WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 12 |

Растворимый fas при онкологических заболеваниях

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

АББАСОВА Светлана Георгиевна

Растворимый Fas при онкологических заболеваниях

14.00.14. онкология

03.00.04. биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

МОСКВА 2008

Работа выполнена в Российском онкологическом научном центре им. Н.Н. Блохина РАМН

Научные консультанты:

Член-корреспондент РАМН, профессор Н.Е.Кушлинский

Член-корреспондент РАН, профессор В.М. Липкин

Официальные оппоненты:

Заведующий лабораторией молекулярной эндокринологии НИИ канцерогенеза ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, доктор биологических наук, профессор Красильников Михаил Александрович

Заместитель Генерального директора ОАО «Всероссийский научный центр диагностики и лечения», заведующий отделом биотехнологии ВНЦДЛ, доктор биологических наук, профессор Свешников Петр Георгиевич

Заведующий лабораторией прогноза эффективности консервативной терапии опухолей ФГУ «Московский НИИ онкологии им. П.А. Герцена Росмедбиотехнологий», доктор биологических наук, профессор Сергеева Наталья Сергеевна

Ведущая организация:

ФГУ Российский научный центр рентгенорадиологии МЗ и СР РФ

Защита диссертации состоится «____»_______________2009 г. в «___» часов на заседании Диссертационного совета (Д.001.017.02) ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН по адресу: 115478, г.Москва, Каширское шоссе, 24.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН (115478, г.Москва, Каширское шоссе, 24)

Автореферат разослан «____» ___________2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Барсуков Ю.А.

Список условных сокращений

ДОМЖ - доброкачественные опухоли молочной железы

ДОЯ - доброкачественные опухоли яичников

ДТЗ - диффузный токсический зоб

ИФА - иммуноферментный анализ

KPP - колоректальный рак

МА - моноклональные антитела

НК - натуральные киллеры

РМЖ - рак молочной железы

РТМ - рак тела матки

РЩЖ - рак щитовидной железы

РЯ - рак яичников

УКЗ - узловой коллоидный зоб

ЦТЛ - цитотоксические лимфоциты

ЩФ - щелочная фосфатаза

FADD - белок, содержащий домен смерти, ассоциированный с активированным Fas

FasL - Fas-лиганд

FLICE - FADD-подобная ICE-протеаза

FLIP - FLICE-ингибирующий белок

IFN - интерферон

IL - интерлейкин

sFas - растворимый Fas

uPA - активатор плазминогена урокиназного типа

VEGF - фактор роста эндотелия сосудов

Общая характеристика работы.

Актуальность проблемы. Гомеостаз многоклеточного организма поддерживается точно выверенным балансом между процессами пролиферации, дифференцировки и гибели клеток. Одним из основных механизмов элиминации опасных для организма клеток, к числу которых относятся вирус-инфицированные, опухолевые клетки, а также клетки, закончившие свой жизненный цикл, является апоптоз, или программированная клеточная гибель. Это очень сложный механизм, на различных этапах которого задействованы многочисленные факторы и рецепторы клеточной гибели, а также ряд адапторных белков, приводящий, в конечном итоге, к активации внутриклеточных протеаз и самоуничтожению опасной для организма клетки. Любые сбои в этом сложном процессе приводят к развитию серьезных патологий, в том числе к возникновению и росту злокачественных опухолей. Злокачественность новообразований определяется не только огромным пролиферативным потенциалом составляющих их клеток, но и устойчивостью этих клеток к действию факторов, регулирующих процессы дифференцировки и клеточной гибели.

Fas/APO-1/CD95 – является одним из ключевых рецепторов, запускающих программу самоуничтожения клетки (Itoh и соавт., 1991; Oehm и соавт., 1992). Экспрессия Fas показана почти во всех органах - в тимусе, почках, печени, сердце, легких, он также экспонирован на поверхности активированных лимфоцитов, натуральных киллеров, вирус-инфицированных и опухолевых клеток (Nagata and Golstein, 1995).

Индукция Fas-опосредованного апоптоза в клетке происходит после взаимодействия Fas с его лигандом - FasL. Механизм Fas-опосредованного апоптоза хорошо изучен: идентифицированы основные белки, участвующие в передаче апоптотического сигнала от активированного Fas, установлены их структура и функции. Устойчивость клеток к Fasзависимому апоптозу определяется как нарушениями в экспрессии, структуре, и функционировании белков, опосредующих Fas-зависимый апоптоз, так и повышенной продукцией растворимого Fas (sFas) этими клетками. Растворимый Fas дистантно ингибирует действие FasL, позволяя клеткам-продуцентам растворимого Fas уйти от противоопухолевой защиты организма. С помощью молекулярно-биологических методов было показано, что sFas является продуктом альтернативного сплайсинга полноразмерной мРНК Fas (Cheng и соавт., 1994; Cascino и соавт., 1995). Идентифицировано несколько растворимых изоформ Fas, среди которых преобладает одна – FasdelTM, или FasExo6Del, остальные изоформы продуцируются в незначительных количествах (Cascino и соавт., 1995; Cascino и соавт., 1996).



