WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 |

Морфофункциональные изменения тимуса и иммунобиохимические показатели крови при воздействии цеолитсодержащим трепелом

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Агафонкина Татьяна Всеволодовна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ТИМУСА

И ИММУНОБИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ

ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ

ЦЕОЛИТСОДЕРЖАЩИМ ТРЕПЕЛОМ

03.00.25. – Гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва - 2006

Работа выполнена в Чувашском государственном университете

им. И.Н. Ульянова

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор МЕРКУЛОВА

Лариса Михайловна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор ТОРБЕК

Виктория Эдуардовна

доктор биологических наук,

профессор КУРИЛО

Любовь Федоровна

Ведущая организация: Российский университет

Дружбы народов

Защита диссертации состоится «___»_________________2006 г. в «___» часов на заседании диссертационного совета Д 208.040.01 при Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова по адресу: 119992, Москва,

ул. Трубецкая, д.8, стр.2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЦНМБ ГОУВПО ММА имени И.М.Сеченова (117998, Москва, Нахимовский проезд, д.49).

Автореферат разослан «___»_________________2006 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук,

профессор Владимир Анатольевич Варшавский

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Проблема иммунодефицитов во всем мире имеет большое практическое и теоретическое значение. Многие факторы — экологические, геологические, климатические, а также стрессовые и физические нагрузки — снижают иммунологическую реактивность. Иммуносупрессию различного характера и глубины также вызывают лекарственные препараты, широко используемые для лечения многих заболеваний (Крылов Ю.Ф. и др., 2005). Кроме того, на развитие иммунозависимых заболеваний влияет такой немаловажный фактор, как несбалансированное питание. Факторами риска стали ограниченное потребление натуральных неочищенных продуктов и переход к рафинированным, лишенным витаминов, минералов, клетчатки (Тутельян В.А., Суханов Б.П., 2004; Шендеров Б.А., 2006). Это негативно отражается на здоровье человека, снижая качество его жизни и трудоспособность. Хронический дефицит витаминов и минералов требует обязательной коррекции (Сусликов В.Л., 2002).

С иммунологических позиций состояние здоровья населения на современном этапе характеризуется двумя особенностями: снижением иммунологической реактивности и, как следствие этого, повышением уровня острых и хронических заболеваний с вялым, непрерывно рецидивирующим течением, плохо поддающихся антибактериальной и симптоматической терапии (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2000).

Анализ многочисленных исследований по клинической иммунологии показывает, что практически при всех заболеваниях человека имеются нарушения иммунной системы (Обухова О. О. и др., 2004). Их глубина и направленность варьируют в зависимости от нозологии, формы и тяжести болезни, этиологических факторов, генетической предрасположенности, возраста, пола и т. д.

В связи с этим интерес врачей всех специальностей к проблеме иммунотерапии необычайно возрос. Препараты, оказывающие воздействие на иммунитет, стали широко применяться в клинической практике при лечении самых разнообразных заболеваний (Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2003; Маркова Т. П., 2004; Лусс Л. В., 2005). В последние годы появилось большое количество биологически активных добавок, используемых для профилактики ряда иммунодефицитных состояний, а также для устранения дефицита витаминов и микроэлементов (Кульбачинский В.В., 2005; Литвинов Н.Н., Иванов В.М., 2005; Тутельян В.А., и др., 2005). Их преимуществом является то, что источником необходимых организму витаминов, минералов, аминокислот, полиненасыщенных жирных кислот, растительного волокна (клетчатки) служит растительное, животное или минеральное сырье (Гравель И.В., 2005). В литературе появились сообщения о применении минеральной биологически активной добавки – цеолитсодержащего трепела (Волков А.Н., 2000; Булыгина И.Е., 2002; Колотилова М.Л. и др., 2003). По составу он сходен с биологически активными добавками “Полисорб” и “Литовит”, рекомендованными к приему при различных патологиях (Новоселов Я.Б., Ронинсон А.Г., 1998; Потапова Г.В., и др., 2000; Чуйкова К.И., Вожаков С.В., 2005). Одним из месторождений данного вещества является село Первомайское Алатырского района Чувашской Республики, что создает для республики определенное удобство в получении препарата и его доставке, а также экономическую выгоду.

