WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 |

Влияние вакцины гриппол на радиорезистентность организма

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

РОГОЖИН

ДМИТРИЙ ВЛАДИМИРОВИЧ

ВЛИЯНИЕ ВАКЦИНЫ ГРИППОЛ НА РАДИОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ

ОРГАНИЗМА

03.01.01 - Радиобиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Москва – 2010

Работа выполнена на базе Федерального государственного учреждения «Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна ФМБА России»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Иванов Александр Александрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Осипов Андреян Николаевич

доктор биологических наук,

Штемберг Андрей Сергеевич

Ведущая организация: «Объединенный институт ядерных исследований», г.Дубна.

Защита состоится « __» ___________ 2010 г. в «______» часов на заседании

диссертационного совета ____________ Федерального государственного учреждения «Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна ФМБА России» по адресу: 123182, г.Москва, ул.Живописная, д.46

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ ФМБЦ им.А.И. Бурназяна ФМБА России.

Автореферат разослан «___»___________ 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

профессор Н.К. Шандала

I. Общая характеристика работы.

Актуальность исследования

Возможность повышения устойчивости организма к поражающему действию ионизирующего излучения с помощью вакцин известна давно (Клемпарская Н.Н., Раева Н.В. и Сосова В.Ф., 1963). При этом установлено, что противолучевой эффект наблюдается при использовании бактериальных и вирусных вакцин как при профилактическом, так и при лечебном их применении. Возможность использования для этих целей гриппозной вакцины, применяемой для иммунизации населения, продемонстрирована на инактивированной хроматографически чистой (тип А1 и А2) вакцине производства Омутнинского химического завода Кировской области (Иванов А.А. и соавт.,1995). Показано, что профилактическое введение этой вакцины повышало выживаемость облученных и защищенных животных по сравнению с незащищенными на 25-40 %. Однако, данная вакцина снята с производства в связи с ее слабыми специфическими иммуногенными свойствами.

В настоящее время для иммунизации населения широко применяется вакцина Гриппол, разработанная сотрудниками Государственного научного центра - Института иммунологии ФМБА России. На данный момент вакциной иммунизировано уже более 40 млн. человек. Разработчики вакцины установили, что Гриппол не только формирует специфический противовирусный иммунитет, но и повышает устойчивость организма человека к другим острым респираторным заболеваниям (Хаитов Р. М. и соавт.,2001) Однако, механизмы этой устойчивости до конца не расшифрованы. В связи с этим, представлялось актуальным исследовать динамику интерферонового статуса организма под влиянием вакцины Гриппол, поскольку система ИФН является одной из важнейших систем, обеспечивающих неспецифическую противовирусную резистентность организма.

К моменту начала работы не было обнаружено каких-либо публикаций, посвященных влиянию вакцины Гриппол на интерфероновый статус организма. В рассмотренных нами публикациях остается не изучен вопрос о противолучевой эффективности Гриппола, как вакцины массового применения, и установлении механизма повышения радиорезистентности под влиянием вакцины, что, безусловно, является актуальным и имеет не только научный, но и практический интерес.

Цель работы

Определить способность вакцины Гриппол повышать радиорезистентность, а также роль иммунологических механизмов в противолучевом действии данной вакцины.

Основные задачи исследования:

  • Исследовать противолучевое действие вакцины Гриппол.
  • Исследовать влияние вакцины Гриппол на интерфероновый статус животных и человека.
  • Исследовать влияние вакцины Гриппол на специфический иммунный ответ.
  • Установить коррелятивные связи между уровнем интерферонов и радиорезистентностью организма.
  • Обосновать возможность переноса данных о противолучевом действии вакцины Гриппол с животных на человека.

Научная новизна

Впервые изучено влияние вакцины Гриппол на радиорезистентность организма. Показано, что вакцина, введенная в дозе 0,2 мл за 14 суток до облучения (7,5 Гр), статистически достоверно повышает выживаемость мышей в опытной группе по сравнению с контрольной, на 25% и 60%, и положительно влияет на динамику массы тела, показатели периферической крови мышей при облучении в минимальной летальной дозе (6 Гр).

