WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 |

Экспериментально-морфологическое обоснование консервации трупных донорских роговиц в условиях вакуума при гипотермии для выполнения сквозных и послойных кератопластик

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Казеннов Алексей Николаевич

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ КОНСЕРВАЦИИ ТРУПНЫХ ДОНОРСКИХ РОГОВИЦ В УСЛОВИЯХ ВАКУУМА ПРИ ГИПОТЕРМИИ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ СКВОЗНЫХ И ПОСЛОЙНЫХ КЕРАТОПЛАСТИК

03.03.04 Клеточная биология, цитология, гистология

14.01.07 Глазные болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Оренбург 2010

Работа выполнена в Оренбургском филиале Федерального государственного учреждения «Межотраслевой научно-технический комплекс «Микрохирургия глаза» имени академика С.Н.Федорова Росмедтехнологии» и Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные руководители: Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Стадников Александр Абрамович
Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор Канюков Владимир Николаевич
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Сазонов Сергей Владимирович
доктор медицинских наук Малов Игорь Владимирович
Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «___» марта 2010 года в __ часов на заседании диссертационного совета Д 208.066.04 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, зал заседаний диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию».

Автореферат разослан «___» февраля 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Шевлюк Н.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Более 100 лет прошло со дня первой успешной сквозной пересадки роговицы, выполненной Э. Цирмом, однако и в настоящее время наибольшее распространение в области трансплантологии остается за кератопластикой (Плескова А.В., Хватова А.В., 2002). Высокая потребность в кератопластике приводит во всем мире к возрастанию потребности в пластическом материале и в совершенствовании методов его консервации (Каспаров А.А., Магден Ю., 2001; Heck E., Krachmer J.H., Mannis M.J. Holland E.J., 2005). В связи с возросшим риском опасных инфекций и повышенных требований к качеству трансплантационного материала необходимо полноценное его обследование, требующее дополнительных затрат времени, что, в свою очередь, вызывает необходимость кратковременной консервации с гарантией сохранения жизнеспособности трансплантата (Сурков А.А., 2003).

Как только в трансплантационной хирургии возросли требования к пересаживаемому материалу, возникла необходимость в создании и развитии службы заготовки и консервации донорских тканей. Огромный вклад в создание сегодняшних глазных банков во всем мире внес академик В.П. Филатов. Он создал и возглавил первую специализированную лабораторию консервации тканей при Одесском научно-исследовательском Институте глазных болезней. Им в 1934 году было предложено донорское глазное яблоко хранить в стеклянном сосуде при температуре +2-+4°С.

Существует множество методов консервации роговицы, однако не все они нашли широкое распространение. Один из методов, который продолжают использовать и в настоящее время, заключается в обезвоживании роговичных трансплантатов над силикагелем (Волков В.В., Шиляев В.Г., 1976; Гольфельд Н.Г., 1976). Метод прост и позволяет длительно сохранять трансплантационный материал, однако консервированная роговица лишена жизнеспособности.

Предлагались использовать в качестве консервантов различные жидкие среды. Офтальмологам Мак Кери и Кауфман (1974) удалось создать среду, названную в их честь, которая позволила надежно консервировать роговицу на срок до 96 часов. В последующем появились ее производные с более длительным сроком хранения: Chondroitin Sulphate (Kaufman H.E., 1984), K-sol (Lindstrom R.L., 1990), Dexol (Lindstrom R.L., 1990), Optisol (Williams K.A., Coster D.J., 1993), среда Борзенка-Мороз (Борзенок С.А., Мороз З.И., Комах Ю.А. и др., 2002). Технические достижения к настоящему времени позволили предложить такие методы консервации роговицы как криоконсервация (-196°С) в жидком азоте с использованием различных крио-протекторов (Дронов М.М., 1987; Williams K.A., Muehlberg S.M., Lewis R.F., CosterD.J., 1995), гипербарическая оксигенация при гипотермии (Линник Л.Ф., Подопригора Р.Н., 1976), в вакууме (Канюков В.Н., Подопригора Р.Н., 2006) в том числе контейнеры с наноструктурированным углерод содержащим покрытием (Мусина А.Д., 2006)



До настоящего времени не существует единого мнения относительно наилучшего способа сохранения роговицы человека. Значительное количество существующих методик консервации роговицы свидетельствует об отсутствии совершенных технологий. Следует также отметить недостаточные морфологические обоснования предложенных методик в аспекте изучения диапазона изменчивости ткане- и органоспецифичности консервируемых объектов. Все это стимулирует дальнейший поиск в этом направлении.

