века, отечественными учеными описаны и изучены большинство хламидийных инфекций с.-х. животных (Терских И.И. 1964; Гаффаров Х.З., 1969,1986; Боровик Р.В. и др. 1975; Митрофанов П.М., 1980; Караваев, Ю.Д., Налетов Н.И., 1981; Авзалов Ф.З., Курбанов И.А. и др.,1980; Шафикова Р.А. и др.,1987; Хамадеев Р.Х., 1990). Однако, несмотря на очевидные успехи в изучении хламидиозов животных, уровень массовой диагностики и имеющиеся эффективные средства специфической профилактики хламидиозов не удовлетворяют требованиям практической ветеринарии.

Приоритетным в профилактике и ликвидации хламидиозов с.-х. животных остается применение вакцинных препаратов. Использование антибиотиков с профилактической и лечебной целью при хламидиозах животных экономически не оправдано и далеко не всегда эффективно (Караваев Ю.Д. и др. 2006). В настоящее время проблема по созданию высокоэффективных биопрепаратов против хламидиозов крупного рогатого скота, свиней и лошадей приобретают особую актуальность. Таким образом, разработка и усовершенствование средств и методов лабораторной диагностики и специфической профилактики хламидиозов с.-х. животных, а также внедрения их в ветеринарную практику остаются в центре внимания научного поиска.

Цель и задачи исследований. Цель исследований изучить иммунобиологические свойства выделенных нами штаммов хламидий и на их основе разработать и усовершенствовать средства лабораторной диагностики и специфической профилактики хламидиозов сельскохозяйственных животных.

При этом предусматривалось решить следующие задачи:

изучить клинико-эпизоотологические проявления различных форм хламидиозов крупного рогатого скота, свиней и лошадей в хозяйствах региона Среднего Поволжья и Предуралья;

выделить хламидий и изучить их иммунобиологические свойства, отобрать штаммы, обладающие антигенными и иммуногенными свойствами для возможного использования в качестве производственных;

–разработать технологию изготовления набора препаратов для диагностики хламидиозов животных в РНГА, испытать его эффективность в лабораторно-производственных условиях;

–разработать научную основу технологии производства моно- и полиштаммовых вакцин для специфической профилактики хламидиозов крупного рогатого скота и свиней;

испытать экспериментальные и опытно-промышленные серии моно- и полиштаммовых противохламидиозных вакцин в различных регионах РФ и внедрить их в производство.

Научная новизна. Впервые выделены ранее неизвестные инфекционные агенты, являющиеся возбудителями болезней крупного рогатого скота, свиней и лошадей в хозяйствах региона Среднего Поволжья и Предуралья, которые по своим иммунобиологическим характеристикам (морфо-тинкториальным свойствам, патогенность для лабораторных животных, токсичность, групповая антигенная специфичность), а некоторые из них по фрагментам ДНК, выявленным специфическими праймерами (ПЦР), идентифицированы как представители рода Chlamydia (Chlamydophila).



Разработана технология получения эритроцитарного корпускулярного хламидийного антигена на основе возбудителя хламидиозного конъюнктивита крупного рогатого скота (штамм "СК–89") для изготовления "Набора препаратов для диагностики хламидиозов животных в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА)". Подтверждена его высокая активность, специфичность и чувствительность (в 2–3 раза) по сравнению с существующим диагностикумом "Набором для серологической диагностики с.-х. животных в РСК".

Разработан способ повышения выхода биомассы хламидий, отличающийся от существующей технологии её получения (авторское свидетельство № 1641883 с приоритетом от 24.10.88 г.)

Усовершенствована технология изготовления и применения инактивированной эмульсионной вакцины против хламидиоза крупного рогатого скота, позволяющей повысить иммуногенную активность вакцины путем установления оптимальной концентрации хламидийного антигена и дозу вакцины, обеспечивающей формирование напряженного противохламидийного иммунитета у животных в период беременности и в первые дни жизни молодняка (патент на изобретение № 2092188 с приоритетом от 29.10.1991г.).

Впервые, на основе антигенов штаммов хламидий "МЗ-89", "СК-89" и "250", выделенных, соответственно, при менингоэнцефалите, конъюнктивите и аборте крупного рогатого скота, разработана полиштаммовая инактивированная эмульсионная вакцина против хламидиоза крупного и мелкого рогатого скота, обладающая широким антигенным спектром, обеспечивающая максимальную иммунологическую защиту вакцинированных животных от различных клинических форм проявления хламидийной инфекции (положительное решение ФИПС РФ о выдаче патента с приоритетом от 06.12.2005г.).

