WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Экспериментальное обоснование сочетанного применения ципрофлоксацина с окситоцином для местного лечения гнойных ран

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Скоробогатых Юрий Иванович

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ СОЧЕТАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЦИПРОФЛОКСАЦИНА С ОКСИТОЦИНОМ ДЛЯ МЕСТНОГО ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНЫХ РАН

03.02.03 «Микробиология»

14.01.17 «Хирургия»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Оренбург 2011

Работа выполнена в УРАН Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН и ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской федерации.

Научные руководители:

академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Бухарин Олег Валерьевич

доктор медицинских наук, профессор Курлаев Петр Петрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Усвяцов Борис Яковлевич

доктор медицинских наук,

профессор Сафронов Андрей

Александрович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской федерации.

Защита состоится «26» мая 2011 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д. 208.066.03. при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, д. 6, телефон: (3532) 40-35-02, факс (3532) 77-24-59, зал заседаний диссертационного совета, официальный сайт: http://orgma.ru/

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОрГМА

Автореферат разослан «___» ______________ 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

д. м. н., профессор Немцева Наталия Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Гнойная инфекция в хирургии занимает особое место среди наиболее важных проблем клинической медицины и с течением времени её актуальность приобретает все большую значимость (Ерюхин И. А., 1992; Русаков В. И., 2000). В настоящее время при лечении гнойных ран используются новые антисептики, химиотерапевтические и иммунотропные лекарственные средства, многокомпонентные мази на гидрофильной и гидрофобной основе, протеолитические ферменты, включаемые в структуру перевязочных, шовных и пластических материалов, методы физического и электрохимического воздействия на рану (Девятов В.А., 2000, Лахно В.М., 2001; Яковлев В.П., 2002). Но, несмотря на это существенного прогресса в терапии хирургической инфекции не достигнуто. Во многих случаях низкая эффективность применения традиционных лекарственных средств обусловлена способностью микроорганизмов, инициирующих гнойно-воспалительный процесс, инактивировать факторы естественной резистентности макроорганизма: лизоцим, интерферон, комплемент и др. (Бухарин О.В., 1992, 1993, 2000), ростом доли антибиотикорезистентных и антибиотикозависимых штаммов микроорганизмов (Курлаев П.П., 2001) и образовнием ими биопленок (Фадеев С.Б., 2006, 2010), частой сменой возбудителя в процессе лечения (Фадеев С.Б., 2005). Кроме того, препараты для местного медикаментозного лечения часто используются без учета фазы раневого процесса.

Местное применение сочетаний антибиотиков с окситоцином позволило значительно улучшить результаты лечения больных с гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей (Курлаев П.П., 2001), с острыми гнойными заболеваниями легких и плевры (Абрамзон О.М., 2002, 2004), с гнойным гайморитом (Райцелис И.В., 2000), при абдоминальном сепсисе в эксперименте (Кретинин С.В., 2008).

Эффективным в настоящее время при лечении гнойных ран считается применение мазей на гидрофильной основе с использованием смеси полиэтиленоксидов разной молекулярной массы (ПЭО-400 и ПЭО-1500 в соотношении 4:1) (Даценко Б.М., 1995), обладающей высоким осмотическим эффектом, необходимым в I фазу раневого процесса. Кроме того, перспективным является использование кремнийорганического глицерогидрогеля (Хонина Т.Г., 2005), обладающего высокой регенерирующей способностью, что важно для II и III фаз гнойных ран.

Однако окситоцин совместно с фторхинолонами, имеющими циклопропильный радикал, в составе мазей на основе ПЭО и КОГ, ранее не применялся, неизвестно их сочетанное влияние на рост микроорганизмов и их персистентный потенциал.

В связи с вышеперечисленным, создание мазей, включающих в свою структуру, помимо гидрофильной основы, препарат фторхинолонового ряда (ципрофлоксацин) и окситоцин позволило бы расширить арсенал средств, используемых в лечении гнойных ран.

Цель и задачи исследования

Целью исследования явилось экспериментальное обоснование эффективности применения комбинации ципрофлоксацина с окситоцином на основе полиэтиленоксидов и кремнийорганического глицерогидрогеля для местного лечения гнойных ран.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

  1. Определить видовой состав, персистентные свойства и образование биопленок клинических штаммов бактерий, возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей.
  2. Изучить антимикробный эффект комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» и их влияние на антилизоцимную активность и биопленко-образование облигатно-анаэробных и факультативно-анаэробных бактерий, в сравнении с монопрепаратами.
  3. Исследовать антимикробное действие гидрофильных основ (полиэтиленоксиды и кремнийорганический глицерогидрогель) совместно с комплексом «ципрофлоксацин+окситоцин», а также влияние комбинации данных препаратов на антилизоцимную активность и биопленкообразование микроорганизмов.

4. В эксперименте на животных при лечении гнойных ран оценить эффективность местного применения комбинации «ципрофлоксацин+окси-тоцин» с ПЭО основой (ципроксиновая мазь І) и комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» с КОГ основой (ципроксиновая мазь ІІ).



