WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 


Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Молекулярные маркёры сифилитической инфекции

-- [ Страница 2 ] --

Таблица 2

Распределение больных сифилисом по формам заболевания

№ п/п Основные формы заболевания Количество больных %
1 Сифилис скрытый ранний 38 25,0
2 Сифилис скрытый поздний 5 3,3
3 Сифилис скрытый не уточненный 3 2,0
4 Сифилис первичный половых органов 16 10,5
5 Сифилис вторичный кожи и слизистых 25 16,5
6 Сифилис вторичный рецидивный 3 2,0
7 Половой и бытовой контакт с больными сифилисом 18 11,8
8 Сероконтроль и обследование 25 16,4
9 Нейросифилис 17 11,2
10 Реинфекция 2 1,3
Всего: 152 100

ГХ-МС исследования периферической крови проведены у 145 больных, мочи — у 72 больных, ликвора — у 17 больных. Из 152 больных положительные серологические пробы (РПГА, РП, РИФ, ИФА) установлены у 121 пациента, отрицательные — у 31 пациента.

Поражения нервной системы (нейросифилис) выявлены у 17 больных (11,2%); поражения мочеполовой системы (циститы, уретриты, пиелонефриты) — у 16 больных (10,5%); поражение кожи и слизистых оболочек — у 25 больных (16,3%).

В качестве контроля хроматографических методов исследования исследованы хроматографические характеристики биологических жидкостей при других патологических состояниях: хирургический сепсис (27 больных), туберкулёз (21 больной), эхинококкоз печени (15 больных). Исследования проводились на материале ФГУ Институт хирургии им. А. В. Вишневского Росмедтехнологий в клинико-биохимической лаборатории КДО (руководитель КДО — доктор биологических наук В. С. Демидова, ответственный исполнитель — старший научный сотрудник КДО В. Г. Истратов).

Хроматографические исследования проводились по разработанной схеме ГХ-МС анализа биологического материала больных сифилисом с переводом исследуемых соединений в ТМС-соединения и идентификации с помощью масс-селективного детектора. Использована ГХ-МС система Agilent 6890 MSD-5973 с масс-селективным детектором и идентификацией соединений с помощью химической станции Chem-Station. Схема ГХ-МС анализа биологического материала представлена в табл. 3.

Индикация активаторов «кооперативной чувствительности» микробов — лактонов, хинолонов, фурановых эфиров бора и родственных соединений проводилась с помощью комплекса методов: ГХ-МС анализа с масс-селективным детектором (Agilent 6890 MSD-5973), ВЭЖХ с масс-селективным детектором и метода капиллярного электрофореза.

Для ГХ-МС исследований использован хроматограф НР-6890 с масс-селективным детектором MSD-5973. Линейный динамический диапазон определяемых концентраций для MSD модели 5973 позволяет для пикограммов образца получать масс-спектры, пригодные для библиотечного поиска. Идентификация соединений проводилась с помощью химической станции GS/MSD-Chem/Station.

Масс-селективный детектор (MSD) модели 5973 позволяет идентифицировать и количественно определить все компоненты сложных биологических матриц. Он обеспечивает классические спектры электронного удара в режиме полного сканирования и регистрации отдельных ионов.

Для максимального эффективного использования возможностей ГХ-МС системы НР-6890 / MSD-5973 предварительно проводили моделирование процесса идентификации органических соединений с помощью программы фирмы Resteck.

В сложных для идентификации химических соединений случаях (незнакомое химическое соединение или низкий уровень содержания вплоть до следовых количеств) использовали скрининговые масс-спектрометрические исследования с применением селективных ионов (2 или 3 ионов характеристичных).





Для подготовки проб биологического материала использовали методы твёрдофазной экстракции с применением специальных предколонок и твёрдофазных картриджей фирмы Agilent.

Статистическую обработку результатов исследования проводили на ПЭВМ Pentium IV. В работе анализировались только статистически достоверные данные. Статистическая обработка данных клинико-лабораторных исследований проводилась с применением многомерной статистики — корреляционного, факторного и кластерного анализов — по программе Гарвардского университета BMDP-2M для биомедицинских исследований. Также использовался пакет прикладных программ Excel версия 7.0, раздел программ «Анализ данных». Различия между сравниваемыми величинами признавались статистически достоверными при уровне значимости p<0,05 по критерию Стьюдента.

При корреляционном анализе использовался коэффициент Юла, который высчитывался с помощью таблицы сопряжённости, а также с помощью корреляционной матрицы программ биомедицинских исследований Гарвардского университета BMDP-2M. Величина коэффициента корреляции указывала на связь между факторами: от 0 до 0,3 — слабой силы, от 0,3 до 0,7 — средней силы, от 0,7 до 0,9 — сильную взаимозависимость, 1 — полную (функциональную) связь.

Для оценки диагностической значимости разработанных хроматографических критериев, использовали унифицированные критерии пригодности лабораторных тестов для диагностики определенной формы патологии, применённые R. Galen и S. Gambino (1975) и В. В. Меньшиковым (1982) основанные на решении теоремы Байеса (расчёт вероятности распределения результатов исследования).

Результаты исследования и их обсуждение

Трудности диагностики сифилиса обусловлены широкой распространённостью заболевания, возможностью поражения любых органов и тканей, наличием скрытых форм заболевания, отсутствием диагностических возможностей раннего выявления органных поражений.

Таблица 3

Схема ГХ-МС анализа биологического материала

Биологический материал

(биоптаты тканей, сыворотка крови, биологические жидкости)

Гомогенизация материала депротеинизация сульфосалициловой кислотой
экстрагирование 1 мл гексана кислотный гидролиз 2,5 N HCl в течение 6 час при t 370 С выпаривание до сухого остатка Твердофазная экстракция
перевод в ТМС-соединения с помощью BSTFA водная фаза растворение в метаноле Запись масс-спектра
хромато-масс-спектрометрия перевод в ТМС-соединения с помощью BSTFA перевод в ТМС-соединения с помощью BSTFA хромато-масс-спектрометрия
Липидные компоненты Оксикислты хромато-масс-спектрометрия Лактоны
Жирные кислоты Аминосахара Хинолоны
Изомеры жирных кислот Моносахара Углеводные компоненты Фурановые эфиры
Моносахара
Аминосахара
Субъединицы ЛПС


Pages:     | 1 || 3 | 4 |
 




Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.