Используя антигены двух штаммов хламидий "РС-85" и "ЛС-87", выделенных при абортах и пневмонии свиней, впервые разработана инактивированная эмульсионная вакцина для специфической профилактики хламидиоза у свиней, содержащая оптимальное соотношение и концентрацию хламидийных антигенов в одной дозе вакцины и обеспечивающая при однократной инъекции стойкий иммунитет в период супоросности (патент на изобретение № 2247577 с приоритетом от 20.12.2002 г.).

Комплексными иммуноморфологическими исследованиями установлено, что инактивированная эмульсионная вакцина против хламидиоза свиней вызывает выраженную иммунологическую перестройку в организме привитых свиней, проявляющаяся усилением структурно-функциональной активностью иммунокомпетентных клеток в лимфоидных органах в виде лимфоидно-гиперпластической, плазмоцитарной и макрофагальной реакции, создавая тем самым морфологическую основу для формирования у них напряженного иммунитета против заражения хламидиями и не обладает побочным действием.

Практическая значимость. В результате проведенных исследований разработана и усовершенствована технология изготовления и применения моно-полиштаммовых вакцины для специфической профилактики хламидиозов крупного и мелкого рогатого скота и свиней. Использование их в системе противохламидийных мероприятий в неблагополучных по хламидиозу хозяйствах, способствует сокращению количества абортов и мертворождаемости у маточного поголовья и увеличению в 2-4 раза рождаемости и сохранности молодняка.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на ежегодных отчетных научных конференциях ФГУ "ФЦТРБ–ВНИВИ" (1987-2006гг.); региональных и республиканских научно-практических конференциях (Казань, 1987,1988,1989,1990; Троицк,1989; Киров, 1998); Всесоюзных и Всероссийских научных конференциях (Москва, 1987; Новосибирск, 1991; Харьков 1991; Владимир, 1995; Щелково, 1996,2001;2005; Казань 2002; Екатеринбург,1999); Международных научных конференциях (Москва, 1991; Воронеж, 1997; Казань, 1998, 2000; Ульяновск, 2006); съездах (Казань, 1995, 2000).

Результаты основных этапов исследований прошли комиссионную проверку с участием представителей ВГНКИ ветпрепаратов и ЦВЛ (г.Москва), заслушивались на заседаниях Ученых Советов ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (1994-2000 гг.). На ВДНХ СССР в 1991г. "Вакцина против хламидиозов крупного рогатого скота" была отмечена серебряной медалью № 8092; "Вакцина полиштаммовая против хламидиоза крупного рогатого скота" представленная на ВВЦ в (1994г.) была удостоена медали "ЛАУРЕАТ ВВЦ" № 2357; "Вакцина против хламидиоза свиней"(1999г.) удостоена медали "ЛАУРЕАТ ВВЦ" №1983.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликована 51 работа, получены три патента на изобретение РФ, одно авторское свидетельство.

На защиту выносятся следующие основные положения:

-результаты выделения и изучения иммунобиологических свойств хламидий, являющиеся этиологическими агентами болезней крупного рогатого скота, свиней и лошадей в хозяйствах Среднего Поволжья и Предуралья;

-разработка лабораторного регламента получения эритроцитарного хламидийного антигена и испытание "Набора препаратов для диагностики хламидиозов с.-х. животных в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА)";





-разработка и усовершенствование технологии изготовления и применения вакцины против хламидиоза крупного рогатого скота и оценка её эффективности в производственных условиях;

-разработка научной основы технологии изготовления и испытание эффективности полиштаммовой инактивированной вакцины против хламидиоза крупного рогатого скота и овец и свиней в различных регионах РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 350 страницах и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований (6 глав), обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения и список использованной литературы (всего 532 источника, в том числе 265 иностранных). Диссертация иллюстрирована 80 таблицами, 22 рисунками.

2.Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы.

Работа выполнялась в период 1987-2006 гг. в соответствии с государственным планом НИОКР в лаборатории контроля и индикации возбудителей вирусных и хламидийных инфекций в объектах ветеринарного надзора ФГУ "ФЦТРБ–ВНИВИ" (Казань), на Херсонской биофабрике и на кафедре патологической анатомии КГАВМ им. Н.Э.Баумана, и апробирована в хозяйствах, неблагополучных по хламидиозам с.-х.животных в регионах Среднего Поволжья и Предуралья.

В опытах были использованы 70000 шести-семи суточные развивающиеся КЭ, экспериментально зараженные и естественно больные животные, белые мыши -1620, морские свинки - 400, овцы- 1510, крупный рогатый скот -112020, свиньи -21661, лошади -990.

