WWW.ДЕНЬСИЛЫ.РФ

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Медицина

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

Гистологическое и иммуногистохимическое исследование индивидуальной, половой и возрастной изменчивости сосудистых сплетений боковых желудочков головного мозга человека

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Юнеман Ольга Андреевна

ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ИНДИВИДУАЛЬНОЙ, ПОЛОВОЙ И ВОЗРАСТНОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ СОСУДИСТЫХ СПЛЕТЕНИЙ БОКОВЫХ ЖЕЛУДОЧКОВ ГОЛОВНОГО МОЗГА ЧЕЛОВЕКА

03.03.04– клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат

Диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

МОСКВА – 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт морфологии человека» Российской академии медицинских наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Савельев Сергей Вячеславович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

зав. лаб. нейроморфологии

ФГБУ "Научно-исследовательский институт морфологии человека" РАМН

Гореликов Петр Леонидович

доктор медицинских наук,

руководитель научно-исследовательской лаборатории компьютерных технологий в медицине МГУ им М.В. Ломоносова

Буравков Сергей Валентинович

Ведущая организация: ФГБУ " Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины" СЗО РАМН

Защита диссертации состоится «29» ноября 2012 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 001.004.01 при ФГБУ «НИИ морфологии человека» РАМН

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «НИИ морфологии человека» РАМН по адресу: 117418, Москва, ул. Цюрупы д. 3.

Автореферат разослан «__» _______ 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук Л. П. Михайлова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Изучение изменчивости сосудистых сплетений головного мозга является актуальной проблемой современной морфологии. Основной задачей в изучении морфофункциональных изменений сосудистых сплетений головного мозга человека является сопоставление событий, наблюдаемых с помощью прижизненной диагностической томографии, с морфологическими изменениями организации сосудистых сплетений на клеточном и молекулярном уровнях. Отсутствие адекватных представлений о структурных эквивалентах, выявляемых при помощи томографии изменений, не позволяет оценить масштабы и причины патологических процессов. Сосудистые сплетения секретируют 70-80% спинномозговой жидкости (Johanson, 2008). Динамика образования ликвора обладает значительно выраженной изменчивостью, но при этом до сих пор неизвестно, существует ли пропорциональное изменение размеров сосудистых сплетений с размерами головного мозга и желудочков (Цветанова, 1986; Akdogan et al., 2010). В случае если площадь поверхности, линейные размеры сосудистых сплетений изменяются непропорционально с объемами головного мозга и желудочков, по всей вероятности, можно говорить о половозрастных отличиях в нарушении механизмов регуляции водно-солевого баланса головного мозга. Таким образом, представляется необходимым изучение половозрастных особенностей организации сосудистых сплетений и объемных соотношений головного мозга, желудочков и сосудистых сплетений.

Недостаточно изучен нервный аппарат сосудистых сплетений. У исследователей нет единого мнения об источниках иннервации, а также о функциях собственных нервов сосудистых сплетений. Необходимо отметить, что большинство работ по иннервации сосудистых сплетений выполнены с применением различных методов серебрения (Sthr, 1922; Clark, 1928; Schapiro, 1931; Bakay, 1941; Дарий, 2010) или гистохимических методов (Edvinsson et. al, 1973; Edvinson et al, 1974; Edvinsson et. аll, 1975; Edvinsson et. al, 1978; Lindval, Owman, 1978; Lindval et al., 1978; Page et al. 1980; Lindval, Owman, 1981), т.е. практически отсутствуют сведения об экспрессии нейральных маркеров в ткани сосудистых сплетений. Кроме того, учитывая важную роль ферментов тучных клеток, как одного из факторов регуляции продукции ликвора, необходимо оценить степень половозрастной изменчивости распределения тучных клеток в ткани сосудистых сплетений.

