WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

Паразитоценозы в кемеровской области и влияние дегельминтизации на резистентность организма животных

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

РЯБЦЕВА ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА

Паразитоценозы в Кемеровской области и влияние дегельминтизации на резистентность организма животных

16.00.03. – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

03.00.19. – паразитология

Автореферат

Диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Барнаул 2007

Работа выполнена на кафедре ОВД, паразитологии и зоогигиены, в Беловской межрайонной ветеринарной лаборатории Кемеровской области.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Понамарев Николай Митрофанович

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Барышников Петр Иванович.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Никифоров Иван Порфирьевич

Кандидат ветеринарных наук

Некрасов Виктор Дмитриевич

Ведущая организация: Омский государственный аграрный университет

Защита диссертации состоится «13»ноября2007г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.002.02 при Алтайском государственном аграрном университете по адресу 656922, г. Барнаул, ул. Попова, 276.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИВМ АГАУ.

Автореферат разослан «__» октября 2007 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор ветеринарных наук П.И. Барышников.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Современный уровень научных исследований, инструментальная вооруженность диагностических служб и сложившаяся ситуация в инфекционной патологии требует нового подхода к изучению паразитоценозов. Необходимо всестороннее изучение и выявление всех сочленов встречающихся ассоциатов при заразных болезнях. Такой подход позволяет правильно разработать и провести весь комплекс эффективных лечебных мероприятий. (В.М. Апатенко, 1985; Ю.Ф. Петров, 1988).

Проведение бактериологического исследования среди возбудителей инвазий животных показало, что микробы довольно часто персестируют в биологических объектах (А.М. Третьяков 2001), а развитие методов коррекции взаимоотношений между сочленами ассоциаций, являются на сегодня весьма результативным и эффективным в профилактике инфекций.

Согласно литературным данным большое количество факторов способны оказывать иммуномодулирующее действие на реактивность и резистентность организма животных, среди которых непоследнее место занимают возбудители паразитарных заболеваний и средства, используемые для борьбы с ними.

Современный подход к препаратам, применяемым в ветеринарии, выражается не только в необходимости наличия высокой эффективности, но и безопасности для животных, которые подвергаются лечению.

К настоящему времени накопилась довольно обширная литература по паразитоценозам и влияние антгельминтных препаратов на организм животных (В.М. Апатенко, 1984; Д.И. Панасюк, 1980, 1984; Е.Н. Павловский, 1995; А.М. Третьяков, 2001 и др.). Однако при анализе литературных источников выяснилось, что в условиях Кемеровской области данные исследования не проводились.

Поэтому в современных условиях назрела необходимость изучения видового состава, микробоносительства гельминтов, влияние антгельминтиков на организм животных, находящихся в условиях юга Западной Сибири.

Цель работы. Целью нашей работы явилось выяснение видового состава гельминтов, изучение микробоносительства гельминтов, влияния на микробный статус и резистентность организма животных дегельминтизации.

Задачи исследования:

  • Определить видовой состав гельминтов желудочно-кишечного тракта лошадей, кроликов и кур в данном регионе.
  • Изучить микробоносительства паразитов животных.
  • Определение биологической характеристики бактерий, персестирующих в организме возбудителей инвазии.
  • Выявить бактерицидное и бактериостатическое действие антгельминтиков.
  • Выяснить влияние разных доз альбена на резистентность организма кроликов и кур.

Научная новизна. Определен видовой состав гельминтов лошадей, кроликов и кур в Кемеровской области, обнаружено явление персестирования в гельминтах микроорганизмов, изучены их биологические характеристики. Изучено влияние альбена на естественную резистентность животных и особенности характера его действия на организм кроликов и кур. Установлено, что дегельминтизация изменяет количественный и качественный состав микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных, изучено бактериологическое и бактериостатическое действие антгельминтных препаратов.