При выполнении работы были использованы 12 штаммов хламидий, адаптированных к размножению на КЭ.

При эпизоотологическом обследовании хозяйств, руководствовались "Методическими указаниями по эпизоотологическому обследованию (И.А.Бакулов, Г.Г.Юрков и др.,1986).

Исследованию было подвергнуто 400 проб патологического и клинического материала, 2914 проб сывороток крови, полученных от крупного рогатого скота, 464 от свиней и 350 проб от лошадей.

Для изоляции и индикации хламидий использовали КЭ, реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и иммуноферментный анализ (ИФА). Хламидийные антитела выявляли в реакциях связывания комплемента (РСК, РДСК), непрямой гемаглютинации (РНГА) и в тест - системе ИФА.

Молекулярно-генетическую идентификацию штаммов хламидий 250, "СК89, МЗ89, ЛС87, РС85 проводили методом полимеразной цепной реакцией (ПЦР). ДНК хламидий экстрагировали гуанидининизотиоцианатным методом («Рибосорб» ЦНИИЭМ, Россия). ПЦР осуществляли с использованием специфичных к Chlamydia psittaci олигонуклеотидных праймеров, сконструированных (R.G.Hewinson еt. al., 1997). CPF: 5/-GAAGACACTCCTCAAAGCC-3/ и CPR:5/-CCTTCCCACATAGTGCCCATC-3//

Патогенность, иммуногенность и перекрестный иммунитет между штаммами хламидий, определяли на белых мышах, морских свинках, используя разные способы введения 10% -ной взвеси хламидий с инфекционным титром не ниже 10-5,0 10-6,5 ЭЛД50/0,3 мл. Токсичность штаммов хламидий, выделенных от крупного рогатого скота и свиней проверяли на белых мышах общепринятым методом.

При получении хламидийного эритроцитарного антигена использовали способ культивирования хламидий разработанный нами (Р.Х.Хамадеев с соавт.,1990), а хламидиосодержащий материал очищали методом Poffenroth L., с соавт. (1973). Корпускулярный хламидийный антиген готовили из аллантоисной жидкости РЭК (Хамадеев Р.Х соавт., 1995). Стандартизацию антигенов проводили по оптической плотности на ФЭК56М. Танизацию эритроцитов осуществляли по методу описанному Г.Фримелем (1984). Специфические хламидийные и контрольные сыворотки получали на овцах и крупном рогатом скоте. Активность и специфичность хламидийных сывороток оценивали в РСК, РНГА и ИФА. Очистку хламидийных сывороток от неспецифических антител выполняли, используя иммуносорбент (А.Е.Гурвич, 1986).

Опытные серии Набор препаратов для диагностики хламидиоза животных в РНГА изготавливались согласно НТД (утв. директором ВНИВИ и согласовано с департаментом ветеринарии МСХ РФ от 15.03.01.). "Набор препаратов для диагностики хламидиоза с.-х. животных в РНГА" испытывались комиссионно в областных и республиканских ветлабораториях Пермской, Кировской, Ульяновской областей, Республики Татарстан и в Центральной научно-методической ветеринарной лаборатории (г. Москва).

Иммуногенные и антигенные свойства инактивированных эмульсионных моно- и полиштаммовых вакцин против хламидиозов крупного рогатого скота и свиней изучали на крупном рогатом скоте, овцах и свиньях.

Экспериментальные исследования по усовершенствованию технологии изготовления и способа применения вакцины против хламидиозов крупного рогатого скота, выполненные в условиях лаборатории и неблагополучных по хламидиозу хозяйствах нашли отражение в НТД, утвержденных ГУВ МСХ СССР от 13.10.91г. У вакцинированных животных наблюдали поствакцинальную реакцию на введения биопрепарата и изучали в динамике накопления специфических противохламидийных антител.

Полиштаммовую вакцину против хламидиоза крупного рогатого скота, овец и свиней применяли и изготавливали согласно НТД, утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России от 14.07.99г., 16.05.2000г. и директором ВНИВИ (г. Казань) от 28.11.94 г., 28.03.95 г.

(ТУ 9388-003-00-00492374-00).

Иммуногенные и антигенные свойства инактивированных эмульсионных моно- и полиштаммовых вакцин, изучали в лабораторных опытах на нетелях, телятах, овцах и свиньях. Контроль вакцин на стерильность и безвредность осуществляли согласно ТУ 10–07–253–91.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.