WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 |

Роль хронического поражения гепатобилиарной системы самок крыс в нарушении морфофункционального состояния щитовидной железы потомства

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Солянникова Дарья Рашидовна

РОЛЬ ХРОНИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ГЕПАТОБИЛИАРНОЙ СИСТЕМЫ САМОК КРЫС В НАРУШЕНИИ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПОТОМСТВА

03.03.04 Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Оренбург, 2010

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинский государственный университет»

Научный руководитель доктор медицинских наук, профессор

Брюхин Геннадий Васильевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Валов Сергей Дмитриевич

доктор биологических наук, профессор

Сеитов Марат Султанович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертации состоится « » мая 2010 года в часов на заседании диссертационного совета Д 208.066.04 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, зал заседаний диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Автореферат разослан « » апреля 2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Н.Н. Шевлюк

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В России на протяжении нескольких десятилетий наблюдается постоянное снижение численности населения. Очевидно, что коренное улучшение сложившейся демографической ситуации возможно лишь при разрешении целого комплекса социальных, экономических, психологических и медицинских вопросов (Цинзерлинг В.А., 2002). В 2006 году в России стартовал национальный проект «Здоровье», одним из приоритетных направлений которого стала охрана материнства и детства. При этом особая роль отводится здоровью будущих матерей. Одним из очевидных препятствий для безопасного и эффективного материнства является экстрагенитальная патология, среди которой особое место занимают болезни гепатобилиарной системы, в том числе хронические гепатиты (Медведь В.И., 2004; Михайленко Е.С. с соавт., 1990; Heppard M.C.S., 2002). Многочисленными работами сотрудников кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии Челябинской государственной медицинской академии в условиях эксперимента было показано неблагоприятное влияние хронических заболеваний печени матери на морфофункциональное становление различных органов и систем потомства (Брюхин Г.В., 1991-2008; Михайлова Г.И., 1988; Грачев А.Ю., 1991; Бояков А.А., 1998; Евченко Е.В., 2004; Николина О.В., 2004; Пивень Г.В., 2004; Федосов А.А., 2004; Вторушина Е.В., 2005; Кузнецова А.Б., 2006; Леонов Н.В., 2007; Барышева С.В., 2008; Ильиных М.А., 2009; Пашнина Е.Н., 2009; Сизоненко М.Л., 2009). Общепризнанно, что в поддержании гомеостаза и резистентности организма важную роль играет эндокринная система, в том числе щитовидная железа.

В связи с этим целью настоящего исследования явился анализ структурно-функционального становления щитовидной железы потомства от самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза.

Для достижения поставленной цели нами были сформулированы следующие задачи:

  1. Оценить морфофункциональные особенности становления собственно тиреоидного эпителия щитовидной железы потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза.
  2. Исследовать содержание и уровень функциональной активности парафолликулярных клеток щитовидной железы потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза.
  3. Изучить структурно-функциональные особенности популяции тучных клеток щитовидной железы потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени в различные сроки постнатального периода.

Научная новизна

В условиях эксперимента, отражающего различные формы поражения печени (D(+)-галактозамин и E.Coli), выявлено влияние патологии гепатобилиарной системы самок крыс на морфофункциональное становление щитовидной железы потомства в различные сроки постнатального онтогенеза.

Новыми являются данные об изменении уровня пролиферативной активности тироцитов щитовидной железы потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением гепатобилиарной системы различного генеза, о чем свидетельствует изменение числа клеток, экспрессирующих на своей поверхности протеин Ki-67.

Впервые предложена функциональная классификация парафолликулярных клеток щитовидной железы по степени их дегрануляции.

Новыми являются также данные, свидетельствующие об изменении морфофункционального состояния парафолликулярных клеток в щитовидной железе потомства самок крыс с экспериментальным поражением гепатобилиарной системы.



Впервые показано, что морфофункциональные изменения щитовидной железы потомства самок крыс с экспериментальным поражением печени сопровождаются увеличением содержания и функциональной активности тучных клеток.

Практическое и теоретическое значение

Полученные в ходе проведенного комплексного исследования данные позволяют понять особенности взаимодействия различных компонентов щитовидной железы потомства при действии неблагоприятного фактора в виде поражения печени материнского организма, что расширяет представление о тканевом гомеостазе и адаптации данного органа и носит фундаментальный характер.

Проведенное экспериментальное исследование расширяет представление о роли патологии гепатобилиарной системы матери в нарушении морфофункционального становления щитовидной железы, что может быть использовано для обоснования направленной гормональной коррекции состояния детей, рожденных от матерей с патологией печени.