Еще одним мало изученным вопросом морфологии сосудистых сплетений являются процессы конкрементогенеза. Несмотря на применение авторами различных методов исследования, на данный момент нет единого мнения о составе, источниках и причинах появления конкрементов в сосудистых сплетениях головного мозга человека. Также, несмотря на продолжительную историю изучения сосудистых сплетений, до сих пор нет сведений относительно распределения различных видов коллагена в их строме.

Цель исследования – изучение индивидуальной и половой изменчивости сосудистых сплетений боковых желудочков головного мозга человека в норме и при возрастной инволюции. Для ее достижения были сформулированы следующие задачи:

  1. Провести морфометрический и статистический анализ половой и возрастной изменчивости морфологической организации сосудистых сплетений боковых желудочков головного мозга человека.
  2. При помощи иммуногистохимических методов идентифицировать компоненты соединительной ткани (коллагенов, эластина) и изучить их распределение в строме сосудистых сплетений боковых желудочков головного мозга человека.
  3. Определить объемные соотношения головного мозга, желудочков и сосудистых сплетений по материалам компьютерной томографии.
  4. Изучить состав конкрементов сосудистых сплетений с применением гистологических, иммуногистохимических и аппаратных (исследование на синхротроне) методов.
  5. С помощью иммуногистохимических методов изучить нервный аппарат, а также половые и возрастные особенности распределения тучных клеток в сосудистых сплетениях боковых желудочков головного мозга человека.

Научная новизна



В проведенном исследовании выполнен комплексный анализ половой, возрастной и индивидуальной изменчивости организации сосудистых сплетений боковых желудочков головного мозга человека. Благодаря морфометрическим и статистическим методам показано отсутствие четких половых и возрастных изменений в строении сосудистых сплетений боковых желудочков.

Получены новые данные по распределению I-III и V типов коллагенов в сосудистых сплетениях головного мозга человека. Коллаген I типа обнаружен в эпителии сосудистого сплетения, коллагены II и V типов выявлены на поверхности эпителиальных клеток, коллаген III типа и эластин формируют соединительнотканную строму сосудистых сплетений.

Выявлена высокая степень индивидуальной изменчивости в организации желудочков и сосудистых сплетений головного мозга человека. Показано, что объем желудочков и сосудистых сплетений практически не коррелирует с объемом головного мозга, полом и возрастом.

Показано, что конкременты сосудистых сплетений состоят преимущественно из органических веществ, на поверхности конкрементов при синхротронном исследовании обнаруживается цинк. При помощи гистологического и иммуногистохимического анализа установили, что в составе конкрементов чередуются слои виментина и фибрина.

При иммуногистохимическом исследовании обнаружено, что часть нейральных маркеров экспрессируется в клетках эпителия сосудистого сплетения, подтверждая их нейроэктодермальное происхождение, в то время как нервные волокна и окончания в строме и стенках сосудов при помощи нейральных антител не выявляются.

Получены новые данные, касающиеся морфологической организации сосудистого сплетения III желудочка. При помощи гистологического и иммуногистохимического анализа показано, что сосудистое сплетение III желудочка образует единую структуру с эпифизом.

Научно-практическая значимость

Полученные в результате работы данные представляют собой детальное описание изменчивости организации сосудистых сплетений головного мозга человека, которые значительно дополняют имеющиеся к настоящему моменту сведения.

В проведенном исследовании обнаружена ведущая роль индивидуальных различий в организации желудочковой системы и сосудистых сплетений головного мозга человека. Исследователями признается, что сосудистое сплетение является основной структурой, ответственной за продукцию и резорбцию цереброспинальной жидкости и, следовательно, поддержание водно-солевого баланса головного мозга. Поэтому полученные данные необходимо учитывать при разработке новых подходов к лечению заболеваний, связанных с нарушениями ликвородинамики, таких как различные формы гидроцефалии, мигрени и т.п. Важным вопросом морфологии является вопрос регуляции продукции цереброспинальной жидкости. Нами было показано, что нервные волокна и окончания не выявляются при помощи ряда специфических нейральных маркеров. Таким образом, в вопросе регуляции продукции цереброспинальной жидкости следует учитывать роль осмотического давления, эпителия сосудистого сплетения, как производного нейроэктодермы и железы, секретирующей ряд вазоактивных веществ (вазоактивный интестинальный пептид, эндотеллин-1, адреномедуллин), а также роль ферментов и биологически активных веществ тучных клеток.