Учитывая положительные результаты консервации донорской роговицы путем лиофилизации с последующим прозрачным приживлением послойных трансплантатов (Бордюгова Г.Г., 1980; Илатовская Л.В., 1980), мы сочли целесообразным провести исследования по разработке метода консервации роговицы в вакууме при гипотермии.

Цель исследования: морфофункциональное обоснование возможности использования трупных донорских роговиц, консервируемых в условиях вакуума при гипотермии, для выполнения сквозных и послойных кератопластик.

Задачи:

1. Изучить на светооптическом и ультраструктурном уровнях морфофункциональную характеристику трупных донорских роговиц, консервируемых в условиях вакуума при гипотермии.

2. Определить оптимальные сроки вакуумной консервации донорских роговиц.

3. Провести экспериментально-гистологические исследования биологических свойств трансплантатов (диапазона их гисто- и органотипической реорганизации) в условии культивирования донорского материала по методу Ф.М. Лазаренко.

4. Обосновать возможность применения предложенного способа консервации трупных донорских роговиц в условиях вакуума при гипотермии в клинике для выполнения сквозных и послойных кератопластик.

Научная новизна

Впервые экспериментально-гистологически, включая ультраструктурный и иммуноцитохимический анализ, выявлены структурно-функциональные изменения роговицы, консервированной в вакууме при гипотермии, определен уровень апоптоза в материале, предназначенном для трансплантации в аспекте прогнозирования исходов операций по трансплантации донорских роговиц, консервированных различными способами.

Впервые изучены имплантаты консервированной роговицы (в вакууме при гипотермии) для получения результатов цитофизиологической характеристики пересаживаемых структур, их потенциальных репаративных и индуцирующих возможностей, в условиях культивирования по методу Ф.М. Лазаренко (1959).

Практическая значимость

Разработан альтернативный способ консервации роговицы в условиях вакуума при гипотермии. Исходя из полученных данных о высоких пластических свойствах консервированной роговицы, предлагается использовать для этих целей вакуумную установку, которая эргономична, легка в обращении, экономически выгодна. Возможность хранения роговицы с сохранением ее биопластических свойств позволяет иметь достаточные запасы качественного донорского материала.

Использование для трансплантации качественного донорского материала обеспечивает благополучный исход операции, уменьшает риск послеоперационных осложнений, гарантирует успешное приживление трансплантата.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Структурно-функциональная оценка донорской роговицы, консервированной в вакууме (3-10 сутки) показывает сохранность фенотипических свойств трансплантата, коллагеновых фибрилл, что свидетельствует об устойчивости (толерантности) соединительнотканных структур роговицы к данным условиям консервации.

2. При консервации роговицы наблюдаются явления угнетенного синтеза генов белков (bcl-2, р53) и изменения в соотношении их экспрессии, что свидетельствует о нарушениях клеточных циклов, как эпителиоцитов, так и фибробластов.

3. Культивирование фрагментов роговицы, консервированной в вакууме, по методу Ф.М. Лазаренко (1959) показало морфологические признаки, характеризующие механические, прочностные ее характеристики, активизацию клеток фибробластического ряда, что свидетельствует о возможности ремоделирования, которое будет инициировать процессы репаративного гистогенеза соединительной ткани.

4. В своей совокупности полученные результаты обосновывают целесообразность использования роговицы, консервированной в вакууме для послойной кератопластики.

Внедрение результатов исследования

Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии ГОУ ВПО «ОрГМА», кафедре медико-биологической техники ГОУ ВПО «ОГУ».

