WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Оптимизация алгоритма пренатальной диагностики синдрома дауна при использовании скрининговых маркеров i триместра беременности

-- [ Страница 1 ] --

Представлены сведения о предстоящей защите диссертации

Мирошникова Ирина Варленовна

«Оптимизация алгоритма пренатальной диагностики синдрома Дауна при использовании скрининговых маркеров I триместра беременности»

03.00.15 генетика

медицинские науки

Д 001.016.01

ГУ Медико-генетический научный центр РАМН

115478, Москва, ул. Москворечье, 1, МГНЦ РАМН

e-mail mirosh@med-gen.ru

предполагаемая дата защиты диссертации 14.05.2007

На правах рукописи

Мирошникова Ирина Варленовна

Оптимизация алгоритма пренатальной диагностики синдрома Дауна при использовании скрининговых маркеров I триместра беременности

03.00.15 генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва 2007

Работа выполнена в лаборатории пренатальной диагностики
ГУ Медико-генетического научного центра РАМН

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Т.В. Золотухина

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

А.Н. Петрин

кандидат медицинских наук

О.Л. Мальмберг

Ведущее учреждение: Кафедра общей и медицинской генетики

ГОУ ВПО РГМУ

Защита состоится «___»_____________2007г. в_______час.

на заседании Диссертационного совета Д 001.016.01

при ГУ Медико-генетическом научном центре РАМН

по адресу: 115478, Москва, ул. Москворечье, д.1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке

ГУ Медико-генетического научного центра РАМН

Автореферат разослан «____»__________2007г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор Л.Ф. Курило

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы

Хромосомные синдромы имеют большой удельный вес в структуре врожденных наследственных заболеваний, и наиболее актуальной является профилактика синдрома Дауна (СД), как наиболее частой хромосомной патологии.

Показания для инвазивной процедуры и цитогенетического исследования плода формируются с учетом как генетического, так и акушерского риска пациентки, сопровождающего инвазивное вмешательство. Риск инвазивной процедуры в любой срок беременности должен быть минимальным и не превышать риск генетического заболевания у плода.

Современные подходы к оценке риска наличия у плода СД указывают на необходимость массового охвата беременных женщин неинвазивными скрининговыми обследованиями. Это позволяет сформировать среди них группы “высокого” риска и своевременно рекомендовать женщинам, попавшим в группу риска, пренатальную цитогенетическую диагностику. До недавнего времени
в клинической практике обычно использовались два общепризнанных скрининговых метода во II триместре (16-21 неделя беременности): ультразвуковое исследование плода и определение уровней сывороточных маркеров (СМ) в крови матери – альфа-фетопротеина, хорионического гонадотропина, неконъюгированного эстриола
и ингибина-А.

Эти гормоны и белки имеют плодное происхождение, попадают в кровь матери через плаценту и, в основном, отражают состояние плода или плаценты. Было показано, что по мере развития беременности концентрации этих маркеров в крови матери изменяются. Каждый из них имеет определенные границы “понедельных” базовых уровней при нормально развивающейся беременности здоровым плодом. Вместе с тем было выяснено, что часто при беременности плодом с СД уровни этих СМ имеют специфические отклонения по сравнению с нормальными беременностями.

Однако использование в биохимическом скрининге беременных всех известных
в настоящее время СМ во II триместре позволяет выявить не более 65-70% случаев СД у плода [Benn P.,2005]. Выявляемость СД при ультразвуковой диагностике
во II триместре также невысока, т.к. СД у плода редко сопровождается грубыми пороками развития. Несмотря на широкий перечень известных УЗ-маркеров, встречающихся у плода при СД, эффективность УЗ-диагностики данной патологии во II триместре беременности составляет 35-60% [Vintzileos A.,1997]. Выявление патологии у плода и прерывание беременности во II триместре беременности сопряжено с моральными и акушерскими проблемами. Поэтому скрининговое обследование беременных и пренатальная диагностика в I триместре имеет явные преимущества.

Внедрение в клиническую практику современных автоматизированных подходов расчета риска при неинвазивной пренатальной профилактике СД позволяет оптимизировать и значительно повысить эффективность скрининга. Пилотные исследования, проведенные в России в последние годы, подтвердили высокую эффективность комбинированного ультразвукового и биохимического скрининга
в I триместре беременности [Кащеева Т.К., Некрасова Е.С., 2004; Золотухина Т.В.
с соавторами, 2004]. Но анализа результатов проведения скрининга I триместра беременности, формирующих стратегию обследования беременных в РФ, пока не представлено. Отсутствие отечественных компьютерных программ для обработки результатов скрининга и расчета индивидуального риска СД у плода, несомненно, затрудняет проведение такого анализа.