Результаты исследования экспериментально обосновывают необходимость выделения потомства матерей с поражением печени в группу риска в связи с нарушением становления гуморального гомеостаза в постнатальном периоде.

Результаты проведенного исследования используются в научном и учебном процессах кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии: разделы «Железы внутренней секреции», «Нарушения внутриутробного развития человека» Челябинской государственной медицинской академии и в дисциплинах: «Физиология человека и животных», «Иммунология» биологического факультета Челябинского государственного университета.

Апробация работы

Результаты исследования были представлены на IX Конгрессе Международной Ассоциации Морфологов (Бухара, 2008); на Международной гистологической конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте» (Тюмень, 2008); на научно-практической конференции, посвященной 10-летию биологического факультета Челябинского государственного университета (Челябинск, 2008); на Всероссийской научной конференции «Нейробиологические аспекты морфогенеза и регенерации» (Оренбург, 2008); на II Международной научно-практической конференции «Адаптации биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» (Челябинск, 2008); на VI итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2008); на VI Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Троицк, 2009); на конференции, посвященной 65-летию кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2009); на заседании Челябинского отделения Всероссийского общества анатомов, гистологов и эмбриологов (Челябинск, 2009, 2010).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 4 в изданиях, рекомендованных ВАК для изложения материалов докторских и кандидатских диссертаций.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 229 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы описания результатов собственного исследования, обсуждения результатов исследования, выводов, списка использованной литературы, включающего 284 наименований, в том числе 96 работ зарубежных авторов и приложения. Работа содержит 39 таблиц, 75 рисунков, в том числе 41 микрофотографию, 3 электронных микрофотографии.

Положения, выносимые на защиту

  1. Экспериментальная патология печени самок крыс, обусловленная введением E.Coli и D(+)-галактозамина, является фактором риска, оказывающим неблагоприятное влияние на антенатальное и постнатальное структурное становление щитовидной железы потомства.
  2. Структурно-функциональные нарушения становления щитовидной железы потомства самок крыс с экспериментальным хроническим поражением печени сопровождаются выраженными изменениями числа и функционального состояния внутриорганных тучных клеток.
  3. Хроническое экспериментальное поражение гепатобилиарной системы матери различной этиологии обусловливает нарушение эндокринной функции щитовидной железы потомства.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В эксперименте были использованы белые лабораторные крысы (самки) «Вистар» (301 животное, в том числе 68 взрослых самок крыс и их потомство: 233 животных из 68 пометов) в различные сроки постнатального развития (1-ые, 15-ые, 30-ые, 45-ые и 60-ые сутки). Сроки исследования выбраны с учетом общепризнанного подразделения возрастных периодов у крыс (Западнюк И.П. с соавт., 1983).

Исходя из задач настоящего исследования, экспериментальные животные были разделены на 3 группы. Первую группу составили животные от интактных матерей – контрольная группа (131 животное из 35 пометов). Во вторую группу вошло потомство от матерей с хроническим экспериментальным поражением печени с помощью E.Сoli – 1-ая экспериментальная группа (54 животных из 14 пометов). В третью группу вошли животные от матерей с хроническим экспериментальным D-галактозаминовым поражением печени – 2-ая экспериментальная группа (48 животных из 19 пометов).

Исследования проводились с учетом суточных и сезонных колебаний. Работа с экспериментальными животными проводилась в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием лабораторных животных».





Модель хронического поражения печени путем введения E.Coli. Под эфирным наркозом экспериментальному животному (самке) в три участка печени – по одной с обеих сторон у основания мечевидного отростка и справа у края реберной дуги по срединно-ключичной линии вводили 0,2 мл фильтрата шестидневной культуры E.Сoli (штамм АТСС 25922) в разведении 1:4. Разрешающую инъекцию производили через 24 часа путем введения в хвостовую вену фильтрата шестидневной культуры E.Сoli из расчета 0,3 мл/кг массы тела. Возникающие морфологические и функциональные изменения, согласно данным литературы, обнаруживают сходство с таковыми при гепатите А (Сааков Б.А. с соавт., 1967).

Модель хронического поражения печени путем введения D(+)-галактозамина. Данную модель хронического поражения печени создавали путем внутрибрюшинного введения D(+)-галактозамина гидрохлорида («Sigma-G0500», США) на 0,9% растворе натрия хлорида в дозе 250 мг/кг массы тела животного. Экспериментальный гепатит, вызываемый введением D(+)-галактозамина, по своим морфологическим, иммунологическим и биохимическим характеристикам рассматривается как адекватная модель вирусного гепатита В у человека (Венгеровский А.И., Саратиков А.С., 1988; Joker А.M., 1990; Сугробова Н.П. с соавт., 1992).