В последнее десятилетие сформировалась новая наука – нейроиммуноэндокринология. Представление о нейроиммуноэндокринных процессах играет большую роль как в понимании закономерностей функционирования организма в норме, так и для объяснения патогенеза многих иммунопатологических, нервно-психических и эндокринных расстройств (Корнева Е.А, 2003). Тимус является важным звеном кооперации нейроэндокринной и иммунной систем. Иммунорегуляторными факторами, обеспечивающими функции тимуса, наряду с цитокинами и тимическими гормонами, являются биогенные амины (Кветной И.М. и др., 1999; Hadden J.W., 1998). Несмотря на кажущуюся изученность различных структурно-функциональных характеристик тимуса, следует отметить, что роль биогенных аминов в его функции, особенно в условиях иммуностимуляции, изучена недостаточно. Всестороннее исследование влияния иммунотропных препаратов на органы иммунной системы, особенно на тканевом уровне, необходимо для избирательного, целенаправленного воздействия на нарушенные гистофизиологические процессы, что является обязательным условием успешной иммуномодуляции (Труфалкин В.А., Шурлыгина А.В., 2002).



Несмотря изученность морфофункционального состояния тимуса после иммуносупрессии на фоне приема цеолитсодержащего трепела (Стручко Г.Ю., 2003), отсутствуют сведения об изменении структуры тимуса и состоянии биоаминсодержащих структур тимуса и крови при приеме цеолитсодержащего трепела без сопутствующих патологических состояний при разной длительности кормления. Более детальное изучение иммуноморфологических изменений организации тимуса позволит выяснить точки приложения цеолитсодержащего трепела в иммунном процессе.

Цель исследования: Изучить морфофункциональное состояние тимуса и показатели крови крыс через 2, 3 и 4 недели кормления цеолитсодержащим трепелом для оценки возможных иммуномодулирующих свойств препарата.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Провести морфометрию коркового и мозгового вещества долек тимуса у интактных крыс и через 2, 3 и 4 недели приема ЦТ.

2. Изучить люминесцирующие структуры тимуса, выявить изменения содержания биогенных аминов в них и определить их соотношение через 2, 3 и 4 недели приема ЦТ.

3. Изучить состояние тучноклеточной популяции тимуса в эти же сроки приема ЦТ.

4. Определить количество эритроцитов, лейкоцитов, лимфоцитов, уровень гемоглобина, а также распределение биогенных аминов в форменных элементах и плазме периферической крови у интактных крыс и через 2, 3 и 4 недели кормления ЦТ.

5. Исследовать показатели иммунограммы (уровень иммуноглобулинов, ЦИК, активность системы комплемента, фагоцитарная активность нейтрофилов) у интактных крыс и через 2, 3 и 4 недели кормления ЦТ.

6. Определить биохимические показатели крови (мочевина, креатинин, мочевая кислота, кальций, общий белок) у интактных крыс и через 2, 3 и 4 недели кормления ЦТ.

7. Провести корреляционный анализ изученных показателей.

8. Оценить и сопоставить полученные данные для определения направленности воздействия ЦТ.

Научная новизна работы:

1. Впервые в динамике прослежены изменения морфологической характеристики тимуса при приеме ЦТ: отмечено увеличение ширины коркового, диаметра и площади мозгового вещества долек тимуса.

2. Установлено, что на фоне кормления ЦТ возрастают количество и размеры люминесцирующих гранулярных клеток тимуса.

