WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Биоценотическая активность гликополимеров и состав основных метаболитов пресноводных высших растений в условиях загрязнения водоема

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Фучеджи Оксана Александровна

БИОЦЕНОТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ГЛИКОПОЛИМЕРОВ И СОСТАВ

ОСНОВНЫХ МЕТАБОЛИТОВ ПРЕСНОВОДНЫХ ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ В

УСЛОВИЯХ ЗАГРЯЗНЕНИЯ ВОДОЕМА

03.00.16 – экология

03.00.04 – биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Саратов – 2008

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего

профессионального образования «Саратовский государственный университет

имени Н.Г. Чернышевского» на кафедре биохимии и биофизики и в Институте

биохимии и физиологии растений и микроорганизмов Российской академии наук в лаборатории биохимии

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

Коннова Светлана Анатольевна

доктор биологических наук, профессор

Игнатов Владимир Владимирович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Попов Николай Владимирович

доктор биологических наук

Соколов Олег Игоревич

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Ульяновский государственный

университет»

Защита состоится «19» декабря 2008 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.243.13 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского» по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, д. 83, аудитория № 61, E-mail: biosovet@sgu.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в Зональной научной библиотеке имени В.А. Артисевич ГОУ ВПО «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского».

Автореферат разослан «17» ноября 2008 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета С.А. Невский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Одна из самых значительных проблем, с которой столкнулось человечество в конце XX в. – нарастающий дефицит чистой пресной воды. Значительная часть водных экосистем под воздействием антропогенных факторов функционирует в режиме высоких нагрузок химическими, радиоактивными и иными поллютантами. Высшим водным растениям (ВВР) отводится ведущая роль в регуляции потоков углерода, растворимых минеральных веществ и кислорода в пресноводных экосистемах. К настоящему времени доказано участие водных растений в процессах очищения водоемов, загрязненных тяжелыми металлами, нефтепродуктами, пестицидами и радионуклидами (Розенцвет и др., 1999; Кравец и др., 1999; Ulen, Tonderski, 2005). Существенную роль в самоочищении пресноводных водоемов играют также и растительно-микробные ассоциации прибрежной мелководной зоны (Эйнор, 1987; Chang et al., 2006). В формировании взаимоотношений между представителями фитопланктона, микроорганизмами и ВВР участвуют метаболиты различного происхождения и химической природы, в том числе углеводы и аминокислоты (АК) (Хирная, Федий, 1980; Остроумов, 2004; Van Donk, van de Bund, 2002).

Флора пресноводных макрофитов Волгоградского водохранилища представлена 161 видом сосудистых растений. Характерно преобладание видов семейств Poaceae, Cyperaceae, Polygonaceae и Potamogetonaceae; лидирует род Potamogeton (Седова, Болдырев, 2007). Растения семейства Potamogetonaceae участники различных пищевых цепей в гидроценозах, рассматриваются как важные компоненты системы их самоочищения и перспективные модельные объекты для мониторинга трофности водоемов. В работах многих авторов показано, что в микробиоценозах рдестовых зарослей постоянно присутствуют бактерии родов Pseudomonas, Xanthomonas, Micrococcus, Escherichia (Лукина, Смирнова, 1988; Бурковский, Столяров, 2000; Бухарин, Немцева, 2003). Между микроорганизмами и макрофитами реализуются, главным образом, ассоциативные взаимоотношения, однако, механизм и метаболиты, являющиеся наиболее значимыми для их формирования, изучены слабо. Исследование особенностей метаболизма гидробионтов, живущих в загрязненных водоемах и принимающих участие в их очищении, имеет кроме теоретического интереса и большое практическое значение. Понимание механизмов улучшения качества воды позволит подойти к направленной индукции самоочищения и к использованию биохимических характеристик растений в оценке экологического состояния водных экосистем.

Цель и задачи исследования. Целью работы является выявление влияния антропогенного загрязнения воды на соотношение основных метаболитов и состав водорастворимых гликополимеров в биомассе высших водных растений, а также роли гликанов в формировании бактериоценоза.

Для реализации цели исследования решались следующие задачи:

1) выявить влияние загрязнения воды на содержание и состав липидов, свободных аминокислот и углеводов разной полимерности в биомассе представителей погруженных и полупогружённых высших водных растений;

2) провести анализ химического состава водорасторимых гликополимеров рдеста пронзённолистного;

3) изучить активность полисахаридов по отношению к бактериям, широко распространенным в водном окружении макрофитов;

4) исследовать in vitro влияние полисахарида рдеста на индукцию синтеза цитокинов фагоцитирующими мышиными макрофагами.

