WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 |

Изучение клеток с микроядрами в оценке возрастных закономерностей пролиферации эпителия щитовидной железы

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Кораблёва

Татьяна Владимировна

ИЗУЧЕНИЕ КЛЕТОК С МИКРОЯДРАМИ В ОЦЕНКЕ

ВОЗРАСТНЫХ ЗАКОНОМЕРНОСТЕЙ

ПРОЛИФЕРАЦИИ ЭПИТЕЛИЯ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

03.00.25 гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва – 2007

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении

высшего профессионального образования

«Ярославская государственная медицинская академия

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Павлов Алексей Владимирович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Бродский Всеволод Яковлевич

член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Банин Виктор Васильевич

Ведущее учреждение: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П.Павлова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертации состоится «2» апреля 2007 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д.208.072.04 в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д.1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РГМУ Росздрава по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, д. 1

Автореферат разослан «26» февраля 2007 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета

доктор медицинских наук профессор А.И.Щеголев

В В Е Д Е Н И Е

Актуальность проблемы Многие современные молекулярные теории старения рассматривают накопление повреждений генетического аппарата соматических клеток в качестве одной из ведущих причин развития возрастных нарушений их структуры и функции (Z.A.Medvedev,1990; G.M.Martin,1991; P.S.Timiras,1994; AA.Morley,1995).

Фолликулярный эпителий щитовидной железы (ЩЖ) характеризуется высокой лабильностью в ответ на воздействие различных эндогенных и экзогенных факторов (А.И.Кубарко,С.Ямасита,1998); на протяжении постнатального онтогенеза закономерно изменяются основные гистофизиологические характеристики тиреоидной паренхимы, в том числе и ее пролиферативная активность (В.Л.Быков,1979; M.Habraand.,N.J.Sarlis,2005). Последний феномен проявляется не только в неодинаковой интенсивности процессов клеточного деления в разные возрастные периоды (Ю.А.Романов с соавт.,1969; K.Christov et al.,1973; E.Conde et al.,1992), но и в постепенном накоплении нерепарируемых дефектов генома тироцитов, приводящих к развитию очаговых гиперпластических и неопластических изменений органа (S.Mariotti et al.,1995; M.Takaoka et al.,1995; K.Krohn et al.,2005).

Ассоциированные с возрастом генетические повреждения, приводящие к развитию нестабильности хромосомного аппарата (P.A.Jacobs et al.,1961; B.B.Ganguly,1993; A.Wojda, M.Witt,2003), могут быть визуализированы на светооптическом уровне при метафазном анализе делящихся клеток или с помощью цитогенетического метода анализа микроядер. Последний основан на учете в популяции количества постмитотических интерфазных клеток с добавочными ядерными тельцами (микроядрами), образующимися из ацентрических фрагментов или целых хромосом в результате воздействия генотоксических факторов разной природы (W.Schmid,1975; J.A.Heddle et al.,1991, А.Д.Дурнев, С.Б.Середенин,1998, M.Fenech,2000).

В серии исследований, проведенных ранее на кафедре гистологии Ярославской государственной медицинской академии, показано, что микроядерный тест на модели предварительно стимулированных к размножению фолликулярных тироцитов в опытах in vivo является информативным методом оценки интенсивности влияния генотоксичных агентов на тиреоидную паренхиму (А.В.Павлов с соавт., 2001,2006; М.А.Гансбургский, 2005).

Однако данные о возможности использования цитогенетического метода исследования микроядер для изучения возрастных перестроек популяции фолликулярных тироцитов в условиях естественного уровня клеточного обновления эпителия ЩЖ в литературе отсутствуют. Продолжает оставаться недостаточно изученным ряд важных количественных характеристик пролиферативной активности тиреоидного эпителия, необходимых для понимания механизмов развития нестабильности генома при старении (возрастная динамика формирования хромосомных аберраций, величин суточного пролиферативного пула и плоидности паренхимы). Учитывая очаговый характер и неравномерную выраженность пролиферативных процессов на уровне органа (Р.А.Гибадулин, Ю.А.Романов,1966; В.А.Глумова с соавт.,1980; A.Faggiano et al.,2004), существенный интерес представляет исследование возрастной динамики размножения железистых клеток в составе основных структурных компонентов тиреоидной паренхимы (фолликулы, интерфолликулярный эпителий).

Цель исследования - анализ возрастных закономерностей пролиферации фолликулярного эпителия щитовидной железы, приводящих к образованию клеток с микроядрами и проведение на этой основе оценки развития нестабильности генома данной клеточной линии при старении.



Задачи исследования:

  1. Изучение возрастной динамики величин митотического индекса и суточного пролиферативного пула популяции фолликулярных тироцитов щитовидной железы лабораторных белых крыс.
  2. Исследование частоты патологических митозов железистых клеток в основные возрастные периоды.
  3. Анализ динамики содержания клеток с микроядрами в тиреоидной паренхиме на протяжении постнатального онтогенеза.
  4. Морфометрическое и цитофотометрическое (содержание ДНК) изучение ядерного аппарата микронуклеированных тироцитов.
  5. Изучение особенностей возрастной динамики пролиферации железистых клеток в составе основных структурных компонентов тиреоидной паренхимы.

Научная новизна Впервые в рамках целостного исследования детально исследована возрастная динамика формирования микронуклеированных тироцитов во взаимосвязи с пролиферативными процессами в тиреоидной паренхиме. Установлен закономерный фазовый характер феномена онтогенетического накопления тироцитов с микроядрами, выявлена прямая корреляция между интенсивностью процессов микронуклеации и частотой патологических митозов железистых клеток по мере старения организма.