3. Впервые показано, что прием ЦТ сопровождается значительным уменьшением уровня гистамина во всех биоаминсодержащих структурах тимуса, увеличением содержания катехоламинов в структурах тимуса с максимальным повышением через 3 недели, резким уменьшением уровня всех биоаминов в люминесцирующих структурах тимуса через 4 недели приема ЦТ;

4. В работе установлено, что прием ЦТ приводит к росту количества тучных клеток за счет дегранулированных форм.

5. Впервые показано, что на фоне кормления ЦТ соотношение (серотонин + гистамин) / катехоламины в структурах тимуса и клетках крови ниже значений у интактных крыс; в структурах тимуса максимальное снижение наблюдается через 3 недели, в клетках крови – через 4 недели приема ЦТ.

6. Впервые обнаружено, что кормление ЦТ приводит к увеличению содержания IgG и IgA через 2 и 4 недели, повышению количества лейкоцитов, волнообразным и разнонаправленным изменениям показателей активности системы комплемента и уровня ЦИК.

7. Впервые установлено, что прием ЦТ приводит к нарастанию силы корреляционных взаимодействий между биогенными аминами структур тимуса и крови и показателями крови.

Научно-теоретическая значимость работы:

Материалы диссертационного исследования дополняют представление о морфофункциональном состоянии тимуса в условиях иммунокоррекции, позволяют выработать подходы к регуляции функционирования различных звеньев иммунной системы. Полученные данные об изменении биогенных аминов в тимусе и периферической крови, общих, биохимических и иммунологических показателей крови при приеме ЦТ представляют определенный интерес для гистологии и иммунологии.

Практическая значимость работы:

Результаты данного исследования могут служить обоснованием применения ЦТ в качестве иммуномодулирующего средства. Работа представляет несомненный интерес для фармакологов и практических врачей: терапевтов и иммунологов.

Результаты работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий и семинаров на кафедрах цитологии, гистологии и эмбриологии, патологической физиологии, функциональной и лабораторной диагностики Чувашского государственного университета. Итоги исследования отражены в опубликованных статьях и тезисах.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Прием ЦТ сопровождается значительным увеличением ширины коркового, диаметра и площади мозгового вещества долек тимуса, ростом количества гранулярных люминесцирующих и тучных клеток. Во всех изучаемых структурах тимуса отмечается значительное снижение уровня гистамина на всех сроках и возрастание катехоламинов, особенно через 3 недели кормления ЦТ. Через 4 недели приема ЦТ наблюдается резкое снижение уровня биогенных аминов во всех биоаминсодержащих структурах тимуса и крови.





2. Кормление ЦТ приводит к увеличению содержания лейкоцитов крови за счет абсолютного увеличения уровня лимфоцитов, повышению фагоцитарной активности нейтрофилов, уровня IgG и IgA и к некоторому снижению уровня гемоглобина и количества эритроцитов через 4 недели приема ЦТ.

3. Суммируя вышеизложенные данные, можно полагать, что ЦТ оказывает существенное влияние на иммунную систему, причем наиболее выраженный стимулирующий эффект наблюдается через 3 недели приема препарата.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на IV международной конференции по функциональной нейроморфологии “Колосовские чтения - 2002” (С.-Петербург, 2003), V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Москва, 2004), I съезде физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе статей – 7, тезисов в материалах международных, всероссийских научных конференций – 4.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 146 cтраницах машинописного текста (собственно текста – 110 страниц), состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, пяти разделов собственных исследований, обсуждения результатов и заключения, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 27 таблицами, 49 рисунками, включая 15 микрофотографий. Список литературы содержит 352 источника, в том числе 128 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 170 белых беспородных крысах-самцах со средней массой 200-250 г, 20 из которых были интактными. Уход и все процедуры по уходу осуществлялись по нормам и правилам обращения с лабораторными животными.

