WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Эффективность программы массового обследования новорожденных на муковисцидоз

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Кусова Залина Ахсаровна

Эффективность программы массового обследования новорожденных на муковисцидоз

03.02.07 – Генетика

14.01.08 – Педиатрия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва 2011

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Медико-генетическом научном центре РАМН

Научные руководители доктор биологических наук, Петрова Ника Валентиновна доктор медицинских наук, профессор Каширская Наталья Юрьевна
Официальные оппоненты доктор медицинских наук, профессор Петрин Александнр Николаевич
доктор медицинских наук, профессор Волков Игорь Константинович
Ведущая организация Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования Российская медицинская академия последипломного образования

Защита состоится «14» июня 2011 г. в ___ часов на заседании Диссертационного ученого совета Д 001.016.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук Медико-генетическом научном центре РАМН (115478, Москва, ул. Москворечье,1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Медико-генетического научного центра РАМН по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д.1.

Автореферат разослан «______»___________________ 2011 г.

Учёный секретарь диссертационного совета Д 001.016.01

по защите докторских и кандидатских диссертаций,

доктор медицинских наук, профессор Зинченко Р.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Муковисцидоз (МВ, CF; OMIM:219700) – частая наследственная полиорганная патология, обусловленная мутацией в гене трансмембранного регулятора проводимости CFTR, манифестирующая, как правило, в раннем детском возрасте. На сегодняшний день, во всем мире, профилактика наследственных заболеваний имеет огромное медико-социальное значение. Так обследование новорожденных на МВ в первые месяцы после рождения, является одним из методов, позволяющих обеспечить доклиническое выявление заболевания. В мире, неонатальный скрининг на МВ успешно проводится более тридцати лет. Как показал многолетний опыт зарубежных исследователей, активное диспансерное наблюдение вновь выявленных больных, своевременное начало комплексного лечения, позволяет предотвратить или, по крайней мере, замедлить развитие осложнений, ведущих к ранней инвалидизации. Подтверждением этому является рост числа больных взрослого возраста, произошедший в мире за последние десятилетия (Donna L., et al.1999; Brice P., et al.2007; Erika J., et al.2007; Southern K., et al.2007; Castellani C., et al.2009).

В России обследование новорожденных на МВ проводится не так давно-с июня 2006 года в рамках приоритетного проекта “Здоровье”. В нашей стране скрининг на МВ проводится по схеме ИРТ/ИРТ/потовый тест, с использованием в качестве биохимического маркера иммунореактивного трипсиногена. По данным европейского консенсуса неонатальная гипертрипсиногенемия в популяции обнаруживается с частотой 1 на 100-200 здоровых новорожденных. Кроме того, причиной повышения уровня ИРТ в крови новорожденных, помимо МВ, может быть ряд врожденных и наследственных патологий, таких как: внутриутробная гипоксия плода, внутриутробные инфекции, перинатальный стресс, незрелость плода, коньюгационная желтуха новорожденных, хромосомные перестройки и др., а также гетерозиготное носительство мутаций в гене CFTR, как следствие функциональной недостаточности поджелудочной железы (Scotet V., et al. 2001; Gomez Lira M., et al. 2001). Доля ложноотрицательных результатов скрининга с использованием различных протоколов обследования, не превышает 3% (данные по европейским странам).

Несмотря на небольшой срок существования программы неонатального скрининга на МВ в РФ (около 4,5 лет), в московском регионе за этот период диагностировано более шестидесяти детей. До настоящего времени оценку эффективности раннего выявления и последующего пресимптоматического лечения детей с МВ в России не проводили. С учетом этого были сформулированы цели и задачи настоящего исследования.

Целью данного исследования является оценка эффективности программы массового обследования новорожденных на МВ в России, на примере г. Москвы.

Задачи исследования:

  1. Оценить достоверность метода двукратного определения концентрации иммунореактивного трипсиногена в плазме крови новорожденных (ИРТ/ИРТ), выбранного в качестве диагностического теста неонатального скрининга на МВ в РФ.
  2. Сравнить протокол скрининга ИРТ/ИРТ со схемой ИРТ/ДНК, используемой при обследовании новорожденных на МВ в большинстве зарубежных стран.
  3. Оценить клиническую эффективность неонатального скрининга на примере сравнения тяжести течения МВ у больных, выявленных по скринингу, и диагностированных по симптомам заболевания.
  4. Изучить частоту мутаций в гене CFTR (CFTRdele2,3(21kb), F508del, Idel507, 1677delTA, 2184insA, 2143delT, 2183AA>G, 2184delA, 394delTT, 3821delT, L138ins) в выборке новорожденных с высоким уровнем ИРТ после первого этапа неонатального скрининга.
  5. Рассчитать условную вероятность МВ, носительства или не носительства мутаций в гене CFTR у новорожденных с гипертрипсиногенемией после каждого из двух этапов обследования.