Морфологические методы исследования. Отпрепарированную щитовидную железу взвешивали на торсионных весах, определяя весовой индекс данного органа (мг), вычисляли относительную скорость роста (прирост) щитовидной железы по формуле: (M2 – M1)/M1100%, где M1 – масса органа вначале исследуемого периода, М2 – масса органа в конце выбранного периода.

Гистохимические методы исследования. Правую долю щитовидной железы после взвешивания фиксировали в 10% нейтральном формалине, а левую – в жидкости Буэна. Гистологические срезы от правой доли щитовидной железы окрашивали 0,1% раствором толуидинового синего для выявления тучных клеток. Срезы от левой доли органа окрашивали гематоксилином и эозином и импрегнировали нитратом серебра по Гримелиусу в модификации Никонова, для выявления парафолликулярных клеток (Саркисов Д.С., Перова М.П., 1991; Кветной И.М., Южаков В.В., 1996).

Иммуногистохимические методы исследования. На депарафинированных, обезвоженных срезах проводили демаскировку антигенных детерминант в СВЧ-печи в 0,01М цитратном буфере. Иммунное окрашивание проводилось стрептавидин-биотиновым пероксидазным методом. Хромогеном служил DAB+ (система «Novolink», производитель «Novocastra», Великобритания). Срезы инкубировали 24 часа с первичными моноклональными антителами к Ki-67 Antigen (Monoclonal Mouse Anti-Rat Ki-67 Antigen. Clone MIB-5). На заключительном этапе гистологические срезы докрашивались гематоксилином. Ставили позитивные и негативные контроли.

Морфометрические методы исследования. С помощью сетки Автандилова Г.Г. методом точечного счета определяли относительную объемную плотность фолликулярного эпителия, коллоида, интерфолликулярного эпителия и соединительнотканной стромы щитовидной железы (Автандилов Г.Г., 1990).

Морфометрическое исследование собственно тиреоидной паренхимы щитовидной железы проводилось при помощи лицензионной морфометрической программы «Motic Images Plus, 2.0».

Осуществлялся подсчет количества фолликулов в единице условной площади органа. Производилось изучение большего и меньшего диаметра фолликулов щитовидной железы с последующим вычислением объема фолликулов (Хмельницкий О.К., Третьякова М.С., 1998).

Производилось вычисление средней высоты тироцитов, среднего диаметра их ядер и индекса накопления коллоида (индекса Брауна) (Хмельницкий О.К., Третьякова М.С., 1998).

Уровень пролиферативной активности собственно тиреоидного эпителия щитовидной железы определялся с помощью универсального маркера пролиферации ядерного белка Ki-67 (Bullwinkel J. et al., 2006).

Анализ популяции парафолликулярных С-клеток щитовидной железы производили по общепринятой методике (Павлов А.В., 1985). При этом подсчитывалось абсолютное количество С-клеток, оценивался субпопуляционный состав клеток по степени и характеру гранулярного насыщения, а также степени дегрануляции с вычислением индекса дегрануляции.

Анализ популяции тучных клеток производили по общепринятой методике Линднер Д.П. и др. (1980). При этом подсчитывалось абсолютное количество тучных клеток и их субпопуляционный состав по уровню гранулярного насыщения и степени дегрануляции.

Метод твердофазного иммуноферментного анализа. Для оценки функционального состояния системы гипофиз – щитовидная железа определяли концентрацию в сыворотке крови свободного тироксина и тиреотропного гормона гипофиза методом твердофазного иммуноферментного анализа (Гитель Е.П., Мельниченко Г.А., 1999). Исследования производились на анализаторе StatFax 3000+ с использованием стандартных наборов реактивов фирмы «Диагностические системы» (Карпищенко А.И., 1999).

Метод электронной микроскопии. Материал для электронной микроскопии фиксировали в глутаровом альдегиде на фосфатном буфере (по Карновскому), затем в 2% тетраоксиде осмия и заливали в spurr. Полутонкие срезы окрашивали 0,1% метиленовым синим. Ультратонкие срезы толщиной 70-100 нм контрастировали по методу Рейнольдса уранилацетатом свинца и цитратом свинца. Изучали в трансмиссионном электронном микроскопе Libra-120 («Carl Zeiss & MT», Германия) в диапазоне увеличения 1200-20000. При этом производилось изучение особенностей ультраструктурного строения тироцитов щитовидной железы.



Pages:   || 2 | 3 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.