Опытные животные были разделены на три группы:

1-я – животные, в ежедневный рацион которых вводился ЦТ из расчета 5% общей массы корма в течение 2 недель (50 крыс);

2-я – животные, в ежедневный рацион которых вводился ЦТ в вышеуказанных дозах в течение 3 недель (50 крыс);

3-я – животные, в ежедневный рацион которых вводился ЦТ в вышеуказанных дозах в течение 4 недель (50 крыс).

Эксперименты проводились в осенний период. Объектом настоящего исследования служили тимус и кровь. Материал забирали под глубоким эфирным наркозом через 2, 3 и 4 недели после начала кормления трепелом во второй половине дня. Изготавливали криостатные срезы тимуса толщиной 10 мкм.

В работе использовались следующие методы:

1. Окраска гематоксилином-эозином (Ромейс Б., 1954) – в качестве общегистологической окраски с последующей морфометрией коркового и мозгового вещества тимуса.

2. Люминесцентно-гистохимический метод Фалька–Хилларпа (Falk B., Hillarp N., 1962) в модификации Е.М. Крохиной (Крохина Е.М., Александров П.Н., 1969) – для избирательного выявления катехоламин (КА)- и серотонин (СТ)- содержащих структур тимуса.

3. Люминесцентно-гистохимический метод Кросса, Эвена, Роста (Cross et al., 1971) – с целью идентификации гистаминосодержащих (ГСТ) структур тимуса и крови.

4. Метод цитоспектрофлуориметрии (Юденфренд С., 1965; Карнаухов В.Н., 1978; Калмыков В.Л., 1982) – для количественного определения уровня катехоламинов, серотонина и гистамина в аминосодержащих структурах крови и тимуса. Для этого на люминесцентный микроскоп была установлена насадка ФМЭЛ-1А при выходном напряжении 900 В. Замер интенсивности свечения производился в условных единицах (показатели шкалы регистрирующего прибора-усилителя). Для удобства подсчета цифровые значения умножали на 100. Для определения уровня серотонина использовали интерференционный светофильтр с длиной волны 525 нм, катехоламинов – с длиной волны 480 нм, гистамина – с длиной волны 515 нм.

5. Для характеристики суммарно направленного действия биогенных аминов использовалось соотношение: (CТ+ГСТ)/KA.

6. Окраска полихромным толуидиновым синим по Унна – для качественной и количественной характеристики тучных клеток тимуса. Количество тучных клеток в тимусе подсчитывали в десяти полях зрения микроскопа при увеличении об.10, ок.40. Представление о функциональном состоянии тучных клеток дает подразделение их по степени дегрануляции на четыре типа: Т-0 – тучные клетки с плотно заполненными неразличимыми гранулами и ядром; Т-1 – тучные клетки с отдельно различимыми гранулами и неполностью замаскированным ядром; Т-2 – клетки с хорошо различимыми гранулами как внутри, так и вокруг клетки и отчетливым ядром; Т-3 – опустошенные тучные клетки с единичными гранулами внутри и рассеянными гранулами вокруг клетки (Линднер Д.П. и др., 1980; Стручко Г.Ю. и др., 1995).

7. Общий анализ крови (количество эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, уровень гемоглобина и гематокрит) проводился с помощью автоматического гематологического анализатора “Sysmex” (Япония).

8. Окраска мазков крови методом Романовского–Гимза – для подсчета лейкоформулы крови (Ромейс Б., 1954).

9. Количественное определение иммуноглобулинов класса G, M и А методом радиальной иммунодиффузии (Фримель Х., 1987).

10. Определение активности системы комплемента по 50% гемолизу (Карпищенко А.И., 1999).

11. Определение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови (Карпищенко А.И., 1999).

12. Определение фагоцитарной активности нейтрофилов с латексом (Карпищенко А.И., 1999).

13. Определение биохимических показателей крови (мочевина, креатинин, мочевая кислота, холестерин, кальций, общий белок) проводилось на автоматическом биохимическом анализаторе «Dimension AR» фирмы Du Pont (США).



Pages:   || 2 | 3 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.