Научная новизна. Выявлен характер влияния повышенных концентраций азота, хлора и углеводородов в водоеме на соотношение основных метаболитов в биомассе представителей трёх видов ВВР, типичных для Волгоградского водохранилища, определены биохимические показатели наиболее перспективные для мониторинга антропогенного загрязнения окружающей среды. Впервые получена информация о составе жирных кислот (ЖК) липидов рдеста пронзённолистного, особенностях моносахаридного состава минорных полисахаридов (ПС) этого растения. Впервые показано влияние водорастворимых ПС рдеста на формирование видового состава пресноводного бактериоценоза, на индукцию синтеза цитокинов фагоцитирующими мышиными макрофагами.



Научно-практическая значимость. Выявленные изменения биохимических показателей биомассы растений могут быть использованы для мониторинга состояния гидроценоза на участках, где антропогенное загрязнение водоема имеет эпизодический характер и не очевидно. Полученные данные о химическом составе водорасторимых гликополимеров макрофитов необходимы для характеристики физиолого-биохимических процессов в растениях, существующих в условиях стресса. Результаты анализа активности растительных ПС в отношении микроорганизмов вносят существенный вклад в понимание механизма формирования бактериального окружения растений. Полученные растительные ПС могут стать основой для производства перспективных нетоксичных иммунотропных препаратов, учитывая выявленное влияние их на активность клеток иммунной системы животных. Результаты диссертационной работы используются в ходе преподавания студентам биологического и химического факультетов Саратовского государственного университета специализированных курсов «Основы гликологии» и «Методы химии углеводов», а также при подготовке курсовых и дипломных работ студентами этих факультетов. Представленные в диссертации разработки включены в учебно-методическое пособие для студентов и аспирантов, специализирующихся в области биохимии растений и микроорганизмов.

Апробация работы. Материалы исследований, изложенные в диссертации, были представлены на: конференции «Фундаментальные и прикладные аспекты функционирования водных экосистем: проблемы и перспективы гидробиологии и ихтиологии в ХХI веке» (Саратов, 2001); 1-й и 2-й Региональных школах-конференциях молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой» (Саратов, 2002; 2004); 6-й, 8-й, 9-й и 10-й Международных Пущинских школах конференциях молодых ученых «Биология – наука 21-го века» (Пущино, 2002; 2004 – 2006); 2-й и 4-й Всероссийских конференциях «Химия и технология растительных веществ» (Казань, 2002; Сыктывкар, 2006); Международной конференции: «International Symposium on Biochemical interactions of Microorganisms and Plants with technogenic environmental pollutants» (Саратов, 2003); VI Всероссийской школе – конференции по водным растениям «Гидроботаника 2005» (Борок, 2005); Всероссийской конференции «Молекулярные механизмы взаимодействия микроорганизмов и растений: фундаментальные и прикладные аспекты» (Саратов, 2005); Международной конференции «Проблемы биодеструкции техногенных загрязнителей окружающей среды» (Саратов, 2005); IX Съезде Гидробиологического общества РАН (Тольятти, 2006); Всероссийской конференции аспирантов и студентов по приоритетному направлению «Рациональное природопользование» (Ярославль, 2006); I конференции молодых ученых медико-биологической секции поволжской ассоциации государственных университетов (Ульяновск, 2007); научных конференциях аспирантов и молодых ученых Саратовского государственного университета (Саратов, 2005; 2008).

Доклад «Активность полисахаридов рдеста пронзённолистного в отношении микроорганизмов», представленный на Всероссийском конкурсе инновационных проектов аспирантов и студентов по приоритетному направлению «Рациональное природопользование» (Ярославль, 2006), был удостоен диплома I степени.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 20 работ, в числе которых 3 статьи в изданиях перечня ВАК РФ.

Декларация личного участия. Автор провел в 2001 – 2007 гг. сбор необходимого растительного материала, принимал непосредственное участие в планировании и проведении экспериментальной части работы, самостоятельно осуществлял обработку полученных данных. Доля личного участия автора в подготовке и написании совместных публикаций составляет 25 – 70%.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. В ответ на изменение содержания углеводородов, соединений азота и хлора в воде водоема происходят изменения соотношения липидов, состава жирных кислот, моносахаридного состава углеводов и накопление свободных аминокислот в биомассе погруженных и полупогружённых высших водных растений.

2. Рдест пронзённолистный содержит в своей биомассе ряд водорастворимых гликополимеров, принимающих участие в формировании бактериального окружения растений.

3. Полисахарид рдеста пронзённолистного способен вызвать in vitro усиление синтеза цитокинов фагоцитирующими макрофагами.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 156 страницах машинописного текста, включает 31 рисунок и 11 таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, четырех глав с изложением полученных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и библиографического списка, включающего 248 источников отечественной и зарубежной литературы. В приложении приведены ИК-спектры полисахаридов рдеста пронзённолистного.





Содержание работы

Во введении обосновывается актуальность исследования, сформулированы основная цель и задачи, научная новизна и научно-практическая значимость исследования.