При цитофотометрическом и морфометрическом анализе ядерных структур аберрантных клеток впервые установлено, что возрастное формирование тироцитов с микроядрами связано с активизацией кластогенных механизмов повреждения генетического аппарата и не сопровождается процессами их полиплоидизации.

Впервые определена величина суточного пролиферативного пула тироцитов на уровне тиреоидной паренхимы в целом и отдельных ее компонентов (фолликулы различных размерных классов, интерфолликулярный эпителий) в основные возрастные периоды постнатального развития крыс.

Основные теоретические положения, выносимые на защиту

  1. На протяжении постнатального онтогенеза крыс в фолликулярном эпителии увеличивается частота патологических митозов и клеток с микроядрами, наиболее интенсивно эти процессы выражены при старении.
  2. Связанное с возрастом формирование микронуклеированных тироцитов развивается в рамках сохранения диплоидного генома.
  3. В основе феномена усиленного формирования микронуклеированных тироцитов при старении лежат преимущественно кластогенные механизмы повреждения генома железистых клеток.

Научно-практическая значимость Полученные результаты конкретизируют механизмы и условия формирования клеток фолликулярного эпителия щитовидной железы с микроядрами в постнатальном онтогенезе, как чувствительного морфологического маркера развития возрастной нестабильности их генома. Оценка интенсивности образования тироцитов с микроядрами в условиях естественного уровня клеточного обновления в тиреоидной паренхиме может быть использована для раннего выявления ассоциированных с возрастом нарушений пролиферации железистого эпителия в качестве одного из возможных морфологических критериев оценки риска развития неопластических поражений органа, а также при биомониторинге влияния антропогенных факторов на паренхиму щитовидной железы.

Внедрение Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедрах гистологии, цитологии и эмбриологии Рязанского государственного медицинского университета, Смоленской государственной медицинской академии, а также в практику научных исследований отдела радиоэкологии Института биологии Коми НЦ УрО РАН.

Апробация работы Материалы диссертации доложены и обсуждены на 7 и 8 Международных симпозиумах «Применение современных методов анализа в изучении структуры и функции клетки» (Архангельск,2005,2006), 5 Всероссийской конференции «Бабухинские чтения в Орле» (2006), VIII Конгрессе Международной ассоциации морфологов (Орел, 2006).

Публикации по теме диссертации По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, в том числе 2 – в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации Диссертация объемом 92 страницы машинописного текста состоит из введения, обзора литературы, методической главы, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и библиографического указателя. Работа содержит 6 таблиц и 25 рисунков (в том числе 55 микрофотографий, 15 графиков и диаграмм, часть иллюстраций дана в виде монтажей). Список литературы включает 159 источников, в том числе 115 иностранных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Опыты выполнены на 156 белых крысах Вистар (самцы) разного возраста с точной датой рождения, выращенных в стандартных условиях кафед­рального вивария; эвтаназию производили передозировкой паров эфира.

Распределение животных по возрастным группам и сериям наблюдений представлено в таблице 1.

1 серия - на гистологических срезах (фиксация по Буэну, окраска гематоксилином с эозином) ЩЖ изучена возрастная динамика митотического индекса (МИ) фолликулярных тироцитов.

2 серия - авторадиографическое выявление ДНК-синтезирующих клеток (3Н-тимидин, удельная активность препарата 914 ГБк/ммоль, разовая доза - 30 Бк/г массы, внутрибрюшинное введение): 4 инъекции 3Н-тимидина с интервалом 7,5-8 ч.; взятие материала - через 1 ч после последней инъ­екции изотопа, общая продолжительность опыта составила 24 ч.





3 серия - на мазках изолированных тироцитов изучена возрастная динамика содержания клеток с микроядрами.

4 серия - эксперименты по морфологическому и морфометрическому анализу микроядер тироцитов, образовавшихся при действии факторов с заведомо известными механизмами повреждений генетического аппарата:

а) с целью моделирования кластогенного эффекта (И.А.Алов,1972) 8 крысам проводили однократное гамма-облучение всего организма (48 ч. после операции,

аппарат «Рокус М», источник мощности дозы - 1,847 сГр/с, дозы 2,0 и 4,0 Гр);

б) для моделирования анеугенного эффекта через 48 ч. после операции 6 крысам однократно внутрибрюшинно вводили 0,1% водный раствор колхицина в дозе 1 мг/кг массы (T.Vallarini-Kelly, P.Morales-Ramirez,1998).

Таблица 1.

Распределение животных по возрастным группам

Период постнатального развития крыс

(Западнюк с соавт.,1974)

Изученные сроки

Серии опытов

Всего

1

2

3

4

I. Период молочного кормления:

-

a) новорожденные (1-3 сут.)

1, 3 сут.

6

4

6

-

16

б) сосуны (6-21 сут.)

6, 9, 12, 15, 18, 21 сут.

18

-

-

-

18

II. Период полового созревания:

а) инфантильные (22-50сут.)

24, 27, 30 сут.

9

6

6

-

21

б) ювенильные (51-120 сут.)

2, 3, 4 мес.

9

-

6

-

15

III. Период репродуктивный:

а) молодые (5-10 мес.)

6, 7 мес.

10

12

6

14

42

б) взрослые (11-18 мес.)

12 мес.

4

-

6

-

10

IV. Период выраженных старческих изменений:

а) предстарые (19-23 мес.)



Pages:   || 2 | 3 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.