WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 |

Молекулярно-генетический анализ тапеторетинальной абиотрофии в республике башкортостан

-- [ Страница 1 ] --

Представлены сведения о предстоящей защите диссертации

Гринберг Эльвира Римовна

«Молекулярно-генетический анализ тапеторенальной абиотрофии в республике Башкортостан»

03.00.15 – генетика

медицинские науки

Д.001.016.01

ГУ Медико-генетический научный центр РАМН

115478, Москва, ул. Москворечье, 1, МГНЦ РАМН,

e-mail: genreprlab@mtu-net.ru

представлена на сайте МГНЦ РАМН – 11.04.2007

Предполагаемая дата защиты диссертации – 15.05.2007

(автореферат должна прислать…

На правах рукописи

Гринберг Эльвира Римовна

Молекулярно-генетический анализ тапеторетинальной абиотрофии В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН

03.00.15 – генетика

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва 2007

Работа выполнена в лаборатории молекулярной генетики человека Института биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Хуснутдинова Эльза Камилевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Поляков Александр Владимирович

кандидат медицинских наук, доцент

Прытков Александр Николаевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО Российский Государственный

Медицинский Университет Росздрава

Защита состоится "______" _______________2007г. в _________часов

На заседании Диссертационного совета Д 001.016.01 при ГУ Медико-генетическом научном центре РАМН по адресу: Москва, 115478, ул. Москворечье, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ МГНЦ РАМН

Автореферат разослан "______" _______________2007г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Доктор биологических наук, профессор Л.Ф. Курило

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Тапеторетинальная абиотрофия (ТРА) - наследственное заболевание с первичным диффузным поражением фоторецепторов и пигментного эпителия сетчатки, при котором отмечаются характерные функциональные изменения и типичная картина глазного дна с пигментными костными тельцами. ТРА – наиболее распространенное заболевание из всех дистрофий сетчатки, выявляемое с частотой 1:4000 населения (Hamel C. et al., 2006). Типы наследования ТРА разнообразны и их частота существенно различается в разных популяциях: рецессивная форма, в среднем, встречается с частотой 20-35%, доминантная – с частотой 9-43% и сцепленная с полом – с частотой 8-45%. Высока частота спорадических форм ТРА – 23-48% (Rivolta C. et al., 2002). В настоящее время установлено, что разнообразие клинически форм ТРА обусловлено различными мутациями в генах, кодирующих белки каскада фототрансдукции, зрительного цикла, цитоскелета фоторецепторов и пигментного эпителия сетчатки. Наиболее частой причиной возникновения ТРА являются мутации в генах родопсина (RHO), трансретинальацетилазы (RPE65) и периферина (RDS/PRPH2) (Phelan J.K. et al., 2000; Maubaret C., Hamel C., 2005). Мутации в гене родопсина обуславливают развитие 25-30% всех случаев аутосомно-доминантных форм ТРА. Мутации в гене RPE65, ответственны за 2% всех случаев ТРА, 6-12% всех аутосомно-рецессивных ТРА (Gu S. et al., 1997; Rivolta C. et al., 2002) и 16% случаев возникновения амавроза Лебера (Morimura H. et al., 1998). Мутации в гене RDS/PRPH2 являются причиной 5-10% случаев аутосомно–доминантной формы ТРА (Sohocki M. et al., 2001; McNally N. et al., 2002). Высокий удельный вес тапеторетинальной абиотрофии среди наследственных дегенераций сетчатки, инвалидизирующее течение и отсутствие эффективных терапевтических методов ставят проблему изучения этого заболевания и проведения профилактических мероприятий, направленных на предотвращение возникновения повторных случаев заболевания в отягощенных семьях, в число первостепенных и социально-значимых. Для проведения эффективной целенаправленной профилактики необходимо выяснение популяционно-географических закономерностей распространения заболевания. В последние годы идет интенсивное накопление знаний о дегенерациях сетчатки, расширяются возможности проведения дополнительных методов исследования, разрабатываются методы ДНК-диагностики, поэтому в настоящее время особый интерес представляет молекулярно-генетическое исследование ТРА, направленное на выявление первичного генетического дефекта заболевания, что позволит в будущем проводить дифференциальную, пресимптоматическую и пренатальную диагностику ТРА.

Цель и задачи исследования. Целью исследования является изучение распространенности тапеторетинальной абиотрофии и анализ генов родопсина (RHO), трансретинальацетилазы (RPE65) и периферина (RDS/PRPH2) у больных с тапеторетинальной абиотрофией и в контрольной группе из Республики Башкортостан.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

  1. оценить распространенность тапеторетинальной абиотрофии в Республике Башкортостан;
  2. провести поиск мутаций и полиморфных вариантов гена родопсина (RHO) у больных с ТРА из Республики Башкортостан;
  3. провести поиск мутаций и полиморфных вариантов гена трансретинальацетилазы (RPE65) у больных с ТРА из Республики Башкортостан;
  4. провести поиск мутаций и полиморфных вариантов гена периферина (RDS/PRPH2) у больных с ТРА из Республики Башкортостан;
  5. создать национальный компьютерный регистр «Тапеторетинальная абиотрофия» в Республике Башкортостан.