Глава 1. СОСТАВ ПОЛИСАХАРИДСОДЕРЖАЩИХ БИОПОЛИМЕРОВ ПРЕСНОВОДНЫХ ВЫСШИХ ВОДНЫХ РАСТЕНИЙ И ИХ ВЛИЯНИЕ НА

БАКТЕРИОЦЕНОЗ

(обзор литературы)

На основании анализа литературы приводится эколого-морфологическая характеристика широко распространённых в акватории р. Волги у г. Саратова представителей ВВР (Кокин, 1982; Эйнор, 1992; Седова, Болдырев, 2007). Рассматриваются различные точки зрения относительно роли ВВР в самоочищении водоемов (Кравец и др., 1999; Розенцвет и др., 2005). Материалы главы включают данные о химическом составе растительных тканей и молекулярных механизмах детоксикации растениями различных поллютантов (Белова, 1992; Остроумов, 2004). Особое внимание уделяется составу и роли углеводных метаболитов ВВР (Звягинцев и др., 1993; Оводов, 1998; Бухарин, Немцева, 2003), их участию в различных внутриводоёмных процессах. Рассматриваются данные о перспективах использования гликанов макрофитов в качестве индукторов иммунного ответа.

Глава 2. Материалы и методы исследования

Материалом исследования служили пресноводные травы: рдест пронзённолистный (Potamogeton perfoliatus L.), элодея канадская (Elodea canadensis Michx.) и тростник обыкновенный (Phragmites communis Trin.). Сбор растений проводили в период с 2001 по 2007 г., на выбранных для исследования участках мелководий р. Волги у г. Саратова. Концентрацию ионов аммония в пробах воды определяли фотометрическим фенол-гипохлоритным методом (Лурье, Рыбникова, 1974), углеводороды – гравиметрическим способом. Экстракцию липидов из биомассы ВВР осуществляли по методике (Кейтс, 1975). Общее количество липидов определяли гравиметрическим методом (Северин, Соловьева, 1979), количественный анализ нейтральных липидов проводили в соответствии с работой Кабара и Чена (Kabara, Chen, 1976), а гликолипидов колориметрически по реакции с антроновым реагентом (Северин, Соловьева, 1979). Определение состава ЖК в виде метиловых эфиров выполняли с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) на хроматографе «Биохром 1», а метилирование в соответствии с методом, описанным в работе (Mayer et al., 1985).

Состав и содержание АК в экстрактах растений определяли на аминокислотном анализаторе ААА-339 (ЧССР). ПС выделяли из биомассы ВВР методами водно-спиртовой и водной экстракций. Экстракты концентрировали упариванием при пониженном давлении и фракционировали гель-фильтрацией на носителях Sephadex G-50 и Sepharose CL-4B («Pharmacia», Швеция). Детекцию продуктов разделения в элюате проводили с помощью дифференциального проточного рефрактометра LKB 2142 (LKB, Швеция). Дополнительно строили элюционные профили по углеводам (Dubois et al., 1956). Количественное определение разных групп углеводов в биомассе растений выполняли методом, предложенным в руководстве (Плешков, 1976). Определение моносахаридного состава ПС выполняли методом ГЖХ на хроматографе Hewlett-Packard 5890 с капиллярной колонкой Ultra 2 (Hewlett-Packard, США). ИК-спектры образцов ПС, запрессованных в таблетках с KBr, получали на спектрофотометре IR-75 с приставкой для микрообразцов (Carl Zeiss, ГДР).

Исследования активности растительных ПС по отношению к бактериям выполняли на грамотрицательных микроорганизмах Azospirillum brasilense Sр245, Xanthomonas campestris B-610, Escherichia coli K-12, Pseudomonas fluorescens B-1471 и грамположительных бактериях Micrococcus luteus B-109, полученных из коллекции ИБФРМ РАН. Исследование влияния гликополимеров рдеста на выживаемость бактерий изучали, используя метод диффузии в агар (Лабинская, 1978). Относительную гидрофобность бактериальной поверхности анализировали методом солевой агрегации. Хемотаксис бактерий изучали на полужидком агаре с помощью теста Адлера (Adler, 1966). Перитонеальные (ПМФ) и альвеолярные (АМФ) макрофаги выделяли от беспородных белых мышей-самцов по общепринятым методикам (Практикум по иммунологии, 2001). В качестве объекта фагоцитоза использовали бактериальные клетки E. coli Ca 52. Провоспалительные цитокины, продуцируемые макрофагами в процессе фагоцитоза (ИЛ-1- и ФНО-), определяли с помощью иммуноферментной моноклональной тест-системы (набор реактивов «цитокиновый тест» ООО «Цитокин» г. Санкт-Петербург). Результаты учитывали на Multiskan Plus version 2,01 при = 492 нм.

Глава 3. ИЗМЕНЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА БИОМАССЫ ВЫСШИХ

ВОДНЫХ РАСТЕНИЙ В ОТВЕТ НА ЗАГРЯЗНЕНИЕ ВОДЫ



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.