Внедрение в практику

Результаты исследования внедрены в работу кафедры анатомии человека ГБОУВПО «Рязанский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова»  Минздравсоцразвития РФ

Положения, выносимые на защиту

  1. Изучено распределение элементов соединительной ткани (коллагенов I-V типов, эластина) в сосудистых сплетениях боковых желудочков головного мозга человека.
  2. Установлено, что конкременты сосудистых сплетений боковых желудочков состоят из органических веществ, в их верхних слоях (15-20 мкм) определяется цинк. Одна часть слоев состоит из виментина, другая – из фибрина.
  3. Установлена ведущая роль индивидуальной изменчивости в организации сосудистых сплетений и желудочков и, как следствие, в процессах регуляции ликвородинамики и водно-солевого баланса головного мозга человека.
  4. Подтверждено нейроэктодермальное происхождение клеток эпителия сосудистого сплетения. Установлена возможная роль эпителия сосудистого сплетения, ферментов тучных клеток, осмотического давления в регуляции ликвородинамики и водно-солевого баланса головного мозга

Апробация работы

Результаты данной работы были представлены на X и XI конгрессах Международной Ассоциации Морфологов (Ярославль, 2010; Самара, 2012), на научных конференциях «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии» (Москва, 2010, 2011), VIII Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2010), международной научной конференции «Актуальные вопросы антропологии» (Минск, 2011), XII Международной научно-практической конференции «Наука и современность» (Новосибирск, 2011), I международной научной конференции «Современное естествознание: вопросы и ответы» (Санкт-Петербург, 2011), IV Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения – 2011» (Санкт-Петербург, 2011), на межлабораторной конференции ФГБУ «НИИ морфологии человека» РАМН (Москва, 2012).





Публикации материалов исследования

По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из разделов «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы исследования», «Результаты исследования», «Обсуждение результатов», «Выводы». Работа изложена на 134 страницах машинописного текста, содержит 46 иллюстраций и 8 таблиц. Список использованной литературы содержит 209 наименований (из них 47 в отечественных изданиях и 162 публикации в зарубежных изданиях)

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на аутопсийном материале сосудистых сплетений латеральных желудочков головного мозга 78 человек. Из них 65 человек составили основную группу (35 мужчин в возрасте от 30 до 94 лет и 30 женщин в возрасте от 44 до 96 лет), 8 человек в возрасте от 27 до 47 лет, погибшие от случайных причин, – контрольную группу. Материал был получен из коллекции лаборатории развития нервной системы ФГБУ «Научно-исследовательский институт морфологии человека» Российской академии медицинских наук, ГКБ №31 г. Москвы, бюро судебно-медицинской экспертизы №1 г. Москвы, Рязанского областного бюро судебно-медицинской экспертизы и ФГБВОУ высшего профессионального образования Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова Министерства обороны Российской Федерации. При сборе материала учитывали пол, возраст, клинический диагноз и причину смерти. Также были использованы срезы сосудистых сплетений мозга трех плодов человека в возрасте 11 и 16 недель и сосудистые сплетения латеральных желудочков монгольской песчанки, кошки, собаки и осла.

Материал фиксировали в 10% кислом или нейтральном забуференном формалине, жидкости Буэна, жидкости Карнуа или спирт-формалином по методу Леннера (1 часть 40% формалина и 2 части 80% спирта).

В работе использованы материалы компьютерной и магнитно-резонансной томографии мозга 116 человек (61 мужчин в возрасте от 8 до 72 лет и 55 женщин в возрасте от 7 до 86 лет), предоставленные отделом МРТ Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова г. Санкт-Петербурга.

Гистологические методы. Были исследованы сосудистые сплетения боковых желудочков 78 человек. Гистологические препараты приготовлены для всех образцов сосудистых сплетений. Кусочки ткани обезвоживали в спиртах восходящей концентрации, диоксане или хлороформе и заливали в парафин. Готовили серийные срезы вдоль продольной оси сосудистого сплетения и наклеивали на предметные стекла. Впоследствии срезы депарафинировали, гидратировали, проводили гистологическую окраску и заключали в бальзам. Для обзорных препаратов использовали метод окраски по Маллори. Для выявления соединительной ткани срезы окрашивали гематоксилином, пикрофуксином по методу ван Гизона. Для выявления эластина использовалась окраска орсеином по методу Тенцера-Унна. Для выявления гиалина срезы окрашивали метиленовым зеленым, фуксином, оранжем G по методу Бионди и ядерным прочным красным, метиленовым синим, хромотропом по методу Ромейса. Для выявления фибрина применяли окраску молибденовым гематоксилином Маллори по методу Шуенинова. Для выявления кальция был применен гистохимический метод Грандиса и Маинини (Ромейс, 1948).

Для выявления структур нервной ткани был применен метод импрегнации парафиновых срезов протеинатом серебра по методу Бодиана в модификации Баксиха с последующей дифференцировкой хлорным золотом (Ромейс, 1948).

Иммуногистохимическое исследование. Для проведения иммуногистохимических реакций срезы монтировали на адгезивные стекла Super Frost Plus (фирмы Menzel), депарафинировали, гидратировали и обрабатывали 3% раствором перекиси водорода для блокировки эндогенной пероксидазы. В работе использовали антитела к элементам соединительной ткани (к коллагенам I типа (фирмы Abcam), I и III типов (фирмы Sigma), II, IV и V типов (фирмы Millipore), эластину (фирмы Abcam)), нейромаркеры (к нейрон-специфическому бета 3-тубулину, нейрон-специфической энолазе, тирозингидроксилазе (фирмы Abcam), нейрофиламентам, основному белку миелина, глиальному фибриллярному кислому белку, S-100 (фирмы Lab Vision)), цитокератинам I, V, VI, VIII, XI, XVI и XVIII типов и виментину (для выявления промежуточных филаментов), а также к преальбумину (транстирретину), амилину, триптазе тучных клеток (фирмы Abcam). В качестве вторых антител использовался набор Ultra Vision Detection System (фирмы Thermo Scientific). Негативным контролем служили реакции с заменой первых антител на раствор фосфатного буфера.

Электронно-микроскопическое исследование. Для электронно-микроскопического исследования использовали кусочки сосудистых сплетений трех человек. Ткань фиксировали в 2,5% глютаровом альдегиде на 0,01 М фосфатном буфере рН 7,2 с последующей дофиксацией в 1% четырехокиси осмия на 0,01 М фосфатном буфере рН 7,2. Далее кусочки обезвоживали в спиртах восходящей концентрации пропиленоксиде и заливали в эпон-аралдитовую смесь (фирмы Electron Microscopy Science). После полимеризации смолы изготавливали ультратонкие срезы толщиной 700-800, которые монтировали на медные сетки с углеродным напылением. Ткань контрастировали уранилацетатом на стадии обезвоживания и цитратом свинца по методу Рейнольдса на сетках (Уикли, 1975). Просмотр препаратов проводили при помощи трансмиссионного электронного микроскопа «Libra 120» фирмы Carl Zeiss.



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 


Похожие работы:







 
2013 www.деньсилы.рф - «МЕДИЦИНА-ЛЕЧЕНИЕ-ОЗДОРОВЛЕНИЕ»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.