WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Биохимические и цитохимические критерии в оценке эффективности использования липосомальных лекарственных препаратов при острой экспериментальной печеночной недостаточности, вызванной воздействием четы

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

РОМАНОВА Людмила Викторовна

Биохимические и цитохимические критерии в оценке эффективности

использования липосомальных лекарственных препаратов при острой

экспериментальной печеночной недостаточности, вызванной воздействием

четыреххлористого углерода.

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону

2009

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ставропольская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию и в Ставропольском научно-исследовательском противочумном институте Роспотребнадзора

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ

В.И. Ефременко

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Владимцева И.В.

доктор биологических наук, профессор

Бондаренко Т.И.

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет Росздрава» (г.Краснодар)

Защита состоится «__»_____________2009 г. в__час. на заседании диссертационного совета Д. 212.208.07. по биологическим наукам в Южном федеральном университете (344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Большая Садовая, 105, ауд._____)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Южного федерального университета (344006, г. Ростов – на – Дону, ул. Пушкинская, 148).

Автореферат разослан «___»_____________2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук Т.С. Колмакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Нарушение обменных процессов в печени наблюдается при различных заболеваниях. Вследствие патологических процессов может развиваться острая печеночная недостаточность (ОПН) в результате массивного некроза печеночных клеток, вызванного различными причинами и проявляющаяся внезапным тяжелым нарушением функции печени. Одной из этих причин является отравление гепатотропными ядами, в частности четыреххлористым углеродом (ССl4).

В связи с особенностями молекулярных механизмов действия ССl4 на субклеточные мембраны гепатоцитов (микросомальная активация, перекисное окисление липидов как механизм нарушения каталитических свойств мембраносвязанных ферментов), изучение биологического действия гепатотропного яда представляет интерес как модель молекулярной патологии мембранных структур (Губский, 1989). Вследствие этого, детальное изучение молекулярных основ химического поражения гепатоцитов приобрело общебиологическое и медицинское значение. Для коррекции обменных процессов при этом используют различные лекарственные препараты, способствующие стабилизации клеточных мембран, снижению процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и нормализации всех видов обменных процессов. В ряде случаях эффективность использования данных лекарственных средств оказывается низкой из-за их неспособности эффективно преодолевать анатомические и клеточные барьеры организма, токсичности некоторых препаратов, кратковременного пребывания в организме вследствии быстрой утилизации и выведения.

В последнее время появляются сообщения о широком применении липосом в качестве транспортеров лекарственных препаратов (Dijrstra et al., 1998; Севастьянов, 1999; Абрамов и др., 2001; Хворостов, 2001). Используя липосомальные формы лекарственных препаратов, иммобилизованные во внутренний объем или мембрану липидных везикул, удается преодолеть недостатки их интактных форм. Широкие возможности применения липосом в терапии различных заболеваний обусловлены совокупностью их биологических свойств: химической инертностью, биосовместимостью, биодеградируемостью, практически отсутствием токсических и антигенных свойств. Липосомы обладают возможностью направлять заключенные в них вещества в определенные органы и ткани организма, что позволяет заметно снижать дозу препарата, сохраняя эффективность биологического действия. Кроме этого, липидные везикулы способны предохранять заключенные в них вещества от действия ряда факторов, обеспечивая пролонгированный эффект фиксированных в них лекарственных препаратов.

Однако в литературе практически отсутствуют данные о влиянии липосомальных лекарственных препаратов, введенных разными путями, на биохимические и цитоэнзимохимические процессы организма при ОПН. В связи с этим комплексное исследование биохимических показателей углеводного, белкового, липидного обменов и ПОЛ, а также ферментативной активности у экспериментальных животных (белых мышей) с ОПН, вызванной введением им ССl4, является актуальным.

Цель работы:

Целью настоящей работы явилось конструирование липосомальных лекарственных препаратов и исследование их метаболических эффектов в регуляции гомеостаза у животных при острой печеночной недостаточности, вызванной отравлением четыреххлористым углеродом.