Практическая значимость работы. Результаты исследований позволяют расширить представление о видовом составе гельминтов лошадей, кроликов и кур в Кемеровской области, о применении альбена для дегельминтизации животных. Результаты исследований вошли в методические рекомендации, одобренные НТС управления ветеринарии администрации Алтайского края (протокол № 5 от 28.11.2006 г.) и НМС института ветеринарной медицины АГАУ (протокол № 10 от 5.12.2006 г.).

На защиту выносятся следующие вопросы:

  1. Видовой состав паразитов лошадей, кроликов и кур в Кемеровской области;
  2. Культурально-морфологическая характеристика микроорганизмов выделенных из возбудителей инвазии;
  3. Влияние дегельминтизации на клинико-гематологические показатели организма кроликов и кур.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и одобрены на IX Международной научной школе – конференции студентов и молодых ученых «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий» 2005 г; Научных конференциях профессорско-преподавательского коллектива, аспирантов и соискателей АГАУ, г. Барнаул, 2005, 2006 гг.; II – Международная научно-практическая конференция «Аграрная наука сельскому хозяйству» 2007 г.



Публикация результатов исследований. Основные результаты исследований отражены в девяти статьях, в т.ч. рекомендованных ВАК 2.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 139 стр. и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 5 рисунками. Список литературы включает 162 источника, из них 29 иностранных.

Собственные исследования

2. Материалы и методы исследований

Исследования проводили в 2002-2005 гг. в Беловской межрайонной ветеринарной лаборатории, на кафедре ОВД, паразитологии и зоогигиены ИВМ АГАУ.

Материал для исследований брали в различные сезоны 2003-2005 гг., в хозяйствах Беловского района и частном секторе г. Белово, Кемеровской области от 18 лошадей, 69 кроликов, 74 голов птицы. Всего исследовано проб: фекалий– 250, крови – 200, микробиологических исследований – 2263 пробы. Для определения видового состава гельминтов лошадей, кур и кроликов использовали животных, по разным причинам выбракованных и убитых непосредственно в хозяйствах. Лошади в весенне-летне-осенний периоды находились на пастбищах, а зимой в условиях стойлового содержания. Птица и кролики при напольном и выгульном содержании в индивидуальных хозяйствах. Вакцинации и исследования проводили согласно плану эпизоотических мероприятий, а дегельминтизация животных осуществлялась нерегулярно.

Для установления гельминтофауны применяли метод полного гельминтологического вскрытия (К.И. Скрябин, 1928; В.М. Ивашкин, 1971). Матриксы получали путем промывания содержимого кишечника в специальном коническом цилиндре с ситами уменьшающегося диаметра начиная с 0,5 см и до 0,1 мм (Г.М. Двойнос, 1973). Для получения матрикса из кишечника отдельные его участки перевязывали лигатурами и разрезали. Содержимое, каждой части кишечника, помещали в верхнее сито цилиндра и промывали теплой водой из шланга. Одновременно тщательно исследовали визуально промываемую жидкость в кювете. Промывали до тех пор, пока жидкость в кювете не становилось прозрачной. Затем сита вынимали из цилиндра, содержимое вытряхивали в банки, фиксировали раствором Барбагалло и этикетировали. Кроме того, стенку кишки выворачивали и при ярком свете собирали с ее поверхности паразитов. Выборку гельминтов из матрикса производили путем просмотра его небольшими порциями (5-10 гр.) в кювете, разделенном на сектора с черным и белым фоном. Порцию матрикса заливали водой, перемешивали содержимое и выбирали всех гельминтов. В заключении порцию матрикса просматривали под бинокулярной лупой.

Сборы выделенных паразитов использовали в дальнейшем для количественного анализа инвазированности их отдельными видами и характеристики структуры гельминтологического комплекса.