Научная новизна и практическая значимость.



Впервые в РФ дана оценка эффективности программы неонатального скрининга на МВ, проводимой в нашей стране по схеме ИРТ/ИРТ/потовый тест. Рассчитаны критерии достоверности протокола обследования: чувствительность и специфичность метода, предсказательная ценность положительного и отрицательного результатов, отношение правдоподобия, доля ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

Научно обоснована необходимость ранней диагностики МВ, с последующим динамическим наблюдением вновь выявленных больных и проведением комплекса лечебно-профилактических мероприятий. Продемонстрированы особенности течения заболевания у пациентов, диагностированных в разном возрасте.

Предложен алгоритм обследования и наблюдения больных МВ, выявленных по неонатальному скринингу для внедрения в российские центры МВ.

Показано влияние гетерозиготного носительства мутантных аллелей гена CFTR на внешнесекреторную функцию поджелудочной железы у новорожденных.

Рассчитаны условные вероятности МВ, носительства или не носительства мутаций в гене CFTR у новорожденных с положительным скринингом после первого и второго этапов обследования, необходимые для медико-генетического консультирования российских семей группы риска по МВ.

Положения, выносимые на защиту.

  1. Протокол неонатального скрининга ИРТ/ИРТ, используемый в качестве диагностического теста на МВ в РФ, обладает высокой чувствительностью, не менее 96,77%, и специфичностью не менее 99,82%. Доля ложноположительных результатов после первого этапа обследования составляет 0,01035 (1:97), при повторном определении уровня ИРТ в плазме крови новорожденных - снижается до 0,00178 (1:558). Величина ожидаемых ложноотрицательных результатов метода не превышает 3% (0,03). Вероятность гипертрипсиногенемии после двукратного определения концентрации ИРТ (+LR) в 537 раз выше у детей с МВ, по сравнению со здоровыми детьми. Положительная предсказательная ценность (+PV) метода ИРТ/ИРТ равна 0,00332.
  2. Метод двукратного определения ИРТ в крови новорожденных уступает протоколу ИРТ/ДНК по чувствительности (96,77% против 100%), большей вероятности ложноположительных (0,00178 против 0,000344) и ложноотрицательных показателей (0,03 против 0). Несмотря на это, является наиболее оптимальным для использования в РФ, с экономической точки зрения.
  3. Определены особенности клинической картины МВ у больных, выявленных по неонатальному скринингу. По сравнению с больными, диагностированными по симптомам заболевания, для них, в большей мере, характерно хорошее самочувствие с оценкой по шкале Швахмана-Брасфильда более 70 баллов. К трем годам отмечены достоверно лучшие показатели рентгенологического индекса (p<0,05), достоверно меньшая частота обострений бронхолегочного процесса (p<0,05), обусловленная более редкой частотой высева патогенной микрофлоры (p<0,05); значимо меньшая частота декомпенсации кишечного синдрома(p<0,05); лучшие показатели физического статуса, включая массо-ростовой индекс (p>0,05).
  4. Среди новорожденных с гипертрипсиногенемией после первого этапа скрининга на МВ, суммарная частота обнаруженных мутантных аллелей гена CFTR (F508del, CFTRdele2,3(21kb), 2143delT, 2184insA, 3821delT), а также частота гетерозиготных носителей, достоверно выше тех же частот в российской популяции (0,0231 против 0,0068; p<0,05; 0,0358 против 0,0134 p<0,05).
  5. Условная вероятность МВ, носительства или не носительства мутаций в гене CFTR у новорожденных c гипертрипсиногенемией после первого ИРТ - теста, составляет 1, 0,0345 и 0,0095, после повторного обследования - 0,78, 0,0067 и 0,0012 соответственно.

Апробация работы

Результаты диссертационной работы были представлены на Заседании диагностической группы Европейского общества МВ (Париж, Франция, 2010 год), Школе по МВ (Воронеж, 2010 год), 33-й Европейской конференции по МВ (Валенсия, Испания, 2010 год), на семинарах в научно-консультативном отделе МГНЦ РАМН. Работа апробирована и рекомендована к защите на заседании Ученого совета МГНЦ РАМН 20 апреля 2011 года.

Личный вклад автора.

Автором проработана отечественная и зарубежная литература по теме диссертации. Проведен подбор материала исследования: образцов высушенных пятен крови 1254 новорожденных с гипертрипсиногенемией, обследованных по скринингу на МВ в 2008 году. Выделение образцов ДНК из пятен крови выполнено автором лично; анализ частых мутаций в гене CFTR проведен совместно с сотрудниками лаборатории генетической эпидемиологии МГНЦ РАМН Петровой Н.В., Васильевой Т.А. Также автором лично сформированы клинические группы исследования, проведен анализ историй болезни, статистическая обработка полученных результатов; расчет критериев достоверности протоколов скрининга ИРТ/ИРТ, ИРТ/ДНК, расчет условной вероятности МВ, а также относительной частоты 11-ти частых мутаций в гене CFTR у новорожденных с гипертрипсиногенемией.