Научная новизна. Впервые получены данные по распространенности ТРА в Республике Башкортостан, которая составила 21 на 105 населения, что сопоставимо с уровнем распространенности в европейских популяциях. Проведенный впервые анализ мутаций генов родопсина (RHO), трансретинальацетилазы (RPE65) и периферина (RDS) у больных ТРА из РБ позволил установить, что к диагностически значимым мутациям, приводящим к развитию ТРА у больных из РБ, относятся P347L, R252P в гене RHO и R91W, 927delС в гене RPE65. Впервые обнаружены две новые мутации R252P в гене RHO и 927delС в гене RPE65 у 3 членов одной семьи с ТРА. Впервые у больных ТРА и в контрольной группе здоровых индивидов из РБ установлены различия в характере распределения частот генотипов по полиморфным локусам 910C>G(Q304E), 929G>A(R310K), 1013A>G(D338G) и 1054C>T гена периферина (RDS/PRPH2).



Научно-практическая значимость. Полученные данные представляют практический интерес для понимания молекулярно-генетических механизмов возникновения ТРА и позволяют предложить новые направления в разработке подходов для ДНК-диагностики ТРА. Результаты исследования могут быть использованы при чтении спецкурсов в медицинских ВУЗах и на курсах повышения квалификации медицинских работников. Национальный автоматизированный регистр «Тапеторетинальная абиотрофия» в РБ обеспечивает эпидемиологический мониторинг заболевания и оптимизацию лечебно-диагностической и диспансерной работы офтальмологов.

Положения, выносимые на защиту:

  1. Распространенность ТРА в Республике Башкортостан сопоставима с показателями распространенности ТРА в странах Европы.
  2. В гене RHO идентифицировано две мутации: P347L, новая мутация R252P и два изменения нуклеотидной последовательности у больных ТРА из Республики Башкортостан.
  3. Существуют статистически значимые различия в характере распределения частот аллелей и генотипов IVS3+4c>t гена родопсина (RHO) у больных с ТРА и в контрольной группе здоровых индивидов из Республики Башкортостан.
  4. В гене RPE65 идентифицировано две мутации: R91W, новая мутация 927delС и один полиморфизм у больных ТРА из Республики Башкортостан.
  5. Существуют статистически значимые различия в характере распределения частот генотипов по полиморфным локусам 910C>G(Q304E), 929G>A(R310K), 1013A>G(D338G) и 1054C>T гена периферина (RDS/PRPH2) у больных с ТРА и в контрольной группе здоровых индивидов из Республики Башкортостан.

Апробация работы. Результаты исследования были представлены на Ежегодных конференциях Европейского общества генетики человека (ESHG) в 2005 (г. Прага, Чехия), 2006 (г. Амстердам, Нидерланды); Пятом (V) съезде Российского общества медицинских генетиков в 2005 (г. Уфа); Всероссийской научно-практической конференции «Вопросы офтальмогенетики» в 2005 (г. Москва); 10-й Пущинской школы-конференции молодых ученых в 2006 (г. Пущино); 9-й Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей в 2006 (г. Санкт-Петербург); Международной конференции «Генетика в России и мире», посвященной 40-летию Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН в 2006 (г. Москва); 7-ом Балканском съезде по генетике человека (BMHG) в 2006 (г. Скопье, Македония); Ежегодной конференции Европейского общества по исследованию зрения и глаз (EVER) в 2006 (г. Виламура, Португалия).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 190 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц и 75 рисунков. Список литературы включает 224 источника.

Материалы и методы

Общая характеристика выборки больных и контрольной группы.

Для проведения эпидемиологических исследований использована база данных по больным, состоящим на учете в ГУ Уфимском научно-исследовательском институте глазных болезней АНРБ с клиническим диагнозом тапеторетинальная абиотрофия и материалы ежегодных отчетов офтальмологической службы РБ за 2001 – 2005 гг., предоставляемых ЦРБ и ЛПУ г. Уфы в распоряжение Медико-информационного аналитического центра МЗ РБ.