Введение Гриппола собакам в дозе 0,5 мл за 16 суток до облучения в дозе 2,5 Гр, оказывает положительное влияние на скорость восстановления показателей периферической крови.

Впервые выявлена взаимосвязь между уровнем противолучевой резистентности и содержанием сывороточного ИФН в периферической крови организма. Показано, что темпы падения содержания лейкоцитов периферической крови у сублетально облученных собак ниже в группе с исходно высоким до облучения содержанием ИФН в сыворотке по сравнению с аналогичными показателями в группе с низким содержанием ИФН в сыворотке.

Разработаны критерии переноса данных о противолучевых свойствах Гриппола с животных на человека. Согласно нашим данным, повышенное содержание сывороточного ИФН в сыворотке крови перед облучением повышает выживаемость животных



Положения, выносимые на защиту

  • Вакцина Гриппол обладает противолучевыми свойствами.
  • Вакцина Гриппол активирует процессы интерфероногенеза в организме животных и человека.
  • Периоды повышения радиорезистентности, формируемые после иммунизации вакциной Гриппол, совпадают со временем повышения интерферонсинтезирующей активности клеток крови.

Практическая значимость

Результаты данного исследования позволяют рекомендовать Гриппол как препарат двойного действия - антигриппозного и как средство повышения радиорезистентности. Вакцина может быть предназначена, в частности, для иммунизации работников атомной промышленности, личного состава Российской Армии, сотрудников МЧС и других групп риска радиационного воздействия. Основываясь на данных о повышении интерферонсинтезирующей способности лейкоцитов крови после иммунизации у человека (7-56 сутки) и у животных (7-21 сутки), а также на данных о том, что в период 7-21 суток у животных отмечено повышение радиорезистентности можно прогнозировать повышение радиорезистентности у человека в период 7-56 суток после иммунизации.

Экспериментальные данные, приведенные в диссертационной работе, включены в методические рекомендации по использованию показателей интерферонового статуса для прогнозирования радиорезистентности и методические рекомендации по применению вакцины «Гриппол» для повышения неспецифической противолучевой резистентности.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на ХIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство»,

VI Всероссийском конгрессе «Профессия и здоровье» и на научной конференции отдела №1 Федерального государственного учреждения Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна ФМБА России.

Публикации

По теме диссертации опубликованы 5 печатных работ (из них 2 статьи) в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура диссертационной работы:

Диссертация состоит из введения, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов и выводов. Работа изложена на 98 страницах, иллюстрирована 8 таблицами и 16 рисунками. Библиографический указатель включает в себя 123 наименования печатных источников, из них 31 на иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Экспериментальные животные

Исследования проводили на мышах CBA С57B1 (F1) самцах (масса тела 20-21г) и беспородных собаках обоего пола (масса тела 13-24 кг). Во время экспериментов животные содержались в условиях вивария, соответствующих санитарным нормам (рекомендованный рацион, свободный доступ к питьевой воде), при естественном фоне освещенности и температуре воздуха 20-22оС.

Все работы проведены в соответствии с “Общими положениями по соблюдению стандартных условий проведения опытов на животных в ИБФ” и “Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных” (Приказ Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977).

Эксперименты выполнены на 346 мышах и 15 собаках.

Группа добровольцев

Исследование влияния вакцины Гриппол на интерфероновый статус проводилось на 12 добровольцах. Группа состояла из 2 мужчин и 10 женщин в возрасте 22-30 лет, иммунизированных вакциной Гриппол (серия С Н2-0906, производитель ФГУП НПО «Микроген») в эпидемическом сезоне 2008 года. Одна иммунизирующая доза Гриппола (0,5 мл) содержит по 5 мкг гемагглютинина штаммов вирусов гриппа типов A (H1N1), A (H3N2), 11 мкг вируса гриппа типа В и 500 мкг полиоксидония. Вакцина является высокоочищенным препаратом, свободным от примесей невирионного происхождения. Консервант — мертиолят от 85 до 115 мкг/мл.