Описание собственных исследований, обработка и обсуждение результатов, формулировка выводов и подготовка статей к публикации выполнена автором самостоятельно.

Публикации

Основные результаты исследования представлены в 12 научных работах, в том числе в 3-х статьях в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ соискателям ученой степени кандидата медицинских наук.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Текст работы изложен на 119 страницах машинописного текста, иллюстрирован 22 таблицами, 6 рисунками и 7 схемами. Библиографический указатель включает 157 источников, из которых 130 иностранные.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИСЛЕДОВАНИЯ

Оценка достоверности протоколов скрининга ИРТ/ИРТ, ИРТ/ДНК, проведена на основании расчетов качественных признаков: чувствительности, специфичности, предсказательной ценности положительного и отрицательного результатов, отношения правдоподобия, а также, доле возможных ложноположительных и ложноотрицательных результатов, проведенных по общепринятой методике.

Проанализирована база данных пациентов, наблюдающихся в отделении МВ поликлиники ДГКБ№13 им. Н.Ф.Филатова (зав. отделением к.м.н. Шерман В.Д.). Сформированы две группы исследования. Первую группу составили 19 детей больных МВ (ср. возраст 3,8±0,08 лет), выявленных по неонатальному скринингу в 2006 - 2007 годах. Вторую группу составили 20 пациентов (ср. возраст 8,24±0,74 лет), у которых диагноз был заподозрен по клиническим проявлениям. Для достоверности сравнения оценивали течение заболевания в первые три года жизни детей в обеих группах. Основные критерии отбора, которых придерживались при составлении выборки, включали следующие пункты: возраст пациентов на момент исследования не менее трех лет; наличие медицинских сведений о пациенте до момента постановки диагноза МВ. Оценивали показатели физического статуса в возрасте одного, двух и трех лет жизни включительно; время появления первых симптомов заболевания; возраст установления диагноза и начала базисной терапии; частоту декомпенсации кишечного синдрома, характер и частоту обострений респираторного синдрома; результаты микробиологического исследования бронхиального секрета, данные рентгенологического индекса (РИ) и балльной оценки тяжести течения заболевания по шкале Швахмана-Брасфильда, в модификации С.В. Рачинского и Н.И. Капранова.

Для исключения возможного специфического влияния на клинические фенотипы больных мутаций различных классов, проведен анализ генотипов по гену CFTR. В обеих группах дефекты гена CFTR представлены т.н. «тяжелыми» мутациями I и II класса.

С целью определения частоты 11-ти частых мутаций в гене CFTR (CFTRdele2,3(21kb), F508del, Idel507, 1677delTA, 2184insA, 2143delT, 2183AA>G, 2184delA, 394delTT, 3821delT, L138ins - 69,5% от всех мутантных аллелей у российских больных), частоты гетерозиготных носителей, и расчета условной вероятности МВ, носительства или не носительства мутантных аллелей гена CFTR среди новорожденных с гипертрипсиногенемией, а также для сравнения протоколов ИРТ/ИРТ и ИРТ/ДНК, проведен анализ образцов ДНК 1254 новорожденных с высоким ИРТ I - тестом. Все дети родились в 2008 году в г. Москве.

Выделение геномной ДНК из образцов пятен крови, нанесенных на фильтровальную бумагу, проведено с использованием набора реактивов DiatomTM DNA Prop (ООО «Изоген») в соответствии с рекомендациями производителя. Анализ одиннадцати мутаций в гене CFTR проведен методом мультиплексной ПЦР с последующим анализом длин амплифицированных фрагментов ДНК методом электрофореза в полиакриламидном геле. Для определения нуклеотидных замен проведен гидролиз амплифицированных фрагментов соответствующей рестриктазой. Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием программы Excel Microsoft Office (“Microsoft”), Statistica 6.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Оценка критериев достоверности протоколов неонатального скрининга на муковисцидоз.

Для оценки эффективности программы массового обследования новорожденных на МВ в г. Москве, нами проанализированы результаты скрининга за четыре с половиной года (2006-2010гг.), также рассчитаны показатели достоверности метода ИРТ/ИРТ. В г. Москве за этот период обследовано 557344 ребенка (табл. 1).

Таблица1. Итоги неонатального скрининга на муковисцидоз в г. Москве.

Характеристики

2006г.

2007 г.

2008 г.

2009 г.

2010 г.

Всего



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.