Задачи исследования:

  1. Сконструировать липосомальный лекарственный препарат, последовательно используя методы «обращения фаз» и «замораживания – оттаивания» с включением гидрофобных лекарственных средств в наружную мембрану липидных везикул, а гидрофильных – в их внутренний объем, и оценить его биологическую эффективность.
  2. Изучить влияние интактных и липосомальных лекарственных средств на интенсивность перекисного окисления липидов по уровню малонового диальдегида, активность каталазы и суммарной пероксидазной активности в сыворотке крови белых мышей при интоксикации четыреххлористым углеродом.
  3. Исследовать влияние интактных и липосомальных лекарственных средств на показатели углеводного обмена.
  4. Изучить влияние интактных и липосомальных лекарственных средств на белковый обмен по содержанию общего белка, мочевины и уровню тимоловой пробы.
  5. Определить состояние липидного и пигментного обменов после введения экспериментальным животным четыреххлористого углерода и лечения интактными и липосомальными лекарственными препаратами по уровню общего холестерина, триацилглицеридов и общего билирубина.
  6. Изучить функциональное состояние печени при лечении животных интактными и липосомальными лекарственными средствами после введения четыреххлористого углерода по активности аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, гаммаглутамилтрансферазы в сыворотке крови, миелопероксидазы и кислой фосфатазы в нейтрофилах крови.
  7. Исследовать гистологические изменения в печени, почках и селезенке у животных после введения им четыреххлористого углерода и лечения этих животных.
  8. Сравнить действие интактных и липосомальных лекарственных форм при разных способах их введения по эффективности коррекции биохимических, цитохимических показателей и гистологических изменениях в органах у животных с острой печеночной недостаточностью.

Научная новизна работы.



Впервые создана новая липосомальная форма лекарственного препарата с иммобилизацией водорастворимых лекарственных средств во внутренний объем липидных везикул (аскорбиновой кислоты, АТФ, селенита натрия, эссенциале), а жирорастворимых (-токоферола) – в мембрану липосом.

Основываясь на анализе различных биохимических, цитохимических и морфологических показателей у экспериментальных животных с острой печеночной недостаточностью, доказаны преимущества использованных липосомальных форм лекарственных препаратов над их интактными формами.

Липосомальные лекарственные средства оказывали более выраженное влияние на восстановление свободнорадикальных процессов, белкового, липидного и пигментного обменов, функционального состояния печени. Эффективность терапии этими препаратами подтверждается тенденцией к нормализации показателей активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы в нейтрофилах крови.

Установлено, что пероральное введение липосомальных лекарственных препаратов животным с экспериментальной острой печеночной недостаточностью обеспечивало у них более быструю коррекцию гомеостаза, по сравнению с их внутрибрюшинном введением.

Основные положения, выносимые на защиту.

  1. Изготовленный стабильный, комплексный липосомальный лекарственный препарат, обладающий пролонгированным действием, является более высокоэффективным, по сравнению с интактными лекарственными средствами, при лечении острой печеночной недостаточности у экспериментальных животных, вызванной введением им четыреххлористого углерода.
  2. При введении экспериментальным животным четыреххлористого углерода выявлены нарушения органоспецифических обменных процессов и баланса про- и антиоксидантных систем.
  3. Липосомальные лекарственные препараты, вводимые экспериментальным животным с острой печеночной недостаточностью, более эффективно нормализуют биохимические и цитоэнзимохимические показатели, функциональную активность печени.
  4. Лечение острой печеночной недостаточности у экспериментальных животных комплексным липосомальным лекарственным препаратом, вводимым перорально, более эффективно, по сравнению с липосомальным лекарственным препаратом, введенным внутрибрюшинно.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследования расширяют существующие представления об использовании липосомальных лекарственных препаратов при лечении экспериментальной острой печеночной недостаточности и подтверждают их более высокую эффективность перед интактными лекарственными формами. В работе представлены новые данные о получении липосомальных лекарственных препаратов и оценке их действия при различных путях введения при лечении острой печеночной недостаточности, вызванной введением экспериментальным животным четыреххлористого углерода. Критериями оценки эффективности действия липосомальных лекарственных препаратов служили многочисленные биохимические показатели крови экспериментальных животных, а также ряд цитохимических и морфологических показателей при лечении острой печеночной недостаточности, что открывает новые перспективы их практического применения в медицине.

Разработаны методические рекомендации: «Оценка эффективности лечебного действия липосомальных и интактных лекарственных препаратов у экспериментальных животных, подвергшихся воздействию токсинов различной природы», утвержденные ректором Ставропольской государственной медицинской академии на основании решения Ученого совета академии (протокол №3 от 30.03.2005).

Получен патент на изобретение: «Способ оценки эффективности дезинтоксикационной терапии при воздействии токсинов различной природы» (№2334989 от 27.09.2008 г.).





Материалы работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий в Ставропольской государственной медицинской академии в курсе биологической, общей и биоорганической химии, а также при чтении базовой дисциплины «Биологической и медицинской химии» на кафедре ГОУ ВПО Ставропольского государственного университета Федерального агентства по образованию, о чем свидетельствуют акты внедрения.

Апробация диссертационной работы.

Материалы диссертации докладывались на научно-практической конференции сотрудников Ставропольского научно-исследовательского противочумного института совместно с сотрудниками Ставропольской государственной медицинской академии (Ставрополь, 2007).