Оценка радиопротекторных свойств вакцины Гриппол.

Тотальное облучение мышей и собак проводили гамма-квантами 137Сs на установке ИГУР. Мощность дозы 1,2- 2,0 рад/сек. Контроль за мощностью дозы и ее пространственным распределением проводили с помощью термолюминисцентного дозиметра ИКС-А с использованием термолюминисцентного алюмофосфатного стекла ИС-7 с погрешностью ±10 %. В качестве модели использовали однократное равномерное радиационное воздействие, вызывающее костномозговую форму острой лучевой болезни различной степени тяжести. Использованы дозы облучения с различной биологической активностью: 6,0 (СД10/30) и 7,5 (СД 70/30) Гр для мышей и 2,5 Гр – для собак (СД 30/45).

В качестве радиозащитного средства использовали Гриппол, оценивали влияние вакцины на выживаемость и динамику массы тела мышей на 30 сутки течения ОЛБ, а также выживаемость собак на 45 сутки после облучения. Состав периферической крови облученных животных определяли с использованием гематологического анализатора Alcon-6. Гриппол вводили мышам однократно подкожно в область задней лапы в дозе - 0,5; 0,2 и 0,05 мл за 7 или 14 суток до облучения. Собак иммунизировали подкожно в область предплечья за 16 суток до облучения, доза вакцины – 0,5 мл. Контрольным животным вводили официнальный 0,9% раствор хлорида натрия - мышам 0,2 мл, собакам -0,5 мл.

Специфический ответ на иммунизацию Грипполом необлученных мышей и собак.

Для изучения специфического иммунного ответа использовалась однократная иммунизация вакциной Гриппол, мышей в дозе 0,2 мл, собак – 0,5 мл. Сроки забора крови - до иммунизации на 1,7,14,28,35 сутки.





Оценка интерфероногенных свойств вакцины Гриппол.

В эксперименте по оценке интерфероногенных свойств Гриппола облучение животных не проводилось. Мышей вакцинировали однократно внутрибрюшинно в дозе 0,2 мл. Интерфероновый статус определяли через 4 часа спустя 1, 7, 14 и 28 суток после введения вакцины. Собак иммунизировали однократно в область предплечья в дозе 0,5 мл. Забор крови проводили через 7,14,21,28,35 суток. Добровольцев иммунизировали однократно в дельтовидную мышцу (доза вакцины - 0,5 мл). Обследование проводили через 1,7,14,28 и 60 суток.

Анализ взаимоотношений уровня радиорезистентности и интерферонового статуса.

Эксперимент проводили на 15 собаках обоего пола, массой тела 12-15 кг. Животных подвергали воздействию -лучей 137Сs в дозе 2,5 Гр (СД 30/45). До облучения у животных определяли содержание ИФН в сыворотке крови и состав периферической крови. На 7-е, 14-е, 21-е, 28-у и 35-е сутки после облучения определяли клеточный состав периферической крови и скорость оседания эритроцитов. После облучения животных разделили на две группы - согласно исходным значениям сывороточного ИФН - титр ИФН 8 и титр

ИФН < 8. Затем провели сопоставление показателей выживаемости облученных собак и скорости восстановления гемопоэза с исходным уровнем сывороточного ИФН.

Схема исследования влияния вакцины Гриппол на интерферонсинтезирующую активность клеток периферической крови и специфический иммунный ответ.