Цель работы

Целью настоящего исследования является оптимизация алгоритма массового обследования беременных на СД у плода; комплексная оценка эффективности ультразвуковых и биохимических маркеров I триместра беременности и включение блока расчета риска СД для I триместра беременности в оригинальную компьютерную программу “Прогноз”.

Задачи исследования

1. Сформировать репрезентативные выборки беременных женщин со здоровым плодом и с плодом с СД, обследованных в I триместре, в I и во II триместрах беременности и беременных женщин после вспомогательных репродуктивных технологий – экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

2. Определить “понедельные” базовые уровни биохимических маркеров сыворотки (ассоциированного с беременностью плазменного протеина – А (ПАПП-А), свободной -субъединицы хорионического гонадотропина человека (-ХГЧ)
и ультразвукового маркера плода – толщины воротникового пространства (ТВП))
у женщин с нормально протекающей беременностью в сроке 10-13 недель 6 дней для перехода к безразмерным единицам МоМ.

3. Создать математический алгоритм расчета риска СД у плода в I триместре беременности на основе статистических закономерностей распределения всех исследованных маркеров и внести блок расчета риска в программу “Прогноз”.

4. Оценить значимость и достоверность диагностического прогноза при различных комбинациях маркеров I триместра беременности.

5. Сравнить эффективность неинвазивной пренатальной профилактики СД
у плода при использовании коммерческой программы “LifeСycle” и программы “Прогноз” лаборатории пренатальной диагностики ГУ МГНЦ РАМН.

6. Оценить возможность участия в скрининговых программах I триместра женщин, беременность у которых наступила вследствие экстракорпорального оплодотворения.

7. Определить значимость последовательного скрининга беременных (совместных результатов скрининговых тестов, полученных в I и во II триместрах беременности) на СД у плода.

8. Сформулировать оптимальный алгоритм массового обследования беременных на СД с использованием маркеров I триместра беременности.

Научная новизна и практическая значимость работы

В процессе работы определены базовые уровни всех используемых маркеров (ПАПП-А, -ХГЧ, ТВП), созданы математические основы расчета риска СД у плода в I триместре беременности, сформулированы уравнения, описывающие зависимости концентраций маркеров I триместра от сроков беременности, получены математические параметры распределения маркеров в I триместре беременности, использующиеся при расчете индивидуального риска СД.

Проведено тестирование разработанной математической модели на обширной выборке женщин, прошедших обследование на наличие СД у плода в I триместре. Выполненная работа позволила ввести блок расчета индивидуального риска СД
у плода в I триместре беременности в программу “Прогноз”.

Проведена сравнительная оценка эффективности выявления хромосомной патологии при использовании различных комбинаций маркеров при неинвазивных скрининговых исследованиях в I триместре беременности.

Оценена эффективность использования автоматизированного подхода
в формировании группы “высокого” риска для направления женщин на инвазивную пренатальную диагностику.

Изучена целесообразность использования последовательного скрининга (результатов скрининга в I и во II триместрах в комбинации) для повышения эффективности обследования.

Определена возможность участия в скрининге на СД у плода в I триместре женщин, беременность у которых наступила вследствие применения ЭКО.

В результате проведенной работы выработан оптимальный алгоритм массового обследования беременных на СД с использованием маркеров I триместра беременности. Выработанный алгоритм и созданная программа расчета риска СД
у плода в I триместре беременности могут быть использованы региональными МГК для оптимизации скрининговых обследований беременных женщин.

Положения, выносимые на защиту

1. Исследованные в работе сывороточные и ультразвуковой маркер являются значимыми для диагностики СД и другой хромосомной патологии у плода. Признаком СД у плода могут служить пониженные уровни ПАПП-А, повышенные уровни -ХГЧ и увеличенная ТВП плода.

2. Разработан математический алгоритм расчета риска СД у плода в I триместре беременности, включающий: уравнения, описывающие зависимости концентраций СМ от сроков беременности, статистические закономерности распределения ПАПП-А, свободной -ХГЧ, ТВП, пороговое значение риска.

3. Сформулирован оптимальный алгоритм массового неинвазивного пренатального скрининга на СД у плода при использовании маркеров I триместра беременности.