Научная новизна

Проведенные исследования in vitro выявили высокую антимикробную активность совместного применения окситоцина и ципрофлоксацина, что выразилось в значительном снижении МПК ципрофлоксацина при его сочетании с окситоцином в отношении представителей различной гноеродной микрофлоры. При сочетании ципрофлоксацина с окситоцином не только повышалась чувствительность к ципрофлоксацину у чувствительных штаммов микроорганизмов, но и появлению чувствительности у резистентных культур бактерий, что, вероятно, может рассматриваться как один из подходов решения проблемы воздействия на антибиотикорезистентную госпитальную микрофлору.

Установлено выраженное снижение АЛА и БПО клинических изолятов микроорганизмов при их культивировании в питательной среде, включающей комбинацию ципрофлоксацина с окситоцином.

Комбинация «ципрофлоксацин+окситоцин» с гидрофильными основами (ПЭО и КОГ) обладала высокой антимикробной активностью и угнетала антилизоцимную активность и биопленкообразование патогенов. Снижение средних значений АЛА и БПО микроорганизмов при действии комбинации препаратов «ципрофлоксацин+окситоцин» и их сочетания с гидрофильной основой сопровождалось перераспределением клонов бактерий в сторону увеличения численности диссоциантов с низкими значениями признака и без признака.

На основе экспериментальных данных создана мазь для лечения гнойных ран в первой фазе раневого процесса (мазь ципроксиновая І), включающая ципрофлоксацин с окситоцином на основе полиэтиленоксидов (патент РФ на изобретение № 2306947, 27.09.2007). Использование комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» на другой основе – кремнийорганический глицерогидрогель, позволило создать мазь (мазь ципроксиновая ІІ), пригодную для лечения II и III фаз гнойных ран (положительное решение формальной экспертизы по заявке на изобретение, регистрационный № 2011107059 от 24.02.2011).

Местное применение мази ципроксиновой І и ІІ в эксперименте обеспечивало более раннюю элиминацию микрофлоры из очага воспаления, прекращение выделения гнойного экссудата и стимуляцию репаративных процессов в ране, что в конечном итоге приводило к более быстрому выздоровлению животных.

Научно-практическое значение

Высокая экспрессивность и пенетрантность антилизоцимной активности и биопленкообразования стафилококков, как основных возбудителей ГВЗМТ, в сочетании с определением их антибиотикочувствительности, позволяет считать данные критерии в качестве информативных параметров при исследовании и создании препаратов, пригодных для борьбы с персистирующей инфекцией.

Практическое значение исследования заключается в разработке новой лекарственной формы - ципроксиновых мазей І и ІІ, действенность которых доказана в экспериментах in vitro и in vivo при лечении гнойных ран животных: ципроксиновая мазь І показала свою эффективность в I фазу, а ципроксиновая мазь ІІ – во II и III фазы раневого процесса.

Проведённые исследования служат основанием для представления материалов в отдел регистрации лекарственных средств, при «Федеральной службе по надзору в сфере Здравоохранения и социального развития» для получения разрешения на клиническую апробацию комбинированного препарата – ципрофлоксацина с окситоцином на основе полиэтиленоксидов и кремнийорганического глицерогидрогеля для лечения гнойных ран.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Широкая распространенность и высокая экспрессивность антилизоцимной и биопленкообразующей активности стафилококков позволяет рекомендовать данные критерии для оценки эффективности препаратов при лечении гнойных ран.

2. Применение комбинации «ципрофлоксацин+окситоцин» в сочетании с ПЭО и КОГ показало высокую эффективность за счет увеличения антимикробного эффекта и снижения антилизоцимной и биопленкообразующей способностей патогенов in vitro и in vivo.

Апробация работы и публикации

Основные результаты исследований представлены и обсуждены на научной конференции ОрГМА «Актуальные вопросы экстренной и восстановительной хирургии» (Оренбург, 2005), научной конференции ОрГМА «Молодые ученые - здравоохранению» (Оренбург, 2006), научно-практической конференции ЮУЖД и ЧелГМА «Актуальные вопросы хирургии» (Челябинск, 2006), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 90-летию образования первой в России кафедры травматологии (Санкт-Петербург, 2008).





Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, получен патент РФ на изобретение и изданы методические рекомендации.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 166 страницах и состоит из введения, 7 глав, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Последний включает 266 источника, в том числе 216 работ отечественных и 50 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 6 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Проведены бактериологические посевы содержимого гнойных полостей (раневого отделяемого) полученного от 168 больных в возрасте от 18 до 84 лет, находившихся на лечении в Отделенческой клинической больнице на ст. Оренбург в период с 2000 по 2006 гг.

Бактериологическое исследование проводили путем посева гнойного отделяемого на селективные среды с определением уровня бактериальной обсемененности методом секторальных посевов (Биргер О.М., 1982). Для выделения облигатно-анаэробных бактерий анаэробные условия создавали с помощью газогенераторных пакетов “GasPak Anaerobic System” (BBL, США) в анаэробной камере “GasPak 150” (BBL, США). Биохимический профиль факультативно-анаэробных микроорганизмов оценивали с помощью коммерческих тест-систем: "ENTEROtest 24", "STREPTOtest 16", "STAPHYtest 16", "NEFERMtest" (LACHEMA, Чехия) и "API20CAUX" (bioMerieux, Франция).