Основные положения диссертации были представлены на 11-й Итоговой научной конференции студентов и молодых ученых СГМА (2003), Научных конференциях Ставропольского научно-исследовательского противочумного института (Ставрополь, 2004), Научной конференции «Здоровье: социальные и медико-биологи-ческие аспекты исследования» (Ставрополь, 2005), 7-й Международной конференции «Циклы природы и общества» (Ставрополь, 2005), 15-й Итоговой научной конференции студентов и молодых ученых СГМА (2007).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 3 в центральной печати, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК РФ – 1 статья. Личный вклад 50%, 0,17 п. л.

Получен патент на изобретение: «Способ оценки эффективности дезинтоксикационной терапии при воздействии токсинов различной природы» (№2334989 от 27.09.2008 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа содержит 20 таблиц и иллюстрирована 13 рисунками. Список использованной литературы включает 150 отечественных и 60 зарубежных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперимент проводили в течение 30 суток на 500 белых беспородных мышах обоего пола массой 18-20 грамм с соблюдением правил, предусмотренных Европейской комиссией по надзору за проведением лабораторных и других опытов с участием экспериментальных животных разных видов. Мыши находились в стандартных условиях с естественной сменой освещения и соблюдением общевиварийного рациона. У всех животных был свободный доступ к пище и воде.

Экспериментальных животных поделили на следующие группы:

1 – контрольная (n= 20 мышей) – данной группе животных ССl4 не вводили;

2 – группа животных (n= 120 мышей), у которых вызывали острую печеноч- ную недостаточность путем однократного внутрибрюшинного введения 50% масляного раствора ССl4 (0,25 ЛД50);

3 – группа животных (n= 120 мышей), которым проводили коррекцию обменных процессов, нарушенных воздействием ССl4, путем введения интактным препаратом (разовые дозы рассчитывали в соответствии с фармакопейными данными из расчета на массу тела животного) – аскорбиновая кислота (2,0 мг), АТФ (1,0 мг), -токоферол (0,5 мкг), селенит натрия (0,00017 мг), эссенциале (2,5 мг), которые инъецировали однократно внутрибрюшинно ежедневно в течение 6 дней, начиная через сутки после введения токсина;

4 – группа животных (n= 120 мышей), лечение которых проводили липосомальными лекарственными средствами, вводимыми внутрибрюшинно на 2, 5, 8, 11, 14, 17 сутки в тех же дозах, что и интактные;

5 – группа животных (n= 120 мышей), лечение которых проводили липосомальными лекарственными средствами, вводимыми перорально на 2, 5, 8, 11, 14, 17 сутки в тех же дозах, что и интактные.

Липосомы получали из фосфолипидов, выделенных из головного мозга свиньи методом «выпаривания и обращения фаз», при этом жирорастворимый -токоферол включался в структуру мембран липосом, а иммобилизацию водорастворимых лекарственных препаратов проводили методом шестикратного «замораживания – оттаивания» липосом в жидком азоте с последующим оттаиванием в водяной бане при температуре 400С. Количество иммобилизируемых во внутренний объем водорастворимых лекарственных средств оценивали косвенным методом по включению глюкозы. Процент включения составлял 72,2 ± 2,1%.

Животных декапитировали на 3, 10, 20, 30 сутки и в сыворотке крови определяли биохимические показатели углеводного, белкового, липидного обменов, уровня общего билирубина, активность некоторых ферментов, продукты перекисного окисления липидов, цитохимические показатели нейтрофилов крови. В указанные сроки для изучения морфологических изменений внутренних органов после декапитации животных у них извлекали печень, почки, селезенку.

Для решения планируемых задач исследования использованы следующие методы:

  1. Определение продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и активности ферментов антиоксидантной защиты по:

- содержанию продуктов МДА в сыворотке крови по методу В. Б. Гаврилова, 1987;

- активности каталазы по методу С. И. Крайнева, О. Д. Кушманова и др., 1974;

- суммарной пероксидазной активности (СПА) в плазме крови по методу А. А. Покровского, 1977.

  1. Оценка состояния белкового обмена:

- определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом с использованием стандартного набора реагентов «Вектор-Бест» (г. Новосибирск);

- определение тимоловой пробы в сыворотке крови по методу Маклагана в модификации Хуэрго и Поппера (в описании В. С. Камышниковой, 2003) с использованием стандартного набора реагентов «Био-Лахема-Тест» (Чехословакия);

- определение мочевины в сыворотке крови фотоколориметрическим методом с использованием стандартного набора реагентов «Диахим-Мочевина» (г. Санкт-Петербург).



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.