Апробация работы

Результаты исследования были представлены на V съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, Май 2005 г) и на межлабораторном семинаре ГУ МГНЦ РАМН (февраль 2007 г).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Структура и объем работы





Работа состоит из введения, обзора литературы и глав, посвященных описанию материалов и методов исследования, изложению полученных результатов и их обсуждения, содержит заключение и выводы. Работа изложена на 117 листах машинописного текста; содержит 22 таблицы и 19 рисунков. Библиографический указатель включает 131 наименование, из них 35 отечественных и 96 зарубежных работ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для иммунофлуоресцентного анализа уровней СМ использовались сыворотки женщин в I триместре беременности, в сроке с 9 недель до 13 недель 6 дней включительно. Всего было исследовано 2500 образцов сыворотки. Образцы сыворотки сопровождались анкетой, заполняемой перед взятием крови. В анкете содержались следующие данные пациентки: Ф.И.О.; дата взятия крови; дата рождения; данные УЗИ плода (копчико-теменной размер плода (КТР), ТВП, длина носовой кости плода (НК); вес беременной; акушерский анамнез; особенности течения данной беременности. Данные об исходах родов получали из уведомлений, предоставленных региональными МГК, принимавших участие в сборе материала для исследования, а также при телефонном опросе родителей или по почте.

Концентрацию ПАПП-А и -ХГЧ определяли методом лантанидного флуоресцентного иммунного анализа с разрешением по времени (тест-системы Дельфия, Wallac, PerkinElmer) по стандартному протоколу, предусмотренному производителями тест-систем. Ультразвуковое исследование проводилось сотрудниками МГНЦ, врачами Центра пренатальной диагностики клинического родильного дома № 27 г. Москвы, медицинского центра “Евромед” г. Москвы, врачами ультразвуковой диагностики в региональных МГК. Инвазивные процедуры (трансабдоминальная аспирация ворсин хориона или кордоцентез) выполнялись в 27 родильном доме г. Москвы. Цитогенетическое исследование плода проводилось
в лаборатории пренатальной диагностики ГУ МГНЦ РАМН при исследовании “прямых” хромосомных препаратов из ворсин хориона или культур лимфоцитов пуповинной крови по методам, принятым в лаборатории [Золотухина Т.В.
с соавторами, 1997].

Теоретическую основу алгоритма расчета индивидуального риска СД у плода составляла формула Байеса. При этом использовалась гауссова плотность, характеризующая совместное распределение значений ПАПП-А, свободной -ХГЧ
и ТВП в группе наблюдений с СД у плода и с нормальным исходом беременности. Оценка средних значений и доверительных интервалов для средних значений проводилась общепринятыми методами и стандартными алгоритмами биометрии
с использованием Microsoft Exel 5.0 и других статистических программ. Критический уровень значимости (p) задавался величиной 0,05. Статистическую обработку данных проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Для проверки на нормальность распределения использовали критерий Колмогорова-Смирнова.

Результаты и обсуждения

Создание базы данных и математической основы расчета риска СД
в I триместре

В целях создания математического алгоритма расчета риска СД у плода
в I триместре была создана база данных, полученная при обследовании женщин
в сроке с 10 недели до 13 недель 6 дней включительно. В базу данных вошли такие показатели как возраст, вес женщины, срок беременности, данные УЗИ плода (КТР
и величина ТВП). Были сформированы две группы наблюдений. В контрольную группу вошли данные обследования 1000 беременных женщин. В опытную группу вошли 8 женщин, у которых пренатально был выявлен СД у плода.

Поскольку концентрации СМ в первую очередь зависят от гестационного срока, их принято рассчитывать в безразмерных единицах МоМ, отражающих отношение полученной концентрации СМ к таковой при нормальной беременности.

Оценка распределения концентраций СМ проводилась методом регрессионного анализа, позволяющим сформировать функциональные зависимости, характеризующие изменение концентраций ПАПП-А и свободной субъединицы
-ХГЧ от сроков беременности [Спиридонов И.Н., 2000].

Результаты расчета функции регрессии, описывающей понедельные базовые уровни СМ и ТВП, приведены на рисунке 1 и рисунке 2.

 Изменение концентрации ПАПП-А в зависимости от срока беременности -0

Рис.1. Изменение концентрации ПАПП-А в зависимости от срока беременности

 Изменение концентрации свободной субъединицы -ХГЧ в зависимости от-1

Рис.2. Изменение концентрации свободной субъединицы -ХГЧ
в зависимости от срока беременности

Уравнения, описывающие зависимость концентраций СМ от срока беременности, имели следующий вид:

ПАПП-А [мМЕ/л] = 3728,93 – 5320,57t + 1259,01t2 – 107,85t3 + 3,27t4;

Свободная -ХГЧ [нг/мл] = 197,1817 – 12,7325t + 0,0983t2.

Понедельные базовые уровни ПАПП-А и свободной субъединицы
-ХГЧ, рассчитанные в нашей работе, представлены в таблице 1.

Таблица 1. Значения собственных понедельных базовых уровней СМ для тест-систем фирмы PerkinElmer

Срок беременности (недели)

Количество

образцов

ПАПП-А,

мМЕ/л

-ХГЧ,

нг/мл

9

41

655,43

90,55

10



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.