Антилизоцимную (АЛА), антикомплементарную (АКА), антикарно-зиновую (АКрА) и «антиинтерфероновую» (АИА) активности исследовали по методикам О.В. Бухарина с соавт. (1999). Образование биоплёнок оценивали по способности штаммов бактерий к адгезии на поверхности 96-луночных полистероловых стерильных планшет (O`Toole G., 2000). Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам проводили методом серийных микроразведений в соответствии с международным стандартом NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1997).

In vitro исследовано влияние ципрофлоксацина, ципрофлоксацина с окситоцином и их сочетаний с ПЭО и КОГ на клинические штаммы бактерий: Staphylococcus aureus (12 штаммов), Staphylococcus epidermidis (12 штаммов), Streptococcus haemolyticus (12 штаммов), Escherichia coli (6 штаммов), Klebsiella pneumonia (6 штаммов), Proteus vulgaris (12 штаммов), Pseudomonas aeruginosae (12 штаммов), Bacteroides fragilis (6 штаммов), Peptostreptococcus anaerobius (6 штаммов).

При определении антимикробного эффекта ципрофлоксацина при его сочетании с окситоцином и гидрофильными основами, а также их влияния на персистентные свойства бактерий, проводилось сокультивирование микроорганизмов исследуемых групп с суббактериостатическим концентрациями антимикробного препарата. ПЭО и КОГ смешивали с питательным бульоном в соотношении 1:9 (Кириллов Д.А., 2004).

Для характеристики гетерогенности популяций использовали индекс диссоциации, который рассчитывали как долю (%) колоний определенного фенотипа к общему числу колоний.

В исследованиях использовали ципрофлоксацин («Dr. Reddy,s», Индия), окситоцин («Гедеон Рихтер», Венгрия), окситоцин-плацебо («Гедеон Рихтер», Венгрия), полиэтиленоксид (ПЭО) 1500 и ПЭО 400 (ОАО «СИБУР-НЕФТЕХИМ», Дзержинск), кремнийорганческий глицерогидрогель (ИОС им. И. Я. Постовского УрО РАН, Екатеринбург).

Названия полученных многокомпонетных мазей составлены в соответствии с методическими рекомендациями «Рациональный выбор названий лекарственных средств» (Стародубцев В.И., 2005).

В экспериментах in vivo использовали 87 взрослых белых крыс линии Vistar весом 150-200 гр., гнойные раны моделировались по методу Е. М. Данилиной (1983). Раны экспериментальных животных инфицировали штаммом S.aureus № 104 в количестве 109 КОЕ/мл. На 4 сутки формировались гнойные раны. На 5 сутки начинали местное лечение.

Для сравнения эффективности лечения экспериментальных животных в I фазу раневого процесса разделили их на 4 группы (эксперимент №1): в 1-й группе (12 крыс) местно применяли комбинацию ципрофлоксацина с окситоцином на основе ПЭО (ципроксиновая мазь І). Перевязки с изучаемой лекарственной формой проводили ежедневно до очищения раны и появления краевой эпителизации с последующим местным применением гидрофобной мази «Метилдиоксилин»; во 2-й сравниваемой группе (12 крыс) местно использовали по такой же методике ципрофлоксацин на гидрофильной основе без окситоцина, в 3 сравниваемой группе (12 крыс) применяли только окситоцин на гидрофильной основе; в контрольной 4 группе (12 крыс) раны заживали естественным путем без применения лекарственных средств. В эксперименте №2 лечение животных было проведено на всех 3-х фазах раневого процесса. В 1-й группе (6 крыс) местно применяли ципроксиновую мазь І. Перевязки проводили по выше описанной методике, с последующим местным применением гидрофобной мази «Метилдиоксилин», в контрольной 2 группе (6 крыс) применяли мазь «Левомеколь» в первую фазу и во второй фазе мазь «Метилдиоксилин» и в сравниваемой 3 группе (6 крыс) в первую фазу раневого процесса использовали ципроксиновую мазь І и во второй фазе ципроксиновую мазь ІІ. Оценка летальности в каждой из исследуемых групп животных была проведена на 21 крысе. Из ран производились отпечатки до лечения, на третьи и пятые сутки. Отпечатки фиксировали на предметных стеклах смесью этанола и метанола (в соотношении 1:1) для последующего микроскопического исследования. Процесс биопленкообразования изучали по нативным препаратам после их окраски кристаллвиолетом с использованием иммерсионной световой микроскопии при увеличении объективов Х40 и Х100 («Carl Zeiss»). Эффективность лечения оценивали по времени очищения и появления краевой эпителизации раны, срокам нормализации показателей периферической крови, высеваемости микрофлоры на 3 и 5 день лечения.



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.