Актуальность настоящего исследования определяется необходимостью определения значения растворимого Fas в сыворотке крови при онкологических заболеваниях различного гистогенеза и локализации в прогнозе заболевания, а также в оценке устойчивости опухоли к применяемой терапии в конкретной кли­нической ситуации.

Цель исследования Разработка и характеристика сэндвич-ИФА для определения концентрации растворимого Fas в сыворотке крови, изучение связи показателей sFas с основными клиническими, морфологическими и некоторыми биохимическими характеристиками опухолевых процессов и его значения в прогнозе онкологических заболеваний.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать разработанный нами сэндвич-ИФА для количественного определения sFas в сыворотке крови человека – оценить предел детекции тест-системы и воспроизводимость результатов анализа. Дать иммунохимическую характеристику моноклональных антител (МА), на основе которых разработан сэндвич-ИФА.

2. С помощью пептидного фагового дисплея определить структуру эпитопов для МА к полноразмерному Fas человека, на основе которых разработан сэндвич-ИФА, с целью выявления спектра изоформ sFas, которые должна детектировать разработанная тест-система.

3. Определить концентрацию sFas в сыворотке крови онкологических больных с наиболее часто выявляемыми опухолями (новообразования молочной железы, яичников, эндометрия, костей, толстой кишки, надпочечников и щитовидной железы) и провести анализ показателей sFas в зависимости от основных клинических, морфологических и некоторых биохимических критериев опухолевых процессов и определить его значение в прогнозе заболеваний.

4. Изучить корреляцию показателей sFas в сыворотке крови онкологических больных с показателями наиболее важных патогенетических факторов: активатора процесса неоангиогенеза в опухоли – VEGF, провоспалительного цитокина, ингибитора Fas-зависимого апоптоза – IL-6, уровня содержания рецепторов эстрогенов в опухоли при раке молочной железы, общей активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови при новообразованиях костей, уровня содержания активатора плазминогена (uPA) в ткани опухолей щитовидной железы.

Научная новизна. Разработана и охарактеризована оригинальная отечественная тест-система для количественного определения растворимого Fas в сыворотке крови человека, не уступающая аналогичным тест-системам, описанным в литературе.

С помощью разработанной тест-системы впервые на большом клиническом материале определена концентрация и проведен анализ показателей растворимого Fas в сыворотке крови больных новообразованиями различного морфогенеза и локализации в сравнении с соответствующими показателями практически здоровых людей. Впервые определены связь sFas с основными клиническими, морфологическими и некоторыми биохимическими характеристиками опухолевых процессов и его значение в прогнозе заболевания при раке яичников, раке тела матки, раке коры надпочечников и остеогенной саркоме, а также предиктивное значение sFas в оценке эффективности неоадъювантной лучевой терапии при колоректальном раке.

Практическая значимость исследования состоит в разработке оригинальной отечественной иммуноферментной тест-системы для количественного определения растворимого Fas в сыворотке крови человека, а также в установлении значения этого белка как фактора прогноза при раке яичников, раке тела матки, раке коры надпочечников и остеогенной саркоме, а также его предиктивного значения в оценке эффективности неоадъювантной лучевой терапии при раке толстой кишки.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Разработанная тест-система на основе МА SA-7 и SA-8 может применяться для количественного определения sFas в сыворотке и плазме крови человека и других биологических жидкостях. Присутствие sFasL и других компонентов сыворотки крови не влияет на результаты количественного определения sFas. Разработанная нами тест-система должна детектировать основную изоформу sFas - FasExo6Del и три минорных изоформы sFas -FasExo4Del, FasExo4,6Del и FasExo4,7Del.
  2. Концентрация и частота выявления sFas в сыворотке крови больных новообразованиями различного морфогенеза и локализации достоверно превышают соответствующие показатели практически здоровых людей.
  3. Показатели sFas в сыворотке крови связаны с основными клиническими характеристиками заболевания (стадия опухолевого процесса, размер опухолевого узла, степень дифференцировки опухоли и характер ее роста) при раке яичников, раке тела матки, раке толстой кишки и адренокортикальном раке.
  4. Показатели sFas достоверно не различаются при злокачественных и доброкачественных новообразованиях молочной железы, костей, яичников и надпочечников, тогда как рак щитовидной железы характеризуется более высокими показателями sFas в сыворотке крови, чем доброкачественные и гиперпластические процессы щитовидной железы. Одновременно высокие уровни sFas, VEGF и IL-6 в сыворотке крови характерны для злокачественных новообразований.
  5. Высокий уровень sFas в сыворотке крови является неблагоприятным фактором прогноза для больных остеогенной саркомой, раком яичников, раком тела матки и адренокортикальным раком.
  6. Высокая концентрация sFas в сыворотке крови является неблагоприятным предиктивным фактором эффективности применения неоадъювантной лучевой терапии при колоректальном раке в пожилом возрасте.