Для бактериологического исследования пробы отбирали по общепринятым в микробиологии методикам. Отобрали 214 экземпляров возбудителей инвазии, (35 экземпляров Paraskaris equоrum, 83 экземпляра Gastrophilus intestinalis III стадии развития, 37 экземпляров Paranoplacephala mamillana, 25 экземпляров Cisticercus pisiformis, 34 экземпляра Ascaridia galli). Полученных гельминтов консервировали в 39%-ном водном растворе глицерина.

При бактериологическом исследовании поверхности гельминтов, их отдельно помещали в стерильные пробирки, затем проводили смыв 0,9%-ным стерильным раствором хлористого натрия. Смыв в объеме 0,5 мл высевали на МПБ и МПА.

Материал для исследования внутренних органов и тканей возбудителей инвазии брали после предварительной обработки 96° спиртом и фламбирования их поверхности, посев проводили двумя способами. В одном случае после прижигания поверхности, стерильными ножницами вскрывали тело гельминта и местом разреза несколько раз прикладывали к МПА. В другом случае после прижигания поверхности, стерильной пастеровской пипеткой прокалывали гельминта, насасывали небольшое количество жидкости и высевали ее на питательные среды.

Изучение морфологических, культуральных, тинкториальных, биохимических, гемолитических и патогенных свойств, выделенных микроорганизмов производили методами общей микробиологии (Биргер, Герхард, 1982, Б.И. Антонов, 1986). В экспериментах использовали следующие среды: МПА, МПБ, МППБ, МПЖ, глюкозо - сывороточный и кровяной МПА, среды Гисса, Эндо, Левина, Плоскирева, Клигера, висмут – сульфитный агар, молоко, желточно - солевой агар, агар Блаурока, 5 % кровяной агар.

При определении каталазной активности микроорганизмов на предметное стекло наносили каплю 3%-ного раствора перекиси водорода и в нее вносили петлей испытуемую суточную агаровую культуру. Образование пузырьков газа свидетельствовало о наличии у выделенных микробов фермента каталазы.

Чувствительность микроорганизмов к различным антибиотикам определяли методом диффузии в агар с применением стандартных дисков, содержащих антибиотики. Для этого МПА разливали по 20 мл в стерильные чашки Петри. На поверхность уплотнившейся среды наливали 1 мл одно-миллиардной взвеси (в 0,9% растворе NaCl) агаровой культуры микроорганизмов легким покачиванием чашки Петри взвесь культуры равномерно распределяли на поверхности агара. После подсушивания чашки в термостате при 37°С в течение 30-40 минут на поверхность засеянной среды стерильным пинцетом накладывали бумажные диски с различными антибиотиками на расстоянии 2 см друг от друга и края чашки. Чашки помещали в термостат на 16-18 часов при температуре 37°С. Оценку результатов проводили с учетом наличия или отсутствия зоны задержки роста микроорганизмов, размера зоны (мм) вокруг диска с антибиотиками. Зона задержки роста до 15 мм в диаметре, включая диаметр диска, является показателем малой чувствительности микроорганизмов к данному антибиотику, зона в 15-25 мм и более указывает на достаточную чувствительность испытуемой культуры. Отсутствие зоны задержки роста бактерий свидетельствует о нечувствительности к данному препарату (Т.С. Костенко, Е.И. Скаршевская, 1989).





Для определения гемолитических свойств бактериальные культуры высевали на мясопептонный агар в чашках Петри, содержащий 5% дефибринированной крови барана. При росте микроорганизмов, обладающих гемолитическими свойствами, вокруг колоний в результате лизиса эритроцитов образуется прозрачная зона. Учет реакций производили после 20-24 часов инкубирования в термостате при 37°С.

Патогенные свойства выделенных культур изучали на белых мышах. Заражение мышей производили взвесью суточной испытуемой культуры (на физиологическом растворе) внутрибрюшинно в дозе 0,5 мл в концентрации 500 млн. бактериальных клеток на 1 мл. Контрольным животным внутрибрюшинно вводили стерильный физиологический раствор. За опытными животными вели наблюдение в течение 15 суток.