Полученные данные структурно-функциональной характеристики донорской роговицы, консервированной в вакууме, служат теоретическим обоснованием использования данной роговицы для послойной кератопластики в условиях офтальмохирургических отделений и клиник города.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены и обсуждены на Российской научно-практической конференции с международным участием «Новые технологии микрохирургии глаза (актуальные вопросы морфогенеза и регенерации в офтальмохирургии) (Оренбург, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в офтальмологии» (Чебоксары, 2007); VII Западно – Сибирская межрегиональная научно – практическая конференция «Новое в офтальмологии» (Новосибирск, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Высокие технологии в офтальмологии» (Краснодар, 2008); III Всероссийской научной конференции молодых ученых с участием иностранных специалистов «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2008); Международной научно-практической конференции «Современные технологии лечения заболеваний переднего и заднего сегментов глаза» (Уфа, 2008); Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008); Российской научно-практической конференции «Новые технологии микрохирургии глаза (офтальмопатология детского возраста)» (Оренбург, 2008); IV Межрегиональной научно-практической конференции «Метрология и инженерное дело в медико-биологической практике» (Оренбург, 2009); VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Федоровские чиения – 2009» (Москва, 2009), Научно-практическая конференция «Актуальные проблемы офтальмологии» (Уфа, 2009), Российский общенациональный офтальмологический форум МНИИ ГБ им. Гельмгольца (Москва, 2009), VI съезд анатомов, гистологов и эмбриологов России (Саратов, 2009), Всероссийская научная конференция с международным участием «Клиническая анатомия и экспериментальная хирургия в XXI веке» (Оренбург, 2009).





По теме диссертации опубликовано 17 научных работ из них 4 в центральной печати рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, главы обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа иллюстрирована 30 рисунками, 2 таблицами. Список литературы содержит 220 источников, в том числе 101 иностранных. Диссертация изложена на русском языке.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы

Общая характеристика объекта исследований

Экспериментальная часть работы состояла из 3-х блоков исследований.

В первом блоке проводилась консервация роговицы свиньи в условиях вакуума при гипотермии (44 роговиц) и в среде Борзенка-Мороз (12 роговиц) в течении 3, 7, 10 и 30 суток.

Во втором блоке проводилось изучение имплантатов роговицы, консервированных в вакууме при гипотермии (24 имплантата) и в среде Борзенка-Мороз (12 имплантатов), в условиях культивирования материала по оригинальной методике Ф.М. Лазаренко (1959). Исследование выполнено на кроликах породы Schinschilla.

В третьем блоке проводилась экспериментальная послойная пересадка аллороговицы, консервированной в условиях вакуума при гипотермии (12), на кроликах породы Schinschilla.

Эксперименты проводили с соблюдением Приказа Министерства высшего и среднего специального образования СССР за №742 от 13.11.1984 Об утверждении Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных и Федеральным законом РФ «О защите животных от жестокого обращения» от 01.12.1999.

Во всех блоках исследования изучение материала проводилось на световом и электронномикроскопическом уровнях.

Консервация роговицы

Основная часть работы по консервации роговицы выполнена на системе, представляющей собой контейнер для хранения материала и вакуумный насос для откачивания воздуха. Данная система изготовлена фирмой Zepter в Menfi Industria, SpA, Италия, сертификат соответствия № РОСС IT. ME 10.A 07863. Контейнер представляет собой стеклянную ёмкость. Он снабжен специальной сеткой, изготовленной из эластомера. Сетка выполняет не только функцию подставки для размещения ёмкостей с донорскими тканями, но и служит для конденсации влаги из тканей. Максимальное разряжение, которое можно получить при использовании данной системы – 0,5 бар (~0,5 атм.), производительность 630 л/ч. Герметичность ёмкости–контейнера обеспечивается клапаном в центре крышки и силиконовой прокладкой, проходящей по её краю. Крышка универсальна, изготовлена из ударопрочного нетоксичного поликарбоната LEXAN. Ёмкость практична, безопасна, удобна в обращении, легка, устойчива к нагреванию и холоду, легко моется. Её можно стерилизовать, она интактна к агрессивными химическими веществами.

Для исследования в условиях мясокомбината были взяты свежеэнуклеировнные глаза свиней (56 глаз). Целое глазное яблоко обрабатывалось четырехкратным промыванием в стерильном 0,9% растворе NaCl, затем погружалось в раствор йода поливинилпиролидона, после чего глазное яблоко обрабатывалось 2% тиосульфатом натрия (для нейтрализации) и вновь помещалось в раствор 0,9% NaCl (А.Д. Мусина, 2006). Из глазного яблока иссекали корнеосклеральный диск и помещали на специальной подставке в емкость для хранения материала, где обеспечивался необходимый вакуум (44 объекта). В контрольном методе, после соответствующей обработки, из целого глазного яблока иссекали корнеосклеральный диск и помещали в емкость со средой Борзенка-Мороз (12 объектов). Исследуемый материал хранили 3, 7, 10 и 30 суток.

Культивирование по Ф.М. Лазаренко



Pages:   || 2 | 3 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.