Добровольцев и животных иммунизировали вакциной Гриппол за 7 и 14 суток до облучения. Мышам вводили подкожно по 0,2 мл, собакам - по 0,5 мл, добровольцам - по 0,5 мл вакцины. Обследование контрольных и опытных мышей проводили на каждом сроке опыта (динамический контроль), через 4 часа, 1, 7, 14 и 28 суток после иммунизации. Добровольцев и собак, предварительно обследовали до иммунизации, для определения титров сывороточного ИФН и интерферонсинтезирующей активности клеток крови, а затем в динамике исследования. Забор крови у собак проводили через 1,7,14,21,28,35 суток после введения вакцины и у добровольцев – через 1,7,14,28 и 56 суток. Одну часть полученных от экспериментальных животных проб использовали для определения в сыворотке крови уровня специфических антител методом РТГА (реакция торможения гемагглютинации), в другую часть добавляли гепарин (5 ед/мл) и определяли способность лейкоцитов крови продуцировать - и – ИФН после взаимодействия с индукторами.

Количественную оценку уровня специфических антигемагглютининовых антител проводили в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) в соответствии с МУ 3.3.2. 1758-03 «Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа»

Состояние системы синтеза - и - ИФН у животных определяли по уровню продукции этих цитокинов лейкоцитами, выделенными из периферической крови, после воздействия вирусным индуктором - вирус болезни Ньюкастла (ВБН) в дозе 1-10 цитопатических доз (ЦПД) на 1 лейкоцит для – интерферона и митогеном - фитогемагглютинин (ФГА) в дозе 1-10 ед/мл для – интерферона. Определение активности синтезируемого лейкоцитами ИФН у мышей и собак проводили путем титрования на культуре клеток костно-мышечной ткани эмбриона человека (диплоидный кариотип) против вируса энцефаломиокардита мышей (ЭМС). Активность ИФН у привитых добровольцев оценивали методом двухстадийного иммуноферментного анализа. На первой стадии анализа исследуемые и контрольные образцы инкубировали в лунках с иммобилизованными антителами. Имеющийся в образцах -ИФН связывается с иммобилизованными антителами. Несвязавшийся материал удаляли отмывкой. Связавшийся -ИФН взаимодействует при инкубации с конъюгатом антител к -ИНФ человека с пероксидазой хрена. После второй отмывки количество связавшегося конъюгата определяли цветной реакцией с использованием субстрата пероксидазы хрена – перекиси водорода и хромогена – тетраметилбензидина. Реакцию останавливали добавлением раствора серной кислоты и измеряли оптическую плотность растворов в лунках при длине волны 450 нм. Интенсивность желтого окрашивания пропорциональна количеству содержащегося в образце -ИФН. Титр - и -ИФН определяли по калибровочной прямой.

Методы статистического анализа.

Полученный цифровой материал обработан с помощью общепринятых методов вариационной статистики, а также встроенного пакета статистического анализа MS Excel 2003. Достоверность различий сравниваемых средних величин оценивали по t-критерию Стьюдента. Для выявления корреляций вычислялся стандартный коэффициент корреляции. Достоверность данных, полученных по выживаемости животных, оценивали методами 2 и критерием Фишера.

Расчет точности прогноза выживаемости облученных в летальной дозе животных в зависимости от исходного уровня сывороточного ИФН проводили по тесту Т. Шеллинга-Вольфеля (Малета Ю.С., Тарасов В.В., 1982).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Противолучевое действие Гриппола

В экспериментах по исследованию влияния Гриппола на выживаемость мышей, облученных в дозе 7,5 Гр, были получены следующие данные. Введение Гриппола за 14 суток до облучения повышает выживаемость мышей в опытной группе на 60%, по сравнению с контрольной. Эффект статистически значим: 2=5,2 p=0,02. Менее эффективно введение вакцины за 7 суток. Выживаемость защищенных мышей на 25% выше таковой в контроле. Эффект статистически не значим по сравнению с контрольной группой. Результаты проиллюстрированы в таблице 1.

Таблица 1 - Выживаемость мышей, защищенных Грипполом в дозе 0,2 мл до облучения гамма-квантами 137Сs в дозе 7,5 Гр.

Группа мышей



Pages:   || 2 | 3 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.