Молекулярно-генетический анализ проведен для 123 неродственных больных (62 женщины и 61 мужчина), а также членов их семей (всего 180 человек). Забор крови больных осуществляли на базе ГУ Уфимского научно-исследовательского института глазных болезней АНРБ, ГОУ Уфимской коррекционной специализированной школы-интерната для детей с нарушениями зрения №28 г. Уфы и в ходе экспедиционных выездов в районы РБ. Клиническая картина обследованных больных: 120 неродственных больных с диагнозом ТРА на разных стадиях заболевания (периферическая и смешанная формы) и 3 неродственных больных с диагнозом амавроз Лебера. По возрасту манифестации заболевания больные разделились на три группы: первая группа – пациенты, первые признаки заболевания у которых появились в I декаде жизни (43,6%), вторая группа – пациенты с манифестацией заболевания во II декаде (36,3%), третья группа - пациенты, первые признаки заболевания у которых появились в III декаде и позже (20,1%). По этническому составу больные распределились следующим образом: 37 русских, 32 татар, 26 башкир, по 1 представителю удмуртской, украинской, таджикской, узбекской, табасаранской, еврейской национальностей, 2 представителя чувашской, 4 представителя марийской национальностей и 16 метисов от межнациональных браков вышеперечисленных этносов. Контрольная группа состояла из образцов ДНК 133 неродственных клинически здоровых индивидов, сопоставимых по полу, возрасту и этнической принадлежности с обследуемой группой (все индивиды из группы контроля были обследованы в ГУ УфНИИГБ АНРБ). Для сравнения по этнической принадлежности были выбраны представители трех основных этнических групп – русских (50 человек), татар (50 человек) и башкир (50 человек), – проживающих на территории РБ.





Методы исследования.

Выделение геномной ДНК проводили методом последовательной фенольно-хлороформной экстракции из цельной венозной крови (Mathew C.C., 1984).

Для поиска мутаций в генах RHO, RDS/PRPH2 и RPE65 были использованы оригинальные пары олигопраймеров, фланкирующих кодирующие области этих генов, сайты сплайсинга и прилегающие интронные области (Dryja T. P. et al., 1991; Morimura H. et al., 1998; Van Lith-Verhoeven J.C. et al., 2003). Праймеры для 5 экзона гена RHO и 4 экзона гена RPE65 были подобраны с помощью приложения PrimerSelect 5.05 из пакета программ DNAStar Inc (1993-2002).

Поиск мутаций и полиморфных вариантов генов RHO, RDS/PRPH2 и RPE65 осуществляли методом SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism) (Orita et al., 1989). Денатурацию амплифицируемых фрагментов ДНК проводили стандартным щелочным методом. Фрагменты с измененной электрофоретической подвижностью, обнаруженные при помощи SSCP-анализа подвергались секвенированию на автоматическом секвенаторе ABI Prism модель 310 (Applied Biosystems, USA) согласно протоколу фирмы производителя. Анализ результатов секвенирования проводили при помощи приложения BioEdit v.5.0.9 (1997-2001), MegAlign из пакета программ DNAStar Inc. (1993-2002). Оценку влияния выявленных замен на вероятность возникновения/потери сайтов сплайсинга проводили при помощи программы Splice Prediction using Consensus Sequences (WebGene): http://www.itba.mi.cnr.it/webgene.

ПДРФ-анализ был использован для подтверждения наличия нуклеотидных замен у пробандов, их кровных родственников и в группе контроля, а также для поиска мутаций в «горячих точках» гена RHO. Использованные рестрицирующие эндонуклеазы и соответствующие буферные растворы произведены фирмой НПО «Fermentas» (Латвия). Рестрикционный анализ проводился согласно протоколам фирмы-производителя. Подбор рестрицирующих эндонуклеаз, узнающих определенную нуклеотидную последовательность, проводили с помощью приложения MapDraw из пакета программ DNAStar Inc (1993-2002) и WebCutter 2.0 ( http://firstmarket.com/cutter/cut2.html ).

Математическую обработку результатов исследования проводили с помощью пакета программ статистического анализа Primer of Biostatistics v.4.03 (Glantz A., 1998). Для выявления случаев накопления ТРА в различных районах Республики Башкортостан использовано F-распределение (Животовский Л.А., 1991). Карта территориальной распространенности ТРА в РБ построена с помощью пакета программ ArcView GIS v. 3.0 [http://www.esri.com].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

  1. Распространенность тапеторетинальной абиотрофии в Республике Башкортостан

На 1 января 2007 года в республике было зарегистрировано 858 пациентов с ТРА (449 женщин и 409 мужчин), что определило уровень распространенности заболевания 21 на 105 населения. Проведенное исследование выявило неравномерный характер распространения ТРА на территории РБ – от 0 до 30 на 105 населения (рис.1). Заболевание зарегистрировано в 48 из 54 административных районов и в 18 из 21 города РБ. Выявлены районы с высокими показателями распространенности ТРА (более 25 на 105 населения): Бурзянский, Балтачевский, Аургазинский, Благовещенский, Чекмагушевский и Бирский. При статистическом анализе показателей распространенности тапеторетинальной абиотрофии, достоверных случаев накопления ТРА в отдельных районах Республики Башкортостан установлено не было.

 Распространенность тапеторетинальной абиотрофии на территории-0

Рисунок 1. Распространенность тапеторетинальной абиотрофии на территории Республики Башкортостан.



Pages:   || 2 | 3 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.