Идентификацию выделенных культур микробов проводили по определителям Берджи (1997) и М.А. Сидорова и др. (1995).

Изучение влияния антгельминтиков на рост различных микроорганизмов проводили следующим образом: в расплавленный и остуженный до 45С МПА добавляли антгельминтик в концентрации 0,5%, 1%, 2%, затем смесь разливали в чашки Петри в объеме 20 мл. После этого проводили посевы испытуемых штаммов микробных культур и помещали в термостат, при температуре 37С. Учет результатов опыта проводили в точке посева через 24-48 часов. Опыт сопровождали контрольными посевами на МПА без антгельминтиков.

Динамику формирования микрофлоры кишечника изучили на 5 кроликах и 5 птицах. Материалом для бактериологического исследования служили свежевыделенные фекалии, полученные за 3 дня до и на 7, 30 сутки после дегельминтизации альбеном, до утреннего кормления. В стерильных условиях готовили ряд последовательных разведений: 1 гр свежевыделенных фекалий помещали в 9 мл 0,9% стерильного физраствора, получали разведение 1:10, далее делали ряд десятикратных, серийных разведений от 10 до 1010. Каждое разведение сеяли в объеме по 0,1 мл на МПА (для определения общего числа аэробов), элективно-солевой агар (стафилококков), агар Плоскирева (сальмонеллы), 5% кровяной агар (гемолитическая кокковая и энтеропатогенная микрофлора), среда клебсиелла 5 АСК (клебсиеллы), среду Эндо (кишечная палочка). Посевы инкубировали в термостате в течение 18 — 24 часов при температуре +37,50С для определения бактерий, при +20...+220 С в течение 4 суток для грибов. Определение количества микробов проводили путем подсчета колоний на средах в наименьших разведениях и соответствующего пересчета. Количество микробов определяли путем подсчета колоний на питательных средах и пересчета соответственно степени разведения высеваемого материала и выражали числом микробных тел в 1 гр. содержимого кишечника. При этом использовали формулу: М=N х 10 n +1,

где М число микробов в 1 гр. фекалий; N количество выросших колоний на чашке или в пробирке; n степень разведения материала.

Для идентификации выделенных культур проводили микроскопические исследования с целью определения морфологических особенностей микробов, отношение их к окраске по Граму.

В опытах о влиянии альбена на организм животных и птиц использовали 20 голов кроликов в возрасте 624 месяцев и 20 голов кур в возрасте 1024 месяцев, которых разделили на 4 группы по 5 голов в каждой. Животные и птица содержались в клетках по группам. Животным первой группы препарат давали в дозе 0,5 г/кг живой массы с кормом на всю группу однократно, во второй группе в дозе 0,2 г/кг, в третьей в дозе 0,05 г/кг. Животные четвертой группы служили контролем, им препарат не давали. Пробы для гематологического, иммунологического и копрологического исследования отбирали до и на 3, 7, 15 и 30-й день после назначения препарата. Утром до кормления у них брали кровь, измеряли температуру, пульс, частоту дыхания, а также учитывали общее состояние животных, аппетит, жажду. Все пробы проводили в одни и те же дни у подопытных и контрольных животных. Полученные в процессе наблюдений данные сравнивали с исходными, полученными до применения препарата.

По общепринятым методикам определяли гематологические показатели: содержание эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали в счетной камере Горяева, количество гемоглобина определяли по Сали, СОЭ ставили по методу Панченкова, мазки крови окрашивали по методу Романовского – Гимзе и высчитывали лейкоформулу. В сыворотке крови определяли: уровень общего белка и его фракций рефрактометрическим методом, содержание кальция колориметрическим методом с раствором мурексида, неорганический фосфор с вонадат - молибдатным раствором и диффузным методом определяли щелочной резерв. (И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов и др., 1985).

Цифровой материал диссертации обработан математическими и статистическими методами (Н.И. Коростелева, И.Е. Рабинович, 1992) и в компьютерной программе Microsoft Excel.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.