Апробация работы:





Материалы диссертации доложены на научно-практическом симпозиуме «Клиническая лаборатория на пороге XXI века: синтез традиций и новаций», (Москва, 12-14 октября 1999 года); на VII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 10-14 апреля 2000 года); на 2-ом съезде онкологов стран СНГ (Киев, 23-26 мая 2000 года); на 7th Biennial Meeting of the International Gynecological Cancer Society (Rome, Italy, September 26-30, 1999); на XI Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 19-23 апреля 2004 года); на Конгрессе «Национальные дни лабораторной медицины России-2004» (Москва 20-22 октября 2004г.); на Российской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 24-25 июня 2004 г.); на XII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 18-22 апреля 2005 г.); на I Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов «Актуальные вопросы патологической анатомии» (Орел, 31 мая-2 июня 2005 г.); на X Российском онкологическом конгрессе (Москва, 21-23 ноября 2006 г.); на XIII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 3-7 апреля 2006 г.). Диссертационная работа апробирована на совместной научной конференции лаборатории клинической биохимии, лаборатории клинической иммунологии, х/о опухолей молочной железы, х/о проктологии, х/о диагностики опухолей НИИ КО, лаборатории молекулярной эндокринологии НИИ канцерогенеза ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН; кафедры онкологии и кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики ФПДО МГМСУ; лаборатории нейрохимии ФИБХ РАН 14 октября 2008 г.

Полученные результаты используются в практике лаборатории клинической биохимии НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН и в учебном процессе на кафедре клинической биохимии и лабораторной диагностики ФПДО ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет Росздрава».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 41 работа в отечественных и зарубежных журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей описание материалов и методов и 8 глав результатов собственных исследований; заключения, выводов, списка цитируемой литературы. Общий объем диссертации 272 страниц машинописного текста. Список литературы включает 84 отечественных и 448 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 67 таблицами и 26 рисунками.

Материалы и методы исследования

Общая характеристика обследованных больных

В настоящее исследование были включены 1061 первичных больных злокачест­венными и доброкачественными новообразованиями различного гистогенеза и лока­лизации, из них 861 женщины и 200 мужчин, в возрасте от 14 до 80 лет. В общей группе пациентов были больные новообразованиями молочной железы (141), костей (99), яичников (347), тела матки (111), толстой кишки (113), щитовидной железы (141) и коры надпочечников (109).

Группу контроля составили 457 практически здоровых людей, 332 женщины и 125 мужчин, в возрасте от 17 до 76 лет.

Диагнозы всем больным были установлены впервые на основании результатов клинических исследований и подтверждены данными гистологического исследования, определение концентрации sFas в сыворотке крови проводили до начала специфи­ческого лечения.

Больных классифицировали по стадиям согласно международной классификации по системе TNM (Cancer TNM>

Группу больных новообразованиями молочной железы составили 119 женщин от 28 до 82 лет с первичным РМЖ и 22 пациентки с доброкачествен­ными новообразованиями и фиброзно-кистозной болезнью в возрасте от 33 до 58 лет, которые были обследованы и получали лечение в НИИ клинической онкологии Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН в период с декабря 1999г. по ноябрь 2003г.

Проводили определение концентрации sFas и общей активности щелочной фосфатазы у 99 больного новообразованиями костей (61 мужчина и 38 жен­щин) в возрасте от 14 до 59 лет. Определение концентрации VEGF проводили только у больных остеогенной саркомой и опухолью Юинга. Новообразования костей были представлены следующими нозологическими едини­цами: первичная остеогенная саркома (32), вторичная остеогенная саркома (1), паростальная остеогенная саркома (1), периостальная остеогенная саркома (1), первич­ная хондросаркома (17), вторичная хондросаркома (1), опухоль Юинга (10), злокачественная фиброзная гистиоцитома кости (9), гигантоклеточная опухоль кости (10), плазмоцитома (1), гемангиоэндотелиома (1), гемангиоперицитома (1), хордома (3), липома кости (1), доброкачественная ос­теобластома (2), хондробластома (3), хондрома (1), костно-хрящевой экзостоз (2), анев­ризмальная костная